IBD患者からの結腸組織のサイトカイン産生

プロジェクトのタイトル:

炎症性腸疾患の治療におけるカンナビノイドの有効性

調査する質問:

マリファナ植物であるカンナビス サティバは、さまざまな病気の治療薬として使用されてきました。 カンナビノイドは、痙縮、痛み、震え、膀胱機能不全などのMS関連の症状を含む神経学的状態を緩和すると報告されています. 慢性難治性疼痛、ジストニア運動障害、トゥレット症候群などの他の神経学的状態も、大麻の使用によって緩和されると報告されています。 大麻は、エイズやがん患者の食欲不振の治療に使用されてきました。 胃腸病学では、大麻は食欲不振、嘔吐、腹痛、胃腸炎、下痢、腸の炎症、糖尿病性胃不全麻痺の治療に使用されてきました。

大麻植物には、総称してカンナビノイドと呼ばれる 60 種類以上の化合物が含まれています。 これらのうち、デルタ 9-テトラヒドロカンナビノール (THC) とカンナビジオール (CBD) の 2 つの化合物が最も活性が高いようです。

カンナビノイドは、主に CB2 受容体を介して、強力な抗炎症効果を発揮します。 慢性マリファナ使用者では、細胞性免疫が損なわれていることがわかった。 げっ歯類では、大麻の強力な抗炎症効果が観察されました。 免疫調節におけるエンドカンナビノイドシステムの機能的役割を研究すると、それがほとんどすべての主要な免疫イベントに関与していることが明らかになりました。 カンナビノイドは、炎症誘発性サイトカインと抗炎症性サイトカインのバランスをヘルパー T 細胞タイプ 2 プロファイル (Th2 表現型) にシフトし、細胞性免疫を抑制しますが、体液性免疫は強化される可能性があります。 カンナビジオールは、関節リウマチとI型糖尿病のマウスモデルで炎症を軽減することが示されました.

したがって、カンナビノイドは、関節リウマチや喘息などのさまざまな炎症状態の治療に使用できます。

腸内では、エンドカンナビノイドはヒト腸の漿膜成分と粘膜成分の両方によって生成され、細胞株に関する研究により、ヒト腸上皮細胞がエンドカンナビノイドを生成できることが示されています。腸内のエンドカンナビノイドのその他の供給源には、ヒト内皮細胞、血小板、常在マクロファージ、およびリンパ球などの他の免疫細胞が含まれます。 CB1 および CB2 受容体は、炎症性腸疾患の実験モデルでアップレギュレートされます。 大腸炎のマウスモデルでは、カンナビノイドが炎症を改善することがわかっており、ヒトの腸では、炎症中にアナンダミドのレベルが上昇します. 炎症を起こした小腸では、FAAH の活性と CB1 カンナビノイド受容体の発現も大幅に上昇しています。

カンナビノイドによる炎症の軽減に関与する正確な細胞標的は不明です。 マウスの気管支肺炎症のモデルでは、アナンダミドの投与により、気管支肺胞洗浄液中の TNF α レベルが減少しました。 デルタ 9-テトラヒドロカンナビノール (THC) は、IL-12、IL-2、IL-6、INF ガンマ、および T 細胞増殖の合成を阻害します。

多くのIBD患者は、マリファナを吸うことで症状が改善したと報告していますが、その観察結果を調査した臨床研究はありません. 私たちは最近、クローン病における医療用大麻の使用に関する最初の報告を発表しました。 私たちの研究では、30人の患者のうち、21人が大麻による治療後に大幅に改善しました. 平均ハーベイ ブラッドショー インデックスは、14 ± 6.7 から 7 ± 4.7 に改善されました (P < 0.001)。 排便の回数が 1 日平均 8 回から 5 回に減少し、他の投薬、特にステロイドの必要性が大幅に減少しました。 これらの結果を考慮して、20 人のアクティブなクローン病患者で二重盲検プラセボ対照試験を実施しました。 クローン病活動指数（CDAI）が 200 を超える患者で、ステロイド、免疫抑制剤、または抗 TNF に反応しなかった患者は、毎日大麻 2 本またはプラセボを摂取するよう無作為に割り付けられました。 各紙巻たばこには 0.5 g の大麻が含まれており、これは 11.5 mg のテトラヒドロカンナビノール (THC) に相当します。 プラセボには、THCが抽出された大麻の葉が含まれていました。 治療中、大麻群では CDAI が 358 ± 99 から 139±111 (p<0.05) に、プラセボ群では 373 ± 94 から 306±143 (p=有意でない) に変化しました。 大麻グループの5人の患者とプラセボグループの1人の患者が完全に寛解しました（CDAI <100）。 大麻グループの 3 人のステロイド依存患者は、研究中にステロイドを中止しました。 患者は食欲と睡眠の改善を報告しており、重大な副作用はありませんでした。

これらの予備データは、カンナビノイドがクローン病の治療に大きな可能性を秘めていることを示していますが、その影響、作用機序、活性および非活性カンナビノイド、および別の適用経路についてのさらなる調査が明らかに必要です。 最も重要なのは、大麻の摂取で観察された改善が単なる症状だけなのか、それとも炎症の実際の改善があるのか​​という問題です.

提案された研究の目的は、カンナビジオールの有無にかかわらず、IBD患者の結腸組織の外植片における炎症とサイトカインのレベルを評価することです。

材料および方法：

研究集団：医師が必要とみなした結腸内視鏡検査が予定されているクローン病または潰瘍性大腸炎のいずれかの患者は、研究の対象となります。 インフォームド コンセントを得た後、炎症組織および正常組織から生検を採取し、さらに説明するように組織培養培地で処理します。 各サイトから6つの生検があります。

方法:

外植片は、Millicell-HA 組織培養インサート (Millipore) に含まれる微孔性膜 (孔径 0.45-μm) 上に絨毛表面を上にして、3 つのグループで培養されます。 インサートは、１．５ｍｌの組織培養培地と共に６ウェルプラスチック組織培養皿（Ｃｏｓｔａｒ ３５０６）内に配置される。 組織培養培地は、10% 熱不活化ウシ胎児血清、ペニシリン (100 ユニット/ml)、ストレプトマイシン (100 μg/ml)、ロイペプチン (50 μg/ml)、PMSF (1 mM)、大豆を添加したダルベッコ改変イーグル培地です。トリプシン阻害剤 (50 μg/ml)、およびデキサメタゾン (200 μg/ml)。 培養物を３７℃のインキュベーターでインキュベートし、９５％酸素、５％二酸化炭素で１時間ごとに通気する。 各サイトから 6 つの生検が得られます。 3つの生検は対照として機能し、3つはカンナビジオール（1μg/ ml）を添加して培養されます。 24 時間後、3 つのサンプルの 1 つに Alamar を添加することにより、組織の生存率を評価します。 紫からピンクへの色の変化は、生存組織を示します。 他の4つの生検からの上清を収集し、-20°Cで凍結します。 生検は、病理検査のためにホルマリンに入れられます。

対照および大麻処理サンプルからの上清を、TNFα、インターフェロンγ、IL-23、IL-12、IL-2、IL-10、IL-17およびIL-6の存在およびレベルについて分析します。