Pharmacogénomique de la thrombocytopénie induite par l'héparine (PHIT)

Critères d'inclusion : 18 ans ou plus ; Participants avec anticorps héparine/PF4 et test SRA pour la TIH, y compris :

participants avec anticorps héparine/PF4 négatifs et SRA négatif (témoins), participants avec anticorps héparine/PF4 positifs et SRA négatif (cas de séroconversion), participants avec anticorps héparine/PF4 positifs et SRA positif (cas de TIH) ; Traitement par héparine non fractionnée ou héparine de bas poids moléculaire (énoxaparine, daltéparine, tinzaparine) dans les 7 jours suivant le prélèvement sanguin Critères d'exclusion : moins de 18 ans ; Incapacité à donner un consentement éclairé Il n'y a pas de randomisation impliquée dans cette étude. Les participants seront inscrits en nombre égal dans trois catégories : (1) participants sans test HIT négatif pour les anticorps anti-héparine/PF4 (témoins) ; (2) participants sans test HIT positif pour les anticorps anti-héparine/PF4 (cas de séroconversion) ; (3) participants avec un test HIT positif pour les anticorps héparine/PF4 (cas de HIT).

Le recrutement sera facilité par des collaborateurs du laboratoire de coagulation et par le personnel clé de l'étude au Banner Univerisyt Medical Center - Tucson. Les patients dont les résultats des tests de libération d'anticorps anti-héparine/PF4 et de sérotonine sont positifs et négatifs seront identifiés dans le laboratoire de coagulation et le fournisseur du patient sera contacté pour une éventuelle participation à des études de recherche. Si le participant potentiel est intéressé, il sera contacté par le personnel de l'étude pour une description de l'étude et un éventuel consentement. Alternativement, les collaborateurs cliniques qui sont consultés et qui participent directement aux soins d'un patient peuvent contacter directement un participant potentiel pour obtenir sa volonté de participer à l'étude.

Les patients consentant à l'étude seront invités à fournir un échantillon de sang d'environ 150 millilitres. Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) seront isolées de cet échantillon et stockées à -80°C avant d'être utilisées dans les expériences proposées. L'ADN génomique sera également isolé de l'échantillon pour effectuer le séquençage HLA.

La TIH sera confirmée par un test de libération de sérotonine fonctionnelle et la probabilité de TIH en fonction de l'évolution clinique. Des données détaillées seront recueillies concernant l'hospitalisation du participant, la dose et la durée de l'héparine, la numération plaquettaire, les antécédents chirurgicaux et les comorbidités. Après consentement des participants, un échantillon de sang périphérique sera acquis, des lymphocytes T CD positifs triés par cytométrie en flux et de l'ADN génomique isolé comme décrit précédemment.

Le répertoire de TCR et la proportion de variants spécifiques de TCR pour un échantillon particulier seront déterminés à l'aide d'une combinaison de nouvelles technologies disponibles dans le laboratoire et les installations centrales de l'investigateur. Le répertoire TCR d'un échantillon sera déterminé à l'aide de la technologie de séquençage de nouvelle génération. Le nouveau kit Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR est susceptible d'être utilisé car ce kit a été optimisé pour obtenir un profil quantitatif impartial des allèles TCR réarrangés à partir d'un échantillon d'ADN génomique. Actuellement, ce kit est en phase de test bêta et VANTAGE est l'un des sites de test.

Le séquençage du TCR sera effectué à l'aide d'un système de PCR multiplex pour amplifier l'ADN de TCRbeta réarrangé à l'aide d'amorces spécifiques à un segment TCR Vbeta fonctionnel, comme décrit précédemment. Les matrices génomiques seront amplifiées et l'abondance relative observée des clonotypes TCR de la famille Vbeta 5.1 sera déduite des données de séquence à l'aide d'un algorithme de maximisation des attentes. Les motifs CDR3 tels que définis par le système d'information international ImMunoGeneTics (IMGT) seront prédits sur la base des séquences d'ADN. Pour chaque lecture, le meilleur alignement de séquences par rapport aux séquences de référence sera calculé et les lectures avec des scores de faible qualité seront rejetées. Pour exclure les cellules T non spécifiques en raison du tri des impuretés et/ou du fond de stimulation, les clones spécifiques à l'antigène avec des fréquences inférieures à 1 % seront négligés.

Les allèles TCR connus pour être importants dans des DHS spécifiques seront ciblés à l'aide de la PCR numérique en gouttelettes (ddPCR). La ddPCR est une nouvelle technologie qui fournit une quantification absolue (la PCR en temps réel fournit une quantification relative) de la matrice cible basée sur des réactions de PCR de gouttelettes d'émulsion d'huile. Le laboratoire de l'investigateur a de l'expérience avec cette nouvelle technologie et les dosages d'un certain nombre d'allèles importants du TCR ont déjà été optimisés sur la ddPCR dans le laboratoire de l'investigateur.

Pour minimiser les risques, du sang supplémentaire sera prélevé pour cette étude en même temps que les laboratoires de soins primaires seront prélevés dans la mesure du possible. Les participants seront invités à fournir 150 ml de sang afin de tester les réponses immunitaires qualitatives. Les risques associés à la participation à cette étude sont liés à des complications peu courantes de la ponction veineuse et pourraient inclure une gêne, des ecchymoses, une infection et/ou la formation de caillots sanguins. Les patients seront surveillés pour leur sécurité et leur confort par du personnel clinique qualifié.

Les sujets seront surveillés au cours de l'étude pour tout événement indésirable. Les événements indésirables graves seront signalés à la CISR dans les 10 jours suivant la notification de l'événement par le PI. Les événements indésirables non graves ou les cas de non-conformité au protocole seront signalés au moment de l'examen continu. Le procès fera l'objet d'un suivi continu. Il n'y a pas de DSMB et aucune analyse intermédiaire n'est prévue.