Hepariinin aiheuttaman trombosytopenian farmakogenomiikka (PHIT)

Osallistumiskriteerit: 18-vuotias tai vanhempi; Osallistujat, joilla on hepariini/PF4-vasta-aine ja SRA-testi HIT:n varalta, mukaan lukien:

osallistujat, joilla on negatiivinen hepariini/PF4-vasta-aine ja negatiivinen SRA (kontrollit), osallistujat, joilla oli positiivisia hepariini/PF4-vasta-aineita ja negatiivisia SRA-aineita (serokonversiotapaukset), osallistujat, joilla oli positiivisia hepariini/PF4-vasta-aineita ja positiivisia SRA-tapauksia (HIT-tapaukset); Hoito fraktioimattomalla hepariinilla tai pienen molekyylipainon hepariinilla (enoksapariini, daltepariini, tintsapariini) 7 päivän sisällä verinäytteestä Poissulkemiskriteerit: Alle 18-vuotias; Kyvyttömyys antaa tietoon perustuva suostumus Tässä tutkimuksessa ei ole mukana satunnaistamista. Osallistujia otetaan mukaan yhtä paljon kolmesta kategoriasta: (1) osallistujat, joiden HIT-testi on negatiivinen hepariini/PF4-vasta-aineiden suhteen (kontrollit); (2) osallistujat, joilla ei ollut HIT-testiä hepariini/PF4-vasta-aineiden suhteen (serokonversiotapaukset); (3) osallistujat, joiden HIT-testi oli positiivinen molemmille hepariini/PF4-vasta-aineille (HIT-tapaukset).

Rekrytointia helpottavat Coagulation Laboratoryn yhteistyökumppanit ja Tucsonin Banner Univerisyt Medical Centerin avainhenkilöstö. Potilaat, joilla on positiivisia ja negatiivisia hepariini/PF4-vasta-aine- ja serotoniinin vapautumismäärityksen tuloksia, tunnistetaan hyytymislaboratoriossa ja potilaan hoitajaa kysytään mahdollisesta osallistumisesta tutkimustutkimuksiin. Mikäli mahdollinen osallistuja on kiinnostunut, hän ottaa yhteyttä opintohenkilöstöltä opintokuvauksen ja mahdollisen suostumuksen saamiseksi. Vaihtoehtoisesti kliiniset yhteistyökumppanit, joita kuullaan ja jotka osallistuvat suoraan potilaiden hoitoon, voivat ottaa suoraan yhteyttä mahdolliseen osallistujaan halukkuutta osallistua tutkimukseen.

Tutkimukseen suostuvia potilaita pyydetään toimittamaan yksi noin 150 millilitran verinäyte. Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC:t) eristetään tästä näytteestä ja säilytetään -80 °C:ssa ennen käyttöä ehdotetuissa kokeissa. Genominen DNA eristetään myös näytteestä HLA-sekvensoinnin suorittamiseksi.

HIT vahvistetaan toiminnallisella serotoniinin vapautumismäärityksellä ja HIT-todennäköisyydellä kliinisen kulun perusteella. Yksityiskohtaiset tiedot kerätään osallistujan sairaalahoidosta, hepariiniannoksesta ja kestosta, verihiutaleiden määrästä, leikkaushistoriasta ja liitännäissairauksista. Osallistujien suostumuksella otetaan perifeerinen verinäyte, CD-positiiviset T-solut lajitellaan virtaussytometriaa käyttäen ja genominen DNA eristetään aiemmin kuvatulla tavalla.

TCR-valikoima ja tiettyjen TCR-varianttien osuus tietylle näytteelle määritetään käyttämällä tutkijan laboratoriossa ja ydintiloissa saatavilla olevien uusien teknologioiden yhdistelmää. Näytteen TCR-repertuaari määritetään seuraavan sukupolven sekvensointiteknologialla. Uutta Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR -pakkausta käytetään todennäköisesti, koska tämä pakkaus on optimoitu saamaan puolueeton kvantitatiivinen profiili uudelleenjärjestäytyneistä TCR-alleeleista genomisesta DNA-näytteestä. Tällä hetkellä tämä sarja on beta-testivaiheessa ja VANTAGE on yksi testipaikoista.

TCR-sekvensointi suoritetaan käyttämällä multipleksistä PCR-järjestelmää uudelleenjärjestäytyneen TCRbeta-DNA:n monistamiseksi käyttämällä alukkeita, jotka ovat spesifisiä toiminnalliselle TCR Vbeta -segmentille, kuten aiemmin on kuvattu. Genomiset templaatit monistetaan ja Vbeta 5.1 -perheen TCR-klonotyyppien havaittu suhteellinen runsaus päätellään sekvenssitiedoista käyttämällä odotuksen maksimointialgoritmia. Kansainvälisen ImMunoGeneTics-tietojärjestelmän (IMGT) määrittelemät CDR3-motiivit ennustetaan DNA-sekvenssien perusteella. Jokaisella lukemalla lasketaan paras sekvenssikohdistus vertailusekvenssejä vastaan ​​ja luetut, joiden laatupisteet ovat alhaiset, hylätään. Epäspesifisten T-solujen sulkemiseksi pois lajitteluepäpuhtauksien ja/tai stimulaatiotaustan vuoksi antigeenispesifiset kloonit, joiden esiintymistiheys on alle 1 prosentin, jätetään huomiotta.

TCR-alleelit, joiden tiedetään olevan tärkeitä tietyssä DHS:ssä, kohdistetaan käyttämällä pisara-digitaalista PCR:ää (ddPCR). ddPCR on uusi tekniikka, joka tarjoaa absoluuttisen kvantifioinnin (reaaliaikainen PCR tarjoaa suhteellisen kvantifioinnin) kohdetemplaatin öljyemulsiopisara-PCR-reaktioiden perusteella. Tutkijan laboratoriolla on kokemusta tästä uudesta tekniikasta, ja useiden tärkeiden TCR-alleelien määritykset on jo optimoitu ddPCR:llä tutkijan laboratoriossa.

Riskin minimoimiseksi tätä tutkimusta varten kerätään ylimääräistä verta samalla kun perusterveydenhuollon laboratoriot otetaan aina kun mahdollista. Osallistujia pyydetään toimittamaan 150 ml verta kvalitatiivisten immuunivasteiden testaamiseksi. Tähän tutkimukseen osallistumiseen liittyvät riskit liittyvät epätavallisiin laskimopunktion komplikaatioihin ja voivat sisältää epämukavuutta, mustelmia, infektioita ja/tai veritulpan muodostumista. Koulutettu kliininen henkilökunta valvoo potilaiden turvallisuutta ja mukavuutta.

Koehenkilöitä seurataan tutkimuksen aikana mahdollisten haittatapahtumien varalta. Vakavista haittatapahtumista ilmoitetaan IRB:lle 10 päivän kuluessa siitä, kun PI on ilmoittanut tapahtumasta. Ei-vakavat haittatapahtumat tai tapaukset, joissa protokollaa ei noudateta, raportoidaan tarkastelun jatkuessa. Oikeudenkäyntiä seurataan jatkuvasti. DSMB:tä ei ole, eikä välianalyysiä ole suunniteltu.