肥満および2型糖尿病患者における血漿可溶性プロレニン受容体の影響

ヒト血液サンプルは、登録され、HSC の Tulane 大学の外来肥満外科クリニックで肥満手術を受ける予定の 50 人の肥満患者から前向きに収集されます (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; Bariatric Surgery Clinic and Surgeon の議長、およびShauna Levy、MD、肥満外科医のスペシャリスト）。 各患者で使用される肥満手術の種類が記録されます。 肥満手術の 6 か月後、約 50 ～ 60% の BW 損失があることが示されているため 15-18、それぞれ 5 mL の血液を含む 2 つのチューブの血液サンプルを取得する予定です。 血液は、手術前の訪問中および肥満手術後の 3 回の訪問中に採取されます: 1 週間 ± 2 ～ 3 日、1 か月 ± 2 週間、および 6 か月 ± 1 ～ 2 か月。 血液サンプルは、血糖値、HbA1c、脂質プロファイル (LDL、HDL、トリグリセリド) および sPRR の血漿測定に使用されます。 概日リズムが RAS に影響を与える可能性があるため、採血時間は記録されます。 ELISA による血漿 sPRR の定量化は、Tulane University School of Medicine にある Dr. Minolfa Prieto の研究室で行われます。 患者の生物学的サンプルは、サンプルを患者にリンクするコードによって識別されます。 研究の終了後、サンプルは肥満および 2 型糖尿病に関連する状態の研究にのみ使用されます。 背景要因には以下が含まれます: 性別、年齢、人種、民族性、健康保険の状態、および個人の病歴により、以下の状態のいずれかの存在が評価されます: 真性糖尿病または高血圧 (以下の治療のいずれかを含む: 降圧薬 - ACEi、AT1R 遮断薬) 、利尿薬、またはカルシウム拮抗薬）、経口避妊薬またはホルモン補充の使用、以前の手術（種類、日付）、月経不順を含む最終月経日、うっ血性心不全（CHF）、末梢血管疾患（PVD）、肺高血圧症（PHTN） ）、または虚血性心疾患、閉塞性睡眠時無呼吸（OSA）、喘息、深部静脈血栓症/肺塞栓症（DVT/PE）、胃食道逆流症（GERD）、肝臓病、脂質異常症、多嚢胞性卵巣症候群、うつ病、アルコール使用、物質虐待、および/またはタバコの使用。 身体検査には以下が含まれます：BW、BMI、胴囲、身長、オフィス血圧（少なくとも5分間休んだ後、患者が座位で外来診療所で測定されたDBPとSBP）、および脈拍数 患者の生物学的サンプルが特定されますサンプルと患者をリンクするコードによって。 ELISA測定用の血漿サンプルは、盲検法で2回アッセイされます。 ELISA キットは市販されており、IBL America, Inc. によって製造されています。 この試金は PI の実験室で定期的に実行され、適切な基準 (メーカーによって提供される) を使用して検証されています。 アッセイ時には、2 重または 3 重のサンプルを使用します。 ブランクとしてのバッファーなどの生物学的コントロールは、技術的コントロールとして使用されます。 ELISA キットは商用ベンダーから入手するため、ベンダーによる認証には、反応性、純度、アプリケーションの認証が含まれます。 これらの方法と結果は、以前に報告されています。 sPRR のさまざまな濃度の内部コントロールの標準曲線は、比較のために各プレートの読み取り値に含まれます。 バイアスを減らすために、サンプルは可能な限りランダムにアッセイされ、比較目的で既知の濃度の陽性標準コントロールが含まれます。 データ処理計画 (外れ値、欠落データのレポート) と統計分析計画 (統計分析計画、エンドポイント [一次および二次]、複数のテストを含める) の両方が使用されます。 私たちの研究室は sPRR ELISA を認証し、他の人によって公開された測定値と比較しました。 意味のある現実的な違いを確実に検出するために、サンプル数は各アッセイを実行するための要件に基づいています (検出力とサンプル サイズの計算)。 再現性を確保するために、すべての実験条件を詳細に含むすべてのプロトコルが報告されます。 研究の終了後、サンプルは肥満および DM 関連の研究にのみ使用されます。 目的 1: sPRR の血漿レベルが肥満手術後の肥満患者で減少するかどうかを判断します。 科学的根拠と理論的根拠: 肥満ラットでは、PRR とレニンは脂肪組織で 2 倍に増加します。 高脂肪食によって T2DM が誘発されたマウスの予備データは、肥満、SBP の増加、耐糖能障害、顕著なインスリン抵抗性、および食事療法の 18 週間までの血漿中の sPRR レベルの増加を特徴とする表現型の存在を示しました。 これらのマウスは、内臓脂肪からの脂肪細胞でのPRR発現の増加も示しました。 私たちの予備研究では、血漿 sPRR レベルは痩せた女性よりも痩せた男性の方が高いことが示されました。 対照的に、血漿 sPRR レベルは、男性よりも肥満の糖尿病女性で高かった。 さらに、T2DMの肥満患者は、女性では血漿sPRRとBMIの間に正の相関を示したが、男性では正の相関を示さなかったことがわかりました。 これは、脂肪組織が肥満患者の血漿 sPRR の主要な供給者であるという仮説を検証することを目的としています。

実験計画: 定量化は、肥満手術を受けている 50 人の肥満患者から得られた血漿サンプルで行われます。 血漿サンプルは、ELISA による血漿 sPRR の評価のために、肥満手術前 (術前訪問) および 2 回のフォローアップ訪問 (1 か月 ± 1 ~ 2 週間および 6 か月 ± 1 ~ 2 か月) のそれぞれで採取されます ( Prieto's Lab、Tulane University) (検出力分析を参照)。 これらのサンプルは、Tulane HSC (共同研究者) の Christopher G. Ducoin, MD の Bariatric and Minimal Invasive Surgery Clinic の患者から得られます。 比較は、すでに収集されており、Tulane Obesity-Endocannabinoids Study (Tina Thethi, M.D, Collaborator) の一部として利用可能な、やせたコントロール患者からのヒト生物学的匿名化血漿サンプルと確立されます。 患者の同意が得られた後、患者は肥満および最小侵襲手術クリニックで、バイタルサイン、血圧 (SBP および DBP、血圧計で測定)、ウエストとヒップの比率、および BMI を検査されます。 空腹時血液サンプルは、血糖、HbA1c、脂質プロファイル (LDL、HDL、トリグリセリド)、および sPRR のために静脈穿刺によって採取されます。 研究デザインのセクションに記載されているように、背景因子および個人の病歴が考慮されます。 検出力分析と統計的考察: 各時点でのすべての結果は、平均および標準偏差 (SD) として要約されます。 反復測定分散分析と対応のあるテストを実施して、時点全体の変化を評価します。 過去のデータによると、チューレーン大学の外来肥満クリニックでは、毎月約 10 人の患者が肥満手術を受けています。このプロジェクトの最初の6か月で、少なくとも50人の適格な患者が募集されると予想しています。

目的 2: sPRR の血漿レベルの変化が、肥満手術後の減量後の肥満患者の T2DM パラメータの改善と相関するかどうかを定義します。 科学的前提と理論的根拠: 肥満と 2 型糖尿病は CVD の主要な危険因子です。

RAS の活性化は、CV 危険因子の病因に関与しています。 多くの場合、T2DM は肥満手術の直後に改善され、大幅な BW 損失が持続するとさらに改善されます。 ただし、脂肪組織が肥満患者の血漿中のsPRRの主要な供給者であるかどうか、および血漿sPRRがこれらの患者の2型糖尿病および心血管合併症に寄与するかどうかは不明のままです。 sPRR 阻害剤の使用は、女性の肥満と心血管合併症を管理するための新しい治療アプローチを構成します。 肥満手術後の血漿sPRRレベルの低下が、肥満患者の血糖コントロールと脂質プロファイルの改善に関連しているという仮説を検証します。 分析および統計的考察: 複数の線形回帰モデルを使用して、sPRR、血糖、HbA1c、脂質プロファイル (LDL、HDL、トリグリセリド) 間の関連性を測定します。 比較は、手術前と手術後の2回の訪問で確立されます。 提案された n=50 は、最大 7 つの予測因子を持つモデルに適合し、sPRR の全変動性の少なくとも 12.25% が予測因子によって説明される場合、sPRR と任意の 1 つの予測因子との間の有意な関連を検出する 80% の検出力を持つのに十分です。 . 未調整および調整済みの相関関係と関連する P 値が報告されます。

期待される結果、落とし穴、および代替アプローチ 目的 1: 私たちの知る限り、血漿 sPRR-肥満-T2DM 間の関係を定義した以前の研究や、血漿 sPRR と BMI、WHR、または HbA1c との相関関係を確立した研究はありません。 血漿 sPRR レベルは痩せた対照サンプルよりも肥満の方が高く、対照と比較して血漿 sPRR レベルは 2 型糖尿病肥満患者の方が高いと予想されます。 背景因子を調整した後、血漿 sPRR レベルは T2DM 肥満女性の肥満と正の関連があると予想されますが、男性の対応する女性ではそうではなく、女性の血漿 sPRR の増加は高アンドロゲン血症による可能性があることを示唆しています。 目的 2: 血漿 sPRR の変化が、肥満手術後の肥満患者の T2DM および脂質プロファイルの改善と相関するかどうかを定義します。 強力な予備データに基づいて、この結果により、肥満患者におけるsPRRと代謝リスク要因の役割をよりよく理解できるようになると予想しています。 潜在的な落とし穴: 肥満手術を受ける患者はより一般的に女性であるため、男性の採用/登録が低い結果である場合、女性と男性の頻度データ比を 4:1 として分析を正当化します。血漿 sPRR およびインスリン抵抗性に対する肥満手術の直接的な影響と長期的な影響 (おそらく減量に関連する) の影響。 募集が予想よりも少ない場合は、Ochsner Clinic を含む他の地元の肥満手術センターに連絡します。