Vliv plazmatického rozpustného proreninového receptoru u obézních pacientů a pacientů s diabetem 2. typu

Vzorky lidské krve budou prospektivně odebrány od 50 obézních pacientů, kteří jsou zapsáni a plánují podstoupit bariatrickou operaci na klinice ambulantní bariatrické chirurgie na Tulane University, HSC (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; předseda kliniky bariatrické chirurgie a chirurg, a Shauna Levy, MD, specialistka na bariatrický chirurg). Bude zaznamenán typ bariatrické operace použité u každého pacienta. Protože bylo prokázáno, že po 6 měsících bariatrické operace dochází k 50-60% ztrátě tělesné hmotnosti 15-18, plánujeme získat dvě zkumavky s krevními vzorky po 5 ml krve. Krev bude odebrána během předoperační návštěvy a během 3 návštěv po bariatrické operaci: 1 týden ± 2-3 dny, 1 měsíc ± 2 týdny a 6 měsíců ± 1 - 2 měsíce. Vzorky krve budou použity pro měření plazmy: glykémie, HbA1c, lipidového profilu (LDL, HDL, triglyceridy) a sPRR. Čas odběru krevního vzorku bude zaznamenán kvůli potenciálnímu vlivu cirkadiánních rytmů na RAS. Kvantifikace plazmatického sPRR pomocí ELISA bude provedena v laboratoři Dr. Minolfy Prieto na lékařské fakultě Tulane University. Biologické vzorky pacienta budou identifikovány kódem, který spojí vzorek s pacientem. Po ukončení studie budou vzorky použity výhradně pro výzkum obezity a stavů souvisejících s T2DM. Základní faktory budou zahrnovat: pohlaví, věk, rasu, etnický původ, stav zdravotního pojištění a osobní anamnézu posoudí přítomnost některého z následujících stavů: diabetes mellitus nebo hypertenze (včetně kterékoli z následujících léčeb: antihypertenziva -ACEi, blokátory AT1R , diuretika nebo antagonisté vápníku), užívání perorální antikoncepce nebo hormonální substituce, předchozí operace (typ, datum), datum poslední menstruace včetně jakékoli menstruační nepravidelnosti, městnavé srdeční selhání (CHF), onemocnění periferních cév (PVD), plicní hypertenze (PHTN ), nebo ischemická choroba srdeční, obstrukční spánková apnoe (OSA), astma, hluboká žilní trombóza/plicní embolie (DVT/PE), gastroezofageální refluxní choroba (GERD), onemocnění jater, dyslipidémie, syndrom polycystických vaječníků, deprese, užívání alkoholu, návykové látky zneužívání a/nebo užívání tabáku. Fyzikální vyšetření bude zahrnovat: BW, BMI, obvod pasu, výšku, TK v ordinaci (DBP a SBP měřeno na ambulanci s pacientem vsedě po odpočinku po dobu alespoň 5 minut) a tepovou frekvenci Budou identifikovány biologické vzorky pacienta kódem spojujícím vzorek s pacientem. Vzorky plazmy pro měření ELISA budou testovány v duplikátech zaslepeným způsobem. Soupravy ELISA jsou komerčně dostupné a vyrábí je IBL America, Inc. Tento test se běžně provádí v laboratoři PI a byl validován pomocí příslušných standardů (poskytnutých výrobci). Při testování použijeme duplicitní nebo trojité vzorky. Jako technické kontroly budou použity biologické kontroly, jako je pufr jako slepý vzorek. Vzhledem k tomu, že soupravy ELISA budou získány od komerčních prodejců, autentizace dodavatelem (prodejci) zahrnuje certifikaci reaktivity, čistoty a aplikací. Tyto metody a výsledky byly již dříve popsány. Křivka standardů vnitřních kontrol různých koncentrací sPRR bude zahrnuta do každého odečtení destičky pro účely srovnání. Aby se snížilo zkreslení, vzorky budou náhodně testovány, kdykoli to bude možné, a budou zahrnovat pozitivní standardní kontroly se známými koncentracemi pro účely srovnání. Bude použit plán zpracování dat (odlehlé hodnoty, zpráva o chybějících datech) a plán statistické analýzy (plán statistické analýzy, koncové body [primární a sekundární], zahrnutí pro vícenásobné testování. Naše laboratoř ověřila sPRR ELISA a porovnala ji s měřeními publikovanými jinými. Pro zajištění detekce smysluplných a realistických rozdílů jsou počty vzorků založeny na požadavku na provedení každého testu (výpočty výkonu a velikosti vzorku). Pro zajištění reprodukovatelnosti budou uvedeny všechny protokoly, včetně podrobně všech experimentálních podmínek. Po ukončení studie budou vzorky použity výhradně pro výzkum obezity a DM. Cíl 1: Zjistit, zda plazmatické hladiny sPRR klesají u obézních pacientů po bariatrické operaci. Vědecký předpoklad a zdůvodnění: U obézních potkanů ​​jsou PRR a renin v tukové tkáni dvojnásobně zvýšeny. Předběžné údaje od myší s T2DM indukovaným dietou s vysokým obsahem tuku ukázaly přítomnost fenotypu charakterizovaného obezitou, zvýšeným SBP, glukózovou intolerancí, výraznou inzulinovou rezistencí a zvýšenými hladinami sPRR v plazmě po 18 týdnech dietního režimu. Tyto myši také vykazovaly zvýšenou expresi PRR v adipocytech z viscerálního tuku. Naše předběžná studie ukázala, že plazmatické hladiny sPRR jsou vyšší u štíhlých mužů než u štíhlých žen. Naproti tomu plazmatické hladiny sPRR byly vyšší u obézních diabetiček než u mužů. Dále jsme zjistili, že obézní pacienti s T2DM vykazovali pozitivní korelaci mezi plazmatickou sPRR a BMI u žen, ale ne u mužů. Tento cíl se snaží otestovat hypotézu, že tuková tkáň je hlavním dodavatelem plazmatické sPRR u obézních pacientů.

Experimentální design: kvantifikace budou provedeny ve vzorcích plazmy získaných od 50 obézních pacientů podstupujících bariatrickou operaci. Vzorky plazmy budou odebrány před bariatrickou operací (předoperační návštěva) a při každé ze 2 následných návštěv (1 měsíc ± 1 - 2 týdny a 6 měsíců ± 1 - 2 měsíce) pro hodnocení plazmatické sPRR metodou ELISA ( Prieto's Lab, Tulane University) (viz Power Analysis). Tyto vzorky budou získány od pacientů z Kliniky bariatrické a miniinvazivní chirurgie MUDr. Christophera G. Ducoina v Tulane HSC (spolupracovník). Budou provedena srovnání se vzorky lidské biologické deidentifikované plazmy od štíhlých kontrolních pacientů, které již byly odebrány a jsou k dispozici jako součást studie Tulane Obesity-Endocanabinoids Study (Tina Thethi, M.D, Collaborator). Po odsouhlasení pacientem bude pacient na Klinice bariatrické a miniinvazivní chirurgie vyšetřen na vitální funkce, TK (SBP a DBP, sfygmomanometrie), poměr pasu k bokům a BMI. Vzorky krve nalačno budou odebrány punkcí žíly na zjištění glykémie, HbA1c, lipidového profilu (LDL, HDL, triglyceridy) a sPRR. Faktory pozadí a osobní anamnéza budou odebrány tak, jak je popsáno v části Návrh studie. Analýza síly a statistické úvahy: Všechny výsledky v každém časovém bodě budou shrnuty jako průměr a standardní odchylka (SD). Pro vyhodnocení změny napříč časovými body bude provedena analýza rozptylu opakovaných měření a párový test. Historické údaje naznačují, že na bariatrické klinice na Tulane University podstoupí bariatrickou operaci měsíčně asi 10 pacientů; očekáváme, že během prvních 6 měsíců tohoto projektu bude přijato alespoň 50 způsobilých pacientů.

Cíl 2: Definovat, zda změny plazmatických hladin sPRR korelují se zlepšením parametrů T2DM u obézních pacientů po úbytku hmotnosti po bariatrické operaci. Vědecký předpoklad a zdůvodnění: Obezita a T2DM jsou hlavní rizikové faktory KVO.

Aktivace RAS se podílí na patogenezi KV rizikových faktorů. Často se T2DM zlepší ihned po bariatrické operaci a ještě dále s trvalou podstatnou ztrátou BW. Zůstává však neznámé, zda je tuková tkáň hlavním dodavatelem sPRR v plazmě obézních pacientů a zda plazmatická sPRR přispívá k T2DM a KV komplikacím u těchto pacientů. Použití inhibitorů sPRR by představovalo nový terapeutický přístup ke zvládání obezity u žen a KV komplikací. Budeme testovat hypotézu, že pokles hladin plazmatické sPRR po bariatrické operaci je spojen se zlepšením glykemické kontroly a lipidového profilu u obézních pacientů. Analýza a statistické úvahy: K měření asociace mezi sPRR, glykémií, HbA1c, profilem lipidů (LDL, HDL, triglyceridy) budou použity modely vícenásobné lineární regrese. Srovnání bude provedeno s hodnotami před a 2 návštěvami po operaci. Navrhované n=50 bude postačovat k tomu, aby vyhovovalo modelům až se 7 prediktory a mělo 80% schopnost detekovat významnou souvislost mezi sPRR a kterýmkoli jedním prediktorem, pokud alespoň 12,25 % z celkové variability sPRR připadá na prediktor. . Budou hlášeny neupravené a upravené korelace a související hodnoty P.

Očekávané výsledky, úskalí a alternativní přístup Cíl 1: Pokud je nám známo, žádná předchozí studie nedefinovala vztah mezi plazmatickou sPRR-obezitou-T2DM ani nestanovila korelace mezi plazmatickou sPRR a BMI, WHR nebo HbA1c. Očekáváme, že plazmatické hladiny sPRR budou vyšší u obézních než u štíhlých kontrolních vzorků a že ve srovnání s kontrolou budou hladiny sPRR v plazmě vyšší u obézních pacientů s T2DM. Očekáváme, že plazmatické hladiny sPRR budou pozitivně souviset s obezitou u obézních žen s T2DM, ale ne u mužských protějšků po úpravě o faktory pozadí, což naznačuje, že zvýšení plazmatické sPRR u žen může být způsobeno hyperandrogenémií. Cíl 2: definovat, zda změny sPRR v plazmě korelují se zlepšením T2DM a lipidového profilu u obézních pacientů po bariatrické operaci. Na základě našich silných předběžných údajů očekáváme, že výsledky umožní lépe porozumět roli sPRR a metabolických rizikových faktorů u obézních pacientů. Potenciální úskalí: Vzhledem k tomu, že pacienty podstupující bariatrickou operaci jsou častěji ženy, pokud bude nábor/nábor mužů nízký, odůvodníme analýzu poměrem četnosti žen a mužů 4:1,19 Alternativní přístup: Očekávali jsme, že výsledky umožní srovnání dopad přímých účinků bariatrické chirurgie vs. dlouhodobé účinky (pravděpodobně související se ztrátou hmotnosti) na plazmatickou sPRR a inzulínovou rezistenci. Pokud bude nábor nižší, než se očekávalo, oslovíme další místní centra bariatrické chirurgie, včetně Ochsnerovy kliniky.