Impact van in plasma oplosbare proreninereceptor bij patiënten met obesitas en diabetes type 2

Er zullen prospectief menselijke bloedmonsters worden verzameld van 50 zwaarlijvige patiënten, die zijn ingeschreven en van plan zijn bariatrische chirurgie te ondergaan in de polikliniek voor bariatrische chirurgie aan de Tulane University, HSC (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; voorzitter van de bariatrische chirurgiekliniek en chirurg, en Shauna Levy, MD, specialist in bariatrische chirurgen). Het type bariatrische chirurgie dat bij elke patiënt wordt gebruikt, wordt geregistreerd. Omdat is aangetoond dat na 6 maanden bariatrische chirurgie er ongeveer 50-60% BW-verlies is 15-18, zijn we van plan om twee buisjes bloedmonsters te nemen met elk 5 ml bloed. Er zal bloed worden afgenomen tijdens het pre-operatieve bezoek en tijdens 3 bezoeken na de bariatrische chirurgie: 1 week ± 2-3 dagen, 1 maand ± 2 weken en 6 maanden ± 1 - 2 maanden. Bloedmonsters zullen worden gebruikt voor plasmametingen van: glycemie, HbA1c, lipidenprofiel (LDL, HDL, triglyceriden) en sPRR. Het tijdstip van bloedafname zal worden geregistreerd vanwege mogelijke effecten van circadiane ritmen op het RAS. Kwantificering van plasma-sPRR door ELISA zal worden uitgevoerd in het laboratorium van Dr. Minolfa Prieto aan de Tulane University School of Medicine. Biologische monsters van patiënten worden geïdentificeerd door een code die het monster aan de patiënt koppelt. Na afronding van het onderzoek zullen monsters uitsluitend worden gebruikt voor onderzoek naar obesitas en T2DM-gerelateerde aandoeningen. Achtergrondfactoren zijn onder meer: ​​geslacht, leeftijd, ras, etniciteit, status van ziektekostenverzekering en persoonlijke medische geschiedenis zullen de aanwezigheid van een van de volgende aandoeningen beoordelen: diabetes mellitus of hypertensie (inclusief een van de volgende behandelingen: antihypertensiva -ACEi, AT1R-blokkers diuretica of calciumantagonisten), gebruik van orale anticonceptiva of hormoonsubstitutie, eerdere operaties (type, datum), laatste menstruatiedatum inclusief onregelmatige menstruatie, congestief hartfalen (CHF), perifere vasculaire ziekte (PVD), pulmonale hypertensie (PHTN ), of ischemische hartziekte, obstructieve slaapapneu (OSA), astma, diepe veneuze trombose/longembolie (DVT/PE), gastro-oesofageale refluxziekte (GERD), leverziekte, dyslipidemie, polycysteus ovariumsyndroom, depressie, alcoholgebruik, middelengebruik misbruik en/of tabaksgebruik. Lichamelijk onderzoek omvat: BW, BMI, tailleomtrek, lengte, kantoor-BP (DBP en SBP gemeten op de polikliniek met de patiënt in een zittende positie na minimaal 5 minuten rusten) en polsslag Biologische monsters van de patiënt zullen worden geïdentificeerd door een code die het monster koppelt aan de patiënt. Plasmamonsters voor ELISA-metingen worden geblindeerd in tweevoud getest. ELISA-kits zijn in de handel verkrijgbaar en vervaardigd door IBL America, Inc. Deze assay wordt routinematig uitgevoerd in het laboratorium van de PI en is gevalideerd met behulp van de juiste standaarden (geleverd door de fabrikanten). Bij het testen gebruiken we duplicaat- of triplomonsters. Biologische controles zoals buffer als blanco zullen gebruikt worden als technische controles. Omdat ELISA-kits worden verkregen van commerciële leveranciers, omvat authenticatie door de leverancier(s) certificeringen van reactiviteit, zuiverheid en toepassingen. Deze methoden en resultaten zijn eerder gerapporteerd. De kromme van interne controlenormen van verschillende sPRR-concentraties zal ter vergelijking in elke plaatuitlezing worden opgenomen. Om vertekening te verminderen, worden monsters waar mogelijk willekeurig getest en bevatten ze positieve standaardcontroles met bekende concentraties voor vergelijkingsdoeleinden. Zowel een plan voor gegevensverwerking (uitschieters, rapport van ontbrekende gegevens) als een plan voor statistische analyse (plan voor statistische analyse, eindpunten [primair en secundair], opname voor meervoudig testen zal worden gebruikt.. Ons laboratorium heeft sPRR ELISA geverifieerd en vergeleken met metingen die door anderen zijn gepubliceerd. Om de detectie van betekenisvolle en realistische verschillen te garanderen, zijn de steekproefaantallen gebaseerd op de vereiste om elke assay uit te voeren (berekeningen van vermogen en steekproefomvang). Om reproduceerbaarheid te garanderen, zullen alle protocollen worden gerapporteerd, inclusief alle experimentele omstandigheden in detail. Na afronding van het onderzoek zullen monsters uitsluitend worden gebruikt voor onderzoek naar obesitas en DM. Doel 1: Bepalen of plasmaspiegels van sPRR afnemen bij obese patiënten na bariatrische chirurgie. Wetenschappelijk uitgangspunt en grondgedachte: Bij zwaarlijvige ratten worden PRR en renine tweevoudig verhoogd in vetweefsel. Voorlopige gegevens van muizen met T2DM-geïnduceerd door een vetrijk dieet toonden de aanwezigheid aan van een fenotype dat wordt gekenmerkt door obesitas, verhoogde SBP, glucose-intolerantie, duidelijke insulineresistentie en verhoogde niveaus van sPRR in plasma met 18 weken op het dieetregime. Deze muizen vertoonden ook een verhoogde PRR-expressie in adipocyten van visceraal vet. Ons vooronderzoek toonde aan dat plasma-sPRR-waarden hoger zijn bij magere mannen dan bij magere vrouwen. De sPRR-spiegels in het plasma waren daarentegen hoger bij vrouwen met obesitas en diabetes dan bij mannen. Verder vonden we dat zwaarlijvige patiënten met T2DM een positieve correlatie vertoonden tussen plasma sPRR en BMI bij vrouwen, maar niet bij mannen. Dit doel is om de hypothese te testen dat vetweefsel de belangrijkste leverancier is van plasma-sPRR bij obese patiënten.

Experimenteel ontwerp: kwantificeringen zullen worden gedaan in plasmamonsters verkregen van 50 zwaarlijvige patiënten die bariatrische chirurgie ondergaan. Er zullen plasmamonsters worden afgenomen vóór bariatrische chirurgie (pre-operatief bezoek) en bij elk van de 2 vervolgbezoeken (1 maand ± 1 - 2 weken en na 6 maanden ± 1-2 maanden) voor de beoordeling van plasma-sPRR door ELISA ( Prieto's Lab, Tulane University) (Zie Vermogensanalyse). Deze monsters zullen worden verkregen van patiënten van de Bariatric and Minimal Invasive Surgery Clinic van Christopher G. Ducoin, MD bij Tulane HSC (medewerker). Er zullen vergelijkingen worden gemaakt met menselijke biologische geanonimiseerde plasmamonsters van magere controlepatiënten die al zijn verzameld en beschikbaar zijn als onderdeel van de Tulane Obesity-Endocannabinoids Study (Tina Thethi, MD, medewerker). Na toestemming van de patiënt zal de patiënt in de Bariatric and Minimal Invasive Surgery Clinic worden onderzocht op vitale functies, BP (SBP en DBP, genomen door sfygmomanometrie), taille-tot-heupverhouding en BMI. Nuchtere bloedmonsters worden afgenomen door aderpunctie voor glycemie, HbA1c, lipidenprofiel (LDL, HDL, triglyceriden) en sPRR. Achtergrondfactoren en persoonlijke medische geschiedenis zullen worden genomen zoals beschreven in het gedeelte Studieontwerp. Vermogensanalyse en statistische overwegingen: alle uitkomsten op elk tijdstip worden samengevat als gemiddelde en standaarddeviatie (SD). De variantieanalyse met herhaalde metingen en de gepaarde test zullen worden uitgevoerd om de verandering over de tijdspunten te evalueren. De historische gegevens suggereren dat ongeveer 10 patiënten per maand bariatrische chirurgie ondergaan in de Outpatient Bariatric Clinic aan de Tulane University; we verwachten dat er in de eerste 6 maanden van dit project minstens 50 in aanmerking komende patiënten zullen worden aangeworven.

Doel 2: Bepalen of veranderingen in plasmaspiegels van sPRR correleren met verbetering van T2DM-parameters bij obese patiënten na gewichtsverlies na bariatrische chirurgie. Wetenschappelijk uitgangspunt en grondgedachte: Obesitas en T2DM zijn belangrijke risicofactoren voor HVZ.

Activering van RAS is betrokken bij de pathogenese van CV risicofactoren. Vaak verbetert T2DM onmiddellijk na bariatrische chirurgie en zelfs nog verder met het aanhoudende substantiële BW-verlies. Het blijft echter onbekend of vetweefsel de belangrijkste leverancier is van sPRR in het plasma van obese patiënten, en of plasma-sPRR bijdraagt ​​aan T2DM en CV complicaties bij deze patiënten. Het gebruik van sPRR-remmers zou een nieuwe therapeutische benadering vormen om obesitas bij vrouwen en CV complicaties te beheersen. We zullen de hypothese testen dat verlagingen van plasma-sPRR-niveaus na bariatrische chirurgie geassocieerd zijn met de verbetering van de glykemische controle en het lipidenprofiel bij obese patiënten. Analyse en statistische overwegingen: Meerdere lineaire regressiemodellen zullen worden gebruikt om de associatie tussen sPRR, glykemie, HbA1c, lipidenprofiel (LDL, HDL, triglyceriden) te meten. Er worden vergelijkingen gemaakt met waarden voor en 2 bezoeken na de operatie. De voorgestelde n=50 zal voldoende zijn om modellen met maximaal 7 voorspellers te passen en om 80% vermogen te hebben om een ​​significant verband tussen sPRR en een willekeurige voorspeller te detecteren als ten minste 12,25% van de totale variabiliteit van sPRR wordt verklaard door de voorspeller . Ongecorrigeerde en gecorrigeerde correlaties en bijbehorende P-waarden worden gerapporteerd.

Verwachte resultaten, valkuilen en alternatieve benadering Doel 1: Voor zover wij weten, heeft geen eerdere studie de relatie tussen plasma-sPRR-obesitas-T2DM gedefinieerd of de correlaties tussen plasma-sPRR en BMI, WHR of HbA1c vastgesteld. We verwachten dat plasma-sPRR-niveaus hoger zullen zijn bij zwaarlijvige dan in magere controlemonsters, en dat in vergelijking met controle, plasma-sPRR-niveaus hoger zullen zijn bij T2DM-obese patiënten. We verwachten dat plasma-sPRR-niveaus positief geassocieerd zullen zijn met obesitas bij vrouwen met T2DM-obesitas, maar niet bij mannelijke tegenhangers na correctie voor achtergrondfactoren, wat suggereert dat verhogingen van plasma-sPRR bij vrouwen mogelijk te wijten zijn aan hyperandrogenemie. Doel 2: bepalen of veranderingen in plasma-sPRR correleren met de verbetering van T2DM en het lipidenprofiel bij obese patiënten na bariatrische chirurgie. Op basis van onze sterke voorlopige gegevens verwachten we dat de resultaten een beter begrip zullen geven van de rol van sPRR en metabole risicofactoren bij obese patiënten. Potentiële valkuilen: Omdat patiënten die bariatrische chirurgie ondergaan vaker vrouwen zijn, zullen we, als de rekrutering/inschrijving van mannen laag is, de analyse rechtvaardigen met een frequentiegegevensverhouding tussen vrouwen en mannen van 4:1.19 Alternatieve benadering: we verwachtten dat de resultaten een vergelijking mogelijk zouden maken de impact van de directe effecten van de bariatrische chirurgie versus de langetermijneffecten (waarschijnlijk gerelateerd aan gewichtsverlies) op plasma-sPRR en insulineresistentie. Als de werving minder is dan verwacht, nemen we contact op met andere lokale centra voor bariatrische chirurgie, waaronder de Ochsner Clinic.