Production de cytokines dans le tissu colique de patients atteints de MII

Titre du projet :

Efficacité des cannabinoïdes dans le traitement des maladies inflammatoires de l'intestin

Question à étudier :

La plante de marijuana, Cannabis sativa a été utilisée comme traitement médicinal pour une variété de maladies. Il a été rapporté que les cannabinoïdes atténuaient les affections neurologiques, y compris les symptômes liés à la SEP tels que la spasticité, la douleur, les tremblements et le dysfonctionnement de la vessie . D'autres affections neurologiques, telles que la douleur chronique réfractaire, les troubles du mouvement dystoniques et le syndrome de Tourette, ont également été signalées comme étant atténuées par la consommation de cannabis . Le cannabis a été utilisé pour traiter l'anorexie chez les patients atteints du SIDA et du cancer. En gastro-entérologie, le cannabis a été utilisé pour traiter l'anorexie, les vomissements, les douleurs abdominales, la gastro-entérite, la diarrhée, l'inflammation intestinale et la gastroparésie diabétique .

La plante de cannabis contient plus de 60 composés différents qui sont collectivement appelés cannabinoïdes. Parmi ceux-ci, les deux composés delta 9-tétrahydrocannabinol (THC) et Cannabidiol (CBD) semblent être les plus actifs.

Les cannabinoïdes ont un effet anti-inflammatoire profond, principalement via le récepteur CB2. L'immunité à médiation cellulaire s'est avérée altérée chez les consommateurs chroniques de marijuana. Un puissant effet anti-inflammatoire du cannabis a été observé chez les rongeurs. L'étude des rôles fonctionnels du système endocannabinoïde dans la modulation immunitaire révèle qu'il est impliqué dans presque tous les événements immunitaires majeurs. Les cannabinoïdes modifient l'équilibre des cytokines pro-inflammatoires et des cytokines anti-inflammatoires vers les profils de cellules T auxiliaires de type 2 (phénotype Th2) et suppriment l'immunité à médiation cellulaire, tandis que l'immunité humorale peut être renforcée. Il a été démontré que le cannabidiol réduit l'inflammation dans un modèle murin de polyarthrite rhumatoïde et de diabète sucré de type I.

Par conséquent, les cannabinoïdes peuvent être utilisés pour traiter diverses affections inflammatoires, notamment la polyarthrite rhumatoïde et l'asthme.

Dans l'intestin, les endocannabinoïdes sont produits à la fois par les composants séreux et muqueux de l'intestin humain, et des études sur des lignées cellulaires ont montré que les cellules épithéliales intestinales humaines peuvent produire des endocannabinoïdes ; les autres sources d'endocannabinoïdes dans l'intestin comprennent les cellules endothéliales humaines, les plaquettes, les macrophages résidents et d'autres cellules immunitaires telles que les lymphocytes. Les récepteurs CB1 et CB2 sont régulés positivement dans des modèles expérimentaux de maladies inflammatoires de l'intestin. Dans un modèle murin de colite, il a été découvert que les cannabinoïdes atténuaient l'inflammation, et dans l'intestin humain, les niveaux d'anandamide sont augmentés pendant l'inflammation. L'intestin grêle enflammé a également une activité significativement élevée de FAAH ainsi qu'une expression des récepteurs cannabinoïdes CB1.

Les cibles cellulaires exactes impliquées dans la réduction de l'inflammation par les cannabinoïdes sont inconnues. Dans un modèle d'inflammation bronchopulmonaire chez la souris, l'administration d'anandamide a diminué les taux de TNF alpha dans le liquide de lavage bronchoalvéolaire. Le delta 9-tétrahydrocannabinol (THC) inhibe la synthèse de l'IL-12, de l'IL-2, de l'IL-6, de l'INF gamma et de la prolifération des cellules T.

De nombreux patients atteints de MICI rapportent que fumer de la marihuana a amélioré leurs symptômes, mais il n'y a pas d'études cliniques portant sur cette observation. Nous avons récemment publié la première observation rapportée de l'utilisation de cannabis médical dans la maladie de Crohn. Dans notre étude, sur 30 patients, 21 se sont améliorés significativement après un traitement au cannabis. L'index moyen de Harvey Bradshaw s'est amélioré de 14 ± 6,7 à 7 ± 4,7 (P < 0,001). Le nombre de selles a été réduit d'une moyenne de huit par jour à cinq par jour et le besoin d'autres médicaments, en particulier les stéroïdes, a été considérablement réduit. Au vu de ces résultats, nous avons mené un essai contrôlé par placebo en double aveugle chez 20 patients atteints de la maladie de Crohn active. Les patients avec un indice d'activité de la maladie de Crohn (CDAI)> 200 qui n'ont pas répondu aux stéroïdes, aux immunosuppresseurs ou aux anti-TNF ont été randomisés pour recevoir 2 cigarettes de cannabis ou un placebo par jour. Chaque cigarette contenait 0,5 g de cannabis, correspondant à 11,5 mg de tétrahydrocannabinol (THC). Le placebo contenait des feuilles de cannabis dont le THC était extrait. Pendant le traitement, le CDAI a changé dans le groupe cannabis de 358 ± 99 à 139 ± 111 (p<0,05) et dans le groupe placebo de 373 ± 94 à 306 ± 143 (p=Non significatif). Cinq patients du groupe cannabis et un du groupe placebo sont entrés en rémission complète (CDAI <100). Trois patients dépendants aux stéroïdes du groupe cannabis ont arrêté les stéroïdes au cours de l'étude. Les patients ont signalé une amélioration de l'appétit et du sommeil, sans effets secondaires graves.

Ces données préliminaires indiquent que les cannabinoïdes ont un grand potentiel dans le traitement de la maladie de Crohn, mais une étude plus approfondie de leur influence, de leur mode d'action, des cannabinoïdes actifs et non actifs et des voies d'application alternatives est clairement nécessaire. Le plus important est de savoir si l'amélioration observée avec la consommation de cannabis n'est que symptomatique ou s'il y a une réelle amélioration de l'inflammation.

Le but de l'étude proposée est d'évaluer l'inflammation et les niveaux de cytokines dans les explants de tissu colique de patients atteints de MII avec et sans cannabidiol.

Matériels et méthodes:

Population à l'étude : les patients atteints de la maladie de Crohn ou de colite ulcéreuse devant subir une coloscopie jugée nécessaire par leur médecin seront éligibles pour l'étude. Après avoir obtenu le consentement éclairé, des biopsies de tissus enflammés et normaux seront prélevées et traitées dans un milieu de culture tissulaire comme décrit plus loin. Il y aura 6 biopsies de chaque site.

Méthodes :

Les explants seront cultivés par groupes de trois avec la surface des villosités sur des membranes microporeuses (taille des pores 0,45-_m) contenues dans des inserts de culture tissulaire Millicell-HA (Millipore). Les inserts seront placés dans des boîtes de culture tissulaire en plastique à 6 puits (Costar 3506) avec 1,5 ml de milieu de culture tissulaire. Le milieu de culture tissulaire sera le milieu d'Eagle modifié de Dulbecco additionné de 10 % de sérum de veau fœtal inactivé par la chaleur, de pénicilline (100 unités/ml), de streptomycine (100 μg/ml), de leupeptine (50 μg/ml), de PMSF (1 mM), de soja inhibiteur de trypsine (50 μg/ml) et dexaméthasone (200 μg/ml). Les cultures seront incubées dans un incubateur à 37 °C et gazées toutes les heures avec 95 % d'oxygène et 5 % de dioxyde de carbone. Six biopsies de chaque site seront obtenues. Trois biopsies serviront de contrôle et trois seront cultivées avec l'ajout de Cannabidiol (1 μg/ml). Après 24 heures, la viabilité des tissus sera évaluée en ajoutant Alamar à l'un des 3 échantillons. Le changement de couleur du violet au rose indique un tissu viable. Le surnageant des 4 autres biopsies sera collecté et congelé à -20°C. Les biopsies seront ensuite placées dans du formol pour une inspection pathologique.

Le surnageant des échantillons contrôlés et traités au cannabis sera analysé pour la présence et le niveau de TNF alpha, d'interféron gamma, d'IL-23, d'IL-12, d'IL-2, d'IL-10, d'IL-17 et d'IL-6.