IBD 患者结肠组织的细胞因子产生

项目名称：

大麻素治疗炎症性肠病的疗效

待调查问题：

大麻植物大麻已被用作治疗多种疾病的药物。 据报道，大麻素可缓解神经系统疾病，包括 MS 相关症状，如痉挛、疼痛、震颤和膀胱功能障碍。 其他神经系统疾病，如慢性顽固性疼痛、肌张力障碍运动障碍和图雷特氏综合症，据报道也可通过使用大麻得到缓解。 大麻已被用于治疗艾滋病和癌症患者的厌食症。 在胃肠病学中，大麻已被用于治疗厌食、呕吐、腹痛、胃肠炎、腹泻、肠道炎症和糖尿病性胃轻瘫。

大麻植物含有 60 多种不同的化合物，统称为大麻素。 其中，δ9-四氢大麻酚 (THC) 和大麻二酚 (CBD) 这两种化合物似乎最活跃。

大麻素具有深远的抗炎作用，主要通过 CB2 受体发挥作用。 细胞介导的免疫力被发现在长期吸食大麻的人中受损。 在啮齿动物中观察到大麻的强效抗炎作用。 研究内源性大麻素系统在免疫调节中的功能作用表明它参与几乎所有主要的免疫事件。 大麻素将促炎细胞因子和抗炎细胞因子的平衡转向 2 型 T 辅助细胞（Th2 表型）并抑制细胞介导的免疫，而体液免疫可能会增强。 在类风湿性关节炎和 I 型糖尿病小鼠模型中，大麻二酚被证明可以减少炎症。

因此，大麻素可用于治疗各种炎症，包括类风湿性关节炎和哮喘。

在肠道中，人肠道的浆膜和粘膜成分都会产生内源性大麻素，细胞系研究表明，人肠上皮细胞可以产生内源性大麻素；肠道中内源性大麻素的其他来源包括人内皮细胞、血小板、常驻巨噬细胞和其他免疫细胞，如淋巴细胞。 CB1 和 CB2 受体在炎症性肠病的实验模型中被上调。 在小鼠结肠炎模型中，大麻素被发现可以改善炎症，而在人类肠道中，Anandamide 的水平在炎症期间会增加。 发炎的小肠还具有显着升高的 FAAH 活性以及 CB1 大麻素受体的表达。

与大麻素减少炎症有关的确切细胞靶点尚不清楚。 在小鼠支气管肺部炎症模型中，anandamide 可降低支气管肺泡灌洗液中的 TNF α 水平。 Delta 9-四氢大麻酚 (THC) 抑制 IL-12、IL-2、IL-6、INF γ 的合成和 T 细胞增殖。

许多 IBD 患者报告吸食大麻可以改善他们的症状，但没有临床研究调查这一观察结果。 我们最近发表了第一份关于在克罗恩病中使用医用大麻的观察报告。 在我们的研究中，在 30 名患者中，有 21 名在接受大麻治疗后明显好转。 平均 Harvey Bradshaw 指数从 14 ± 6.7 提高到 7 ± 4.7 (P < 0.001)。 排便次数从平均每天 8 次减少到每天 5 次，并且对其他药物（尤其是类固醇）的需求显着减少。 鉴于这些结果，我们对 20 名活跃的克罗恩病患者进行了双盲安慰剂对照试验。 克罗恩病活动指数 (CDAI) > 200 且对类固醇、免疫抑制剂或抗肿瘤坏死因子无反应的患者随机接受每天 2 支大麻或安慰剂。 每支香烟含有 0.5 克大麻，相当于 11.5 毫克四氢大麻酚 (THC)。 安慰剂含有从中提取四氢大麻酚的大麻叶。 在治疗期间，大麻组的 CDAI 从 358±99 变为 139±111（p<0.05），安慰剂组从 373±94 变为 306±143（p=无显着性）。 大麻组的 5 名患者和安慰剂组的 1 名患者完全缓解（CDAI <100）。 大麻组中的三名类固醇依赖患者在研究期间停止了类固醇。 患者报告食欲和睡眠改善，没有严重的副作用。

这些初步数据表明，大麻素在克罗恩病的治疗中具有巨大潜力，但显然需要进一步研究其影响、作用方式、活性和非活性大麻素以及替代应用途径。 最重要的问题是，吸食大麻后观察到的改善是否只是症状性的，还是炎症确实有所改善。

拟议研究的目的是评估含有和不含大麻二酚的 IBD 患者结肠组织外植体中的炎症和细胞因子水平。

材料和方法：

研究人群：如果医生认为有必要，计划进行结肠镜检查的克罗恩病或溃疡性结肠炎患者将有资格参加该研究。 在获得知情同意后，将对发炎和正常组织进行活检，并在组织培养基中进行处理，如进一步所述。 每个部位将进行 6 次活检。

方法：

外植体将以三个为一组进行培养，绒毛表面朝上在 Millicell-HA 组织培养插入物 (Millipore) 中包含的微孔膜（0.45-_m 孔径）上。 插入物将与 1.5 ml 组织培养基一起放置在 6 孔塑料组织培养皿 (Costar 3506) 中。 组织培养基将是 Dulbecco 改良的 Eagle 培养基，辅以 10% 热灭活胎牛血清、青霉素（100 单位/ml）、链霉素（100 μg/ml）、亮肽素（50 μg/ml）、PMSF（1 mM）、大豆胰蛋白酶抑制剂 (50 μg/ml) 和地塞米松 (200 μg/ml)。 培养物将在 37°C 培养箱中培养，每小时通入 95% 氧气和 5% 二氧化碳。 将获得来自每个部位的六个活组织检查。 三份活检将作为对照，三份将在添加大麻二酚 (1 μg/ml) 的情况下进行培养。 24 小时后，通过将 Alamar 添加到每 3 个样品中的一个来评估组织活力。 颜色从紫色变为粉红色表示有活力的组织。 来自其他 4 个活检的上清液将被收集并冷冻在 -20°C。 然后将活组织检查置于福尔马林中进行病理检查。

将分析受控样品和大麻处理样品的上清液中 TNF α、干扰素γ、IL-23、IL-12、IL-2、IL-10、IL-17 和 IL-6 的存在和水平。