Farmakogenomikk av heparin-indusert trombocytopeni (PHIT)

Inkluderingskriterier: 18 år eller eldre; Deltakere med heparin/PF4-antistoff og SRA-testing for HIT, inkludert:

deltakere med negative heparin/PF4-antistoffer og negative SRA (kontroller), deltakere med positive heparin/PF4-antistoffer og negative SRA(serokonversjonstilfeller), deltakere med positive heparin/PF4-antistoffer og positive SRA (HIT-tilfeller); Behandling med ufraksjonert heparin eller lavmolekylært heparin (enoksaparin, dalteparin, tinzaparin) innen 7 dager etter blodprøvetaking. Eksklusjonskriterier: Under 18 år; Manglende evne til å gi informert samtykke Det er ingen randomisering involvert i denne studien. Deltakere vil bli registrert i like antall fra tre kategorier: (1) deltakere uten HIT-testing negativ for heparin/PF4-antistoffer (kontroller); (2) deltakere uten HIT testet positivt for heparin/PF4-antistoffer (serokonversjonstilfeller); (3) deltakere med HIT som testet positivt for både heparin/PF4-antistoffer (HIT-tilfeller).

Rekruttering vil bli tilrettelagt gjennom samarbeidspartnere i koagulasjonslaboratoriet og gjennom nøkkelpersonell i studien i Banner Univerisyt Medical Center - Tucson. Pasienter med positive og negative heparin/PF4-antistoff- og serotoninfrigjøringsanalyseresultater vil bli identifisert i koagulasjonslaboratoriet, og pasientens leverandør vil bli kontaktet om mulig deltakelse i forskningsstudier. Hvis den potensielle deltakeren er interessert, vil de bli kontaktet av studiepersonell for studiebeskrivelse og eventuelt samtykke. Alternativt kan kliniske samarbeidspartnere som blir konsultert og som deltar direkte i en pasientbehandling kontakte en potensiell deltaker direkte for vilje til å delta i studien.

Pasienter som samtykker til studien vil bli bedt om å gi en blodprøve på ca. 150 milliliter. Perifere mononukleære blodceller (PBMC) vil bli isolert fra denne prøven og lagret ved -80C før bruk i foreslåtte eksperimenter. Genomisk DNA vil også bli isolert fra prøven for å utføre HLA-sekvensering.

HIT vil bli bekreftet med en funksjonell serotoninfrigjøringsanalyse og HIT-sannsynlighet basert på klinisk forløp. Det vil bli samlet inn detaljerte data om deltakerens sykehusinnleggelse, heparindose og varighet, antall blodplater, kirurgisk historie og komorbiditeter. Etter samtykke fra deltakerne vil det bli tatt en perifer blodprøve, CD-positive T-celler sortert ved hjelp av flowcytometri og genomisk DNA isolert som tidligere beskrevet.

TCR-repertoaret og andelen av spesifikke TCR-varianter for en bestemt prøve vil bli bestemt ved å bruke en kombinasjon av nye teknologier tilgjengelig i etterforskerens laboratorium og kjernefasiliteter. TCR-repertoaret til en prøve vil bli bestemt ved hjelp av neste generasjons sekvenseringsteknologi. Det nye Adaptive Technologies ImmunoSEQ TCR-settet vil sannsynligvis bli brukt ettersom dette settet har blitt optimalisert for å oppnå en objektiv kvantitativ profil av omorganiserte TCR-alleler fra en genomisk DNA-prøve. For øyeblikket er dette settet i beta-testfasen og VANTAGE er et av teststedene.

TCR-sekvensering vil bli utført ved bruk av multipleks PCR-system for å amplifisere rearrangert TCRbeta DNA ved bruk av primere spesifikke for et funksjonelt TCR Vbeta-segment som tidligere beskrevet. Genomiske maler vil bli amplifisert og observert relativ overflod av Vbeta 5.1-familie TCR-klonotyper vil bli utledet fra sekvensdata ved bruk av en forventningsmaksimeringsalgoritme. CDR3-motiver som definert av det internasjonale informasjonssystemet ImMunoGeneTics (IMGT) vil bli forutsagt basert på DNA-sekvenser. For hver lesing vil beste sekvensjustering mot referansesekvenser bli beregnet og lesninger med lav kvalitetsscore vil bli forkastet. For å utelukke uspesifikke T-celler på grunn av sorterende urenheter og/eller stimuleringsbakgrunn, vil antigenspesifikke kloner med frekvenser under 1 prosent bli neglisjert.

TCR-alleler kjent for å være viktige i spesifikke DHS vil bli målrettet ved bruk av droplet digital PCR (ddPCR). ddPCR er en ny teknologi som gir absolutt kvantifisering (sanntids-PCR gir relativ kvantifisering) av målmal basert på olje-emulsjonsdråpe-PCR-reaksjoner. Etterforskerens laboratorium har erfaring med denne nye teknologien og analyser for en rekke viktige TCR-alleler er allerede optimalisert på ddPCR i etterforskerens laboratorium.

For å minimere risikoen vil det bli samlet inn ekstra blod for denne studien samtidig som primærhelsetjenestens laboratorier tas ut når det er mulig. Deltakerne vil bli bedt om å gi 150 ml blod for å teste kvalitative immunresponser. Risikoen forbundet med å delta i denne studien er relatert til uvanlige komplikasjoner ved venepunktur og kan omfatte ubehag, blåmerker, infeksjon og/eller dannelse av blodpropp. Pasienter vil bli overvåket for sikkerhet og komfort av opplært klinisk personell.

Forsøkspersonene vil bli overvåket i løpet av studien for eventuelle uønskede hendelser. Alvorlige uønskede hendelser vil bli rapportert til IRB innen 10 dager etter PIs varsling om hendelsen. Ikke-alvorlige uønskede hendelser eller tilfeller av manglende overholdelse av protokollen vil bli rapportert på tidspunktet for kontinuerlig gjennomgang. Rettssaken vil bli overvåket på en løpende måte. Det er ingen DSMB og det er heller ikke planlagt noen foreløpige analyser.