Producción de citocinas en tejido colónico de pacientes con EII

Título del proyecto:

Eficacia de los cannabinoides en el tratamiento de la enfermedad inflamatoria intestinal

Cuestión a investigar:

La planta de marihuana, Cannabis sativa, se ha utilizado como tratamiento medicinal para una variedad de enfermedades. Se ha informado que los cannabinoides alivian las afecciones neurológicas, incluidos los síntomas relacionados con la EM, como la espasticidad, el dolor, el temblor y la disfunción de la vejiga. También se informó que otras afecciones neurológicas, como el dolor crónico intratable, los trastornos del movimiento distónico y el síndrome de Tourette, se alivian con el consumo de cannabis. El cannabis se ha utilizado para tratar la anorexia en pacientes con SIDA y cáncer. En gastroenterología, el cannabis se ha utilizado para tratar la anorexia, la emesis, el dolor abdominal, la gastroenteritis, la diarrea, la inflamación intestinal y la gastroparesia diabética.

La planta de cannabis contiene más de 60 compuestos diferentes que se denominan colectivamente cannabinoides. De estos, los dos compuestos delta 9-tetrahidrocannabinol (THC) y Cannabidiol (CBD) parecen ser los más activos.

Los cannabinoides tienen un profundo efecto antiinflamatorio, principalmente a través del receptor CB2. Se encontró que la inmunidad mediada por células estaba alterada en los usuarios crónicos de marihuana. Se observó un potente efecto antiinflamatorio del cannabis en roedores. El estudio de las funciones funcionales del sistema endocannabinoide en la modulación inmunitaria revela que está implicado en casi todos los eventos inmunitarios importantes. Los cannabinoides cambian el equilibrio de las citocinas proinflamatorias y las citocinas antiinflamatorias hacia los perfiles de células T auxiliares tipo 2 (fenotipo Th2) y suprimen la inmunidad mediada por células, mientras que la inmunidad humoral puede mejorar. Se demostró que el cannabidiol reduce la inflamación en un modelo de ratón con artritis reumatoide y diabetes mellitus tipo I.

Por lo tanto, los cannabinoides se pueden usar para tratar diversas afecciones inflamatorias, como la artritis reumatoide y el asma.

En el intestino, los endocannabinoides son producidos por el componente seroso y mucoso del intestino humano, y los estudios sobre líneas celulares han demostrado que las células epiteliales intestinales humanas pueden producir endocannabinoides; fuentes adicionales de endocannabinoides en el intestino incluyen células endoteliales humanas, plaquetas, macrófagos residentes y otras células inmunitarias como los linfocitos. Los receptores CB1 y CB2 están regulados positivamente en modelos experimentales de enfermedad inflamatoria intestinal. En un modelo de colitis en ratones, se descubrió que los cannabinoides mejoran la inflamación, y en el intestino humano, los niveles de anandamida aumentan durante la inflamación. El intestino delgado inflamado también tiene una actividad significativamente elevada de FAAH, así como la expresión de los receptores de cannabinoides CB1.

Se desconocen los objetivos celulares exactos implicados en la reducción de la inflamación por los cannabinoides. En un modelo de inflamación broncopulmonar en ratones, la administración de anandamida disminuyó los niveles de TNF alfa en el líquido de lavado broncoalveolar. Delta 9-tetrahidrocannabinol (THC) inhibe la síntesis de IL-12, IL-2, IL-6, INF gamma y la proliferación de células T.

Muchos pacientes con EII informan que fumar marihuana mejoró sus síntomas, pero no hay estudios clínicos que investiguen esa observación. Recientemente hemos publicado la primera observación informada del uso de cannabis medicinal en la enfermedad de Crohn. En nuestro estudio, de 30 pacientes, 21 mejoraron significativamente tras el tratamiento con cannabis. El índice promedio de Harvey Bradshaw mejoró de 14 ± 6,7 a 7 ± 4,7 (P < 0,001). El número de deposiciones se redujo de un promedio de ocho al día a cinco al día y la necesidad de otros medicamentos, en particular esteroides, se redujo significativamente. En vista de esos resultados, llevamos a cabo un ensayo doble ciego controlado con placebo en 20 pacientes con enfermedad de Crohn activa. Los pacientes con un índice de actividad de la enfermedad de Crohn (CDAI)> 200 que no respondieron a los esteroides, inmunosupresores o anti-TNF fueron aleatorizados para recibir 2 cigarrillos de cannabis o placebo al día. Cada cigarrillo contenía 0,5 g de cannabis, lo que corresponde a 11,5 mg de tetrahidrocannabinol (THC). El placebo contenía hojas de cannabis de las que se extrajo el THC. Durante el tratamiento, el CDAI cambió en el grupo de cannabis de 358 ± 99 a 139 ± 111 (p <0,05) y en el grupo de placebo de 373 ± 94 a 306 ± 143 (p = no significativo). Cinco pacientes en el grupo de cannabis y uno en el grupo de placebo entraron en remisión completa (CDAI <100). Tres pacientes dependientes de esteroides en el grupo de cannabis dejaron de tomar esteroides durante el estudio. Los pacientes informaron una mejora del apetito y del sueño, sin efectos secundarios graves.

Estos datos preliminares indican que los cannabinoides tienen un gran potencial en el tratamiento de la enfermedad de Crohn, pero claramente se necesita más investigación sobre su influencia, modo de acción, cannabinoides activos y no activos y vías alternativas de aplicación. Lo más importante es la cuestión de si la mejoría observada con el consumo de cannabis es solo sintomática o si hay una mejoría real en la inflamación.

El objetivo del estudio propuesto es evaluar la inflamación y los niveles de citoquinas en explantes de tejido colónico de pacientes con EII con y sin cannabidiol.

Materiales y métodos:

Población del estudio: Los pacientes con enfermedad de Crohn o colitis ulcerosa programados para una colonoscopia según lo considere necesario su médico serán elegibles para el estudio. Después de obtener el consentimiento informado, se tomarán biopsias de tejido inflamado y normal y se procesarán en un medio de cultivo de tejidos como se describe más adelante. Habrá 6 biopsias de cada sitio.

Métodos:

Los explantes se cultivarán en grupos de tres con la superficie de las vellosidades hacia arriba en membranas microporosas (tamaño de poro de 0,45 _m) contenidas en insertos de cultivo de tejidos Millicell-HA (Millipore). Los insertos se colocarán dentro de placas de cultivo de tejidos de plástico de 6 pocillos (Costar 3506) junto con 1,5 ml de medio de cultivo de tejidos. El medio de cultivo de tejido será medio de Eagle modificado por Dulbecco complementado con suero de ternera fetal inactivado por calor al 10 %, penicilina (100 unidades/ml), estreptomicina (100 μg/ml), leupeptina (50 μg/ml), PMSF (1 mM), soja inhibidor de tripsina (50 μg/ml) y dexametasona (200 μg/ml). Los cultivos se incubarán en una incubadora a 37 °C y se gasificarán cada hora con 95 % de oxígeno y 5 % de dióxido de carbono. Se obtendrán seis biopsias de cada sitio. Tres biopsias servirán como control y tres se cultivarán con la adición de Cannabidiol (1 μg/ml). Después de 24 horas, se evaluará la viabilidad del tejido mediante la adición de Alamar a una de cada 3 muestras. El cambio de color de púrpura a rosa indica tejido viable. El sobrenadante de las otras 4 biopsias se recogerá y congelará a -20 °C. Las biopsias luego se colocarán en formalina para la inspección patológica.

El sobrenadante de las muestras controladas y tratadas con cannabis se analizará para detectar la presencia y el nivel de TNF alfa, interferón gamma, IL-23, IL-12, IL-2, IL-10, IL-17 e IL-6.