IBD 환자의 결장 조직의 사이토카인 생산

프로젝트 제목:

염증성 장 질환 치료에서 칸나비노이드의 효능

조사할 질문:

마리화나 식물인 Cannabis sativa는 다양한 질병의 치료제로 사용되었습니다. 칸나비노이드는 경직, 통증, 떨림 및 방광 기능 장애와 같은 MS 관련 증상을 포함한 신경학적 상태를 완화시키는 것으로 보고되었습니다. 만성 난치성 통증, 근긴장 운동 장애, 뚜렛 증후군과 같은 다른 신경학적 상태도 대마초 사용으로 완화되는 것으로 보고되었습니다. 대마초는 AIDS 및 암 환자의 거식증을 치료하는 데 사용되었습니다. 위장병학에서 칸나비스는 식욕 부진, 구토, 복통, 위장염, 설사, 장 염증 및 당뇨병성 위마비를 치료하는 데 사용되었습니다.

대마초 식물은 집합적으로 칸나비노이드라고 하는 60가지가 넘는 다양한 화합물을 함유하고 있습니다. 이 중 델타 9-테트라히드로칸나비놀(THC)과 칸나비디올(CBD) 두 화합물이 가장 활성이 높은 것으로 보입니다.

칸나비노이드는 주로 CB2 수용체를 통해 심오한 항염 효과가 있습니다. 세포 매개 면역은 만성 마리화나 사용자에게서 손상된 것으로 밝혀졌습니다. 칸나비스의 강력한 항염 효과가 설치류에서 관찰되었습니다. 면역 조절에서 체내칸나비노이드 시스템의 기능적 역할을 연구하면 거의 모든 주요 면역 사건에 관여한다는 것이 밝혀졌습니다. 칸나비노이드는 전염증성 사이토카인과 항염증성 사이토카인의 균형을 T 보조 세포 유형 2 프로파일(Th2 표현형)로 이동시키고 세포 매개 면역을 억제하는 반면 체액성 면역은 강화될 수 있습니다. 칸나비디올은 류마티스 관절염 및 제1형 당뇨병의 마우스 모델에서 염증을 감소시키는 것으로 나타났습니다.

따라서 칸나비노이드는 류마티스 관절염 및 천식을 비롯한 다양한 염증 상태를 치료하는 데 사용할 수 있습니다.

내장에서 체내칸나비노이드는 인간 장의 장막 및 점막 성분 모두에 의해 생성되며, 세포주에 대한 연구에서 인간 장 상피 세포가 체내칸나비노이드를 생성할 수 있음을 보여주었습니다. 장 내 엔도칸나비노이드의 추가 공급원에는 인간 내피 세포, 혈소판, 상주 대식세포 및 림프구와 같은 기타 면역 세포가 포함됩니다. CB1 및 CB2 수용체는 염증성 장 질환의 실험 모델에서 상향 조절됩니다. 대장염 마우스 모델에서 칸나비노이드가 염증을 완화시키는 것으로 밝혀졌으며 인간의 장에서는 염증이 있는 동안 아난다마이드 수치가 증가합니다. 염증이 생긴 소장은 또한 FAAH의 활성과 CB1 칸나비노이드 수용체의 발현을 상당히 증가시켰습니다.

칸나비노이드에 의한 염증 감소와 관련된 정확한 세포 표적은 알려져 있지 않습니다. 마우스의 기관지폐 염증 모델에서 아난다마이드 투여는 기관지폐포 세척액에서 TNF 알파 수준을 감소시켰습니다. Delta 9-tetrahydrocannabinol(THC)은 IL-12, IL-2, IL-6, INF 감마 및 T 세포 증식의 합성을 억제합니다.

많은 IBD 환자가 마리화나 흡연이 증상을 호전시켰다고 보고하지만 그러한 관찰을 조사한 임상 연구는 없습니다. 우리는 최근 크론병에서 의료용 대마초 사용에 대한 최초 보고된 관찰을 발표했습니다. 우리 연구에서 30명의 환자 중 21명이 대마초로 치료한 후 크게 개선되었습니다. 평균 Harvey Bradshaw 지수는 14 ± 6.7에서 7 ± 4.7로 개선되었습니다(P < 0.001). 배변 횟수는 하루 평균 8회에서 5회로 줄었고 다른 약물, 특히 스테로이드의 필요성도 크게 줄었습니다. 이러한 결과를 고려하여 우리는 20명의 활성 크론병 환자를 대상으로 이중 맹검 위약 대조 시험을 실시했습니다. 스테로이드, 면역억제제 또는 항-TNF에 반응하지 않는 CDAI(Crohn's Disease Activity Index)>200인 환자는 무작위로 매일 2개비의 대마초 또는 위약을 받았습니다. 각 담배에는 테트라하이드로칸나비놀(THC) 11.5mg에 해당하는 0.5g의 대마초가 포함되어 있습니다. 위약에는 THC가 추출된 대마초 잎이 포함되어 있습니다. 치료 중 CDAI는 칸나비스 그룹에서 358 ± 99에서 139 ± 111(p<0.05)로, 위약 그룹에서 373 ± 94에서 306 ± 143(p=유의하지 않음)으로 변경되었습니다. 대마초 그룹에서 5명의 환자와 위약 그룹에서 1명의 환자가 완전관해에 도달했습니다(CDAI <100). 대마초 그룹의 3명의 스테로이드 의존 환자는 연구 기간 동안 스테로이드를 중단했습니다. 환자들은 심각한 부작용 없이 식욕과 수면이 개선되었다고 보고했습니다.

이러한 예비 데이터는 칸나비노이드가 크론병 치료에 큰 잠재력을 가지고 있음을 나타내지만 그 영향, 작용 방식, 활성 및 비활성 칸나비노이드 및 대체 적용 경로에 대한 추가 조사가 분명히 필요합니다. 가장 중요한 것은 대마초 소비로 관찰된 개선이 단지 증상적일 뿐인지 아니면 실제로 염증이 개선되었는지 여부입니다.

제안된 연구의 목적은 칸나비디올이 있거나 없는 IBD 환자의 결장 조직 외식편에서 염증 및 사이토카인 수준을 평가하는 것입니다.

재료 및 방법:

연구 모집단: 의사가 필요하다고 판단하는 대장내시경 검사가 예정된 크론병 또는 궤양성 대장염 환자가 연구 대상이 됩니다. 정보에 입각한 동의를 얻은 후, 염증 조직과 정상 조직의 생검을 채취하여 추가 설명된 대로 조직 배양 배지에서 처리합니다. 각 부위에서 6개의 생검이 있을 것입니다.

행동 양식:

외식편은 Millicell-HA 조직 배양 삽입물(Millipore)에 포함된 미세다공성 막(공극 크기 0.45m)에서 융모 표면이 위를 향하도록 3개의 그룹으로 배양됩니다. 삽입물은 조직 배양 배지 1.5ml와 함께 6웰 플라스틱 조직 배양 접시(Costar 3506) 안에 배치됩니다. 조직 배양 배지는 10% 열 불활성화 태아 송아지 혈청, 페니실린(100units/ml), 스트렙토마이신(100μg/ml), 류펩틴(50μg/ml), PMSF(1mM), 콩 트립신 억제제(50μg/ml) 및 덱사메타손(200μg/ml). 배양물은 37°C 인큐베이터에서 배양되고 95% 산소 5% 이산화탄소로 매시간 가스를 주입합니다. 각 부위에서 6개의 생검을 얻을 것입니다. 3개의 생검은 대조군 역할을 하고 3개는 Cannabidiol(1μg/ml)을 첨가하여 배양됩니다. 24시간 후 각 3개의 샘플 중 하나에 Alamar를 추가하여 조직 생존력을 평가합니다. 보라색에서 분홍색으로의 색상 변화는 생존 가능한 조직을 나타냅니다. 다른 4개의 생검에서 얻은 상청액을 수집하여 -20°C에서 동결합니다. 생검은 병리학 검사를 위해 포르말린에 배치됩니다.

제어 및 대마초 처리 샘플의 상청액은 TNF 알파, 인터페론 감마, IL-23, IL-12, IL-2, IL-10, IL-17 및 IL-6의 존재 및 수준에 대해 분석됩니다.