A vastagbélszövet citokintermelése IBD-betegekből

A projekt címe:

A kannabinoidok hatékonysága a gyulladásos bélbetegségek kezelésében

Vizsgálandó kérdés:

A marihuána növényt, a Cannabis sativát számos betegség gyógykezelésére használták. A kannabinoidokról beszámoltak arról, hogy enyhítik a neurológiai állapotokat, beleértve az SM-hez kapcsolódó tüneteket, például görcsösséget, fájdalmat, remegést és húgyhólyag-működési zavarokat. Más neurológiai állapotokat, mint például a krónikus, kezelhetetlen fájdalmat, a disztóniás mozgászavarokat és a Tourette-szindrómát, szintén enyhítette a kannabiszhasználat. A kannabiszt használták AIDS-es és rákos betegek anorexiájának kezelésére. A gasztroenterológiában a kannabiszt használták étvágytalanság, hányás, hasi fájdalom, gasztroenteritisz, hasmenés, bélgyulladás és diabéteszes gastroparesis kezelésére.

A kannabisznövény több mint 60 különböző vegyületet tartalmaz, amelyeket összefoglaló néven kannabinoidoknak nevezünk. Ezek közül a két vegyület, a delta 9-tetrahidrokannabinol (THC) és a kannabidiol (CBD) tűnik a legaktívabbnak.

A kannabinoidok mély gyulladáscsökkentő hatással bírnak, főként a CB2 receptoron keresztül. A sejtek által közvetített immunitás károsodott a krónikus marihuánafogyasztók körében. A kannabisz erős gyulladáscsökkentő hatását figyelték meg rágcsálóknál. Az endokannabinoid rendszer immunmodulációban betöltött funkcionális szerepének tanulmányozása során kiderül, hogy szinte minden fontosabb immunológiai eseményben részt vesz. A kannabinoidok a gyulladást elősegítő citokinek és gyulladásgátló citokinek egyensúlyát a 2-es típusú T-helper sejt profilok (Th2 fenotípus) felé tolják el, és elnyomják a sejt által közvetített immunitást, míg a humorális immunitás fokozódhat. A kannabidiolról kimutatták, hogy csökkenti a gyulladást a rheumatoid arthritis és az I. típusú diabetes mellitus egérmodelljében.

Ezért a kannabinoidok különféle gyulladásos állapotok kezelésére használhatók, beleértve a rheumatoid arthritist és az asztmát.

A bélben az endokannabinoidokat az emberi bél szerosális és nyálkahártya-komponense egyaránt termeli, és a sejtvonalakon végzett vizsgálatok kimutatták, hogy az emberi bélhámsejtek képesek endokannabinoidokat termelni; Az endokannabinoidok további forrásai a bélben a humán endotélsejtek, vérlemezkék, rezidens makrofágok és más immunsejtek, például limfociták. A CB1- és CB2-receptorokat a gyulladásos bélbetegség kísérleti modelljeiben felfelé szabályozzák. A vastagbélgyulladás egérmodelljében azt találták, hogy a kannabinoidok enyhítik a gyulladást, az emberi bélben pedig az anandamid szintje emelkedik a gyulladás során. A gyulladt vékonybélben jelentősen megnövekedett a FAAH aktivitása, valamint a CB1 kannabinoid receptorok expressziója is.

A kannabinoidok által a gyulladás csökkentésében szerepet játszó pontos sejtcélpontok nem ismertek. A bronchopulmonalis gyulladás egerekben végzett modelljében az anandamid beadása csökkentette a TNF-alfa-szintet a bronchoalveoláris mosófolyadékban. A delta 9-tetrahidrokannabinol (THC) gátolja az IL-12, IL-2, IL-6, INF gamma szintézisét és a T-sejtek proliferációját.

Sok IBD-s beteg számol be arról, hogy a marihuána dohányzása enyhítette a tüneteit, de nincsenek klinikai vizsgálatok, amelyek ezt a megfigyelést vizsgálták volna. A közelmúltban tettük közzé az orvosi kannabisz Crohn-betegségben való használatának első jelentett megfigyelését. Vizsgálatunkban 30 beteg közül 21 betegnél javult szignifikánsan a kannabiszkezelés után. Az átlagos Harvey Bradshaw index 14 ± 6,7-ről 7 ± 4,7-re javult (P < 0,001). A székletürítések száma átlagosan napi nyolcról napi ötre csökkent, és jelentősen csökkent az egyéb gyógyszerek, különösen a szteroidok iránti igény. Ezen eredmények fényében kettős vak, placebo-kontrollos vizsgálatot végeztünk 20 aktív Crohn-betegségben szenvedő beteg bevonásával. A 200-nál nagyobb Crohn-betegség aktivitási indexű (CDAI) betegeket, akik nem reagáltak szteroidokra, immunszuppresszánsokra vagy anti-TNF-re, véletlenszerűen napi 2 cigaretta kannabiszt vagy placebót kaptak. Minden cigaretta 0,5 g kannabiszt tartalmazott, ami 11,5 mg tetrahidrokannabinolnak (THC) felel meg. A placebo kannabiszleveleket tartalmazott, amelyekből THC-t vontak ki. A kezelés során a CDAI a kannabisz-csoportban 358 ± 99-ről 139±111-re változott (p<0,05), a placebo csoportban pedig 373 ± 94-ről 306±143-ra (p=nem szignifikáns). Öt beteg a kannabisz-csoportban és egy a placebóval kezelt csoportban ment teljes remisszióba (CDAI <100). A kannabiszcsoportban három szteroidfüggő beteg abbahagyta a szteroidok szedését a vizsgálat során. A betegek jobb étvágyról és alvásról számoltak be, súlyos mellékhatások nélkül.

Ezek az előzetes adatok azt mutatják, hogy a kannabinoidok nagy potenciállal rendelkeznek a Crohn-betegség kezelésében, de hatásuk, hatásmódjuk, aktív és nem aktív kannabinoidok és alternatív alkalmazási módok további vizsgálatára egyértelműen szükség van. A legfontosabb az a kérdés, hogy a kannabiszfogyasztásnál megfigyelt javulás csak tüneti jellegű, vagy valóban javul a gyulladás.

A javasolt vizsgálat célja, hogy értékelje a gyulladást és a citokinszintet az IBD-s betegek vastagbélszövetének explantátumaiban kannabidiollal és anélkül.

Anyagok és metódusok:

Vizsgálati populáció: Crohn-betegségben vagy fekélyes vastagbélgyulladásban szenvedő betegek, akiket kezelőorvosuk szükségesnek ítélt kolonoszkópiára, jogosultak a vizsgálatra. A tájékozott beleegyezés megszerzése után biopsziát vesznek a gyulladt és normál szövetekből, és szövettenyésztő táptalajban dolgozzák fel a további leírás szerint. Minden helyről 6 biopszia lesz.

Mód:

Az explantátumokat hármas csoportokban tenyésztjük úgy, hogy a bolyhok felszíne felfelé kerüljön a Millicell-HA szövettenyésztő betétekben (Millipore) található mikropórusos membránokon (0,45 µm pórusméret). A betéteket 6 lyukú műanyag szövettenyésztő edényekbe (Costar 3506) helyezzük 1,5 ml szövettenyésztő tápközeggel együtt. A szövettenyésztő táptalaj a Dulbecco módosított Eagle táptalaj lesz, amelyet 10% hővel inaktivált borjúmagzati szérummal, penicillinnel (100 egység/ml), sztreptomicinnel (100 μg/ml), leupeptinnel (50 μg/ml), PMSF-fel (1 mM), szójával egészítenek ki. tripszin inhibitor (50 μg/ml) és dexametazon (200 μg/ml). A tenyészeteket 37 °C-os inkubátorban inkubáljuk, és óránként 95% oxigénnel és 5% szén-dioxiddal gázosítjuk. Minden helyről hat biopsziát vesznek. Három biopszia szolgál kontrollként, és hármat kannabidiol (1 μg/ml) hozzáadásával tenyésztünk. 24 óra elteltével a szövetek életképességét úgy értékeljük, hogy három minta közül egy-egy Alamar-t adunk hozzá. A liláról rózsaszínre való színváltozás életképes szövetet jelez. A másik 4 biopsziából származó felülúszót összegyűjtjük és -20 °C-on lefagyasztjuk. A biopsziákat ezután formalinba helyezik patológiai vizsgálat céljából.

Az ellenőrzött és a kannabisszal kezelt minták felülúszóját elemzik a TNF-alfa, gamma-interferon, IL-23, IL-12, IL-2, IL-10, IL-17 és IL-6 jelenlétére és szintjére.