血浆可溶性肾素原受体对肥胖和 2 型糖尿病患者的影响

将从 50 名肥胖患者中前瞻性地收集人体血液样本，这些患者已登记并计划在杜兰大学 HSC 的门诊减肥手术诊所进行减肥手术（Christopher G. Ducoin，医学博士，公共卫生硕士；减肥手术诊所主席和外科医生，和 Shauna Levy，医学博士，减肥外科医生专家）。 将记录每位患者使用的减肥手术类型。 因为已经表明，在 6 个月的减肥手术后，大约有 50-60% 的 BW 损失 15-18，我们计划获得两管血液样本，每管 5 mL 血液。 将在术前访问期间和减肥手术后的 3 次访问期间抽血：1 周 ± 2-3 天、1 个月 ± 2 周和 6 个月 ± 1-2 个月。 血液样本将用于血浆测量：血糖、HbA1c、脂质概况（LDL、HDL、甘油三酯）和 sPRR。 由于昼夜节律对 RAS 的潜在影响，将记录采血时间。 通过 ELISA 对血浆 sPRR 进行定量将在位于杜兰大学医学院的 Minolfa Prieto 博士实验室进行。 患者生物样本将通过将样本与患者相关联的代码进行识别。 研究结束后，样本将专门用于肥胖和 T2DM 相关疾病的研究。 背景因素将包括：性别、年龄、种族、种族、健康保险状况和个人病史将评估是否存在以下任何一种情况：糖尿病或高血压（包括以下任何一种治疗：抗高血压药物-ACEi、AT1R 阻滞剂、利尿剂或钙拮抗剂）、口服避孕药或激素替代疗法的使用、既往手术（类型、日期）、末次月经日期（包括任何月经不调）、充血性心力衰竭 (CHF)、外周血管疾病 (PVD)、肺动脉高压 (PHTN) )，或缺血性心脏病、阻塞性睡眠呼吸暂停 (OSA)、哮喘、深静脉血栓形成/肺栓塞 (DVT/PE)、胃食管反流病 (GERD)、肝病、血脂异常、多囊卵巢综合征、抑郁症、饮酒、物质滥用和/或烟草使用。 身体检查将包括：BW、BMI、腰围、身高、诊室血压（DBP 和 SBP 在门诊测量，患者在休息至少 5 分钟后保持坐姿），以及脉率 将鉴定患者生物样本通过将样品与患者联系起来的代码。 用于 ELISA 测量的血浆样本将以盲法一式两份进行测定。 ELISA 试剂盒可商购并由 IBL America, Inc. 制造。 该检测通常在 PI 的实验室中进行，并已使用适当的标准（由制造商提供）进行了验证。 我们将在检测时使用一式两份或一式三份的样本。 生物对照如缓冲液作为空白将用作技术对照。 由于 ELISA 试剂盒将从商业供应商处获得，因此供应商的认证包括反应性、纯度和应用的认证。 这些方法和结果先前已被报道过。 各种浓度的 sPRR 的内部控制标准曲线将包含在每个板读数中以用于比较目的。 为减少偏差，样本将尽可能随机化验，并包括已知浓度的阳性标准对照以用于比较目的。 将使用数据处理计划（离群值、缺失数据报告）和统计分析计划（统计分析计划、终点[主要和次要]、包含多项测试）。 我们的实验室对 sPRR ELISA 进行了验证，并与其他人发布的测量结果进行了比较。 为确保检测有意义和现实的差异，样本数量基于执行每个测定的要求（功率和样本大小计算）。 为确保可重复性，将报告所有协议，包括详细的所有实验条件。 研究结束后，样本将专门用于肥胖和糖尿病相关研究。 目标 1：确定减肥手术后肥胖患者的血浆 sPRR 水平是否降低。 科学前提和基本原理：在肥胖大鼠中，PRR 和肾素在脂肪组织中增加了两倍。 来自高脂肪饮食诱导的 T2DM 小鼠的初步数据显示，在饮食方案的 18 周内，存在以肥胖、收缩压增加、葡萄糖耐受不良、明显的胰岛素抵抗和血浆中 sPRR 水平升高为特征的表型。 这些小鼠还显示内脏脂肪的脂肪细胞中 PRR 表达增加。 我们的初步研究表明，瘦男性的血浆 sPRR 水平高于瘦女性。 相比之下，肥胖糖尿病女性的血浆 sPRR 水平高于男性。 此外，我们发现肥胖的 T2DM 患者在女性血浆 sPRR 和 BMI 之间呈正相关，但在男性中则不然。 此目的旨在检验脂肪组织是肥胖患者血浆 sPRR 的主要供应者这一假设。

实验设计：将对取自 50 名接受减肥手术的肥胖患者的血浆样本进行量化。 将在减肥手术前（术前访问）和 2 次后续访问（1 个月±1-2 周和 6 个月±1-2 个月）中的每一次抽取血浆样本，用于通过 ELISA 评估血浆 sPRR（ Prieto 的实验室，杜兰大学）（参见功率分析）。 这些样本将从 Tulane HSC（合作者）医学博士 Christopher G. Ducoin 的减肥和微创外科诊所的患者处获得。 将与来自瘦对照患者的人类生物去识别血浆样本进行比较，这些样本已经收集并作为杜兰肥胖 - 内源性大麻素研究（Tina Thethi，医学博士，合作者）的一部分提供。 在征得患者同意后，患者将在减肥和微创外科门诊检查生命体征、血压（SBP 和 DBP，通过血压计测量）、腰臀比和 BMI。 将通过静脉穿刺抽取空腹血样以检测血糖、HbA1c、脂质谱（LDL、HDL、甘油三酯）和 sPRR。 背景因素和个人病史将如研究设计部分所述。 功效分析和统计考虑：每个时间点的所有结果将汇总为平均值和标准偏差 (SD)。 将进行重复测量方差分析和配对测试以评估跨时间点的变化。 历史数据表明，杜兰大学减肥门诊每月约有 10 名患者接受减肥手术；我们预计在该项目的前 6 个月内将至少招募 50 名符合条件的患者。

目标 2：确定 sPRR 血浆水平的变化是否与肥胖患者在减肥手术后体重减轻后 T2DM 参数的改善相关。 科学前提和基本原理：肥胖和 T2DM 是 CVD 的主要危险因素。

RAS 的激活与 CV 危险因素的发病机制有关。 T2DM 通常在减肥手术后立即得到改善，甚至随着持续的大量 BW 损失而得到进一步改善。 然而，尚不清楚脂肪组织是否是肥胖患者血浆中 sPRR 的主要供应者，以及血浆 sPRR 是否与这些患者的 T2DM 和 CV 并发症有关。 使用 sPRR 抑制剂将构成一种新的治疗方法来控制女性肥胖和 CV 并发症。 我们将检验减肥手术后血浆 sPRR 水平降低与肥胖患者血糖控制和血脂谱改善相关的假设。 分析和统计考虑：多元线性回归模型将用于测量 sPRR、血糖、HbA1c、血脂谱（LDL、HDL、甘油三酯）之间的关联。 将与手术前和手术后 2 次就诊的值进行比较。 建议的 n=50 将足以拟合具有多达 7 个预测变量的模型，并且如果预测变量至少占 sPRR 总变异性的 12.25%，则有 80% 的能力检测 sPRR 与任何一个预测变量之间的显着关联. 将报告未调整和调整后的相关性和相关的 P 值。

预期结果、缺陷和替代方法 目标 1：据我们所知，之前没有研究定义血浆 sPRR-肥胖-T2DM 之间的关系，也没有建立血浆 sPRR 与 BMI、WHR 或 HbA1c 之间的相关性。 我们预计肥胖患者的血浆 sPRR 水平将高于瘦对照样品，并且与对照相比，T2DM 肥胖患者的血浆 sPRR 水平将更高。 我们预计血浆 sPRR 水平将与 T2DM 肥胖女性的肥胖呈正相关，但在调整背景因素后与男性不相关，这表明女性血浆 sPRR 的增加可能是由于高雄激素血症。 目标 2：将确定血浆 sPRR 的变化是否与减肥手术后肥胖患者的 T2DM 和脂质谱的改善相关。 基于我们强大的初步数据，我们预计结果将有助于更好地了解 sPRR 和代谢危险因素在肥胖患者中的作用。 潜在缺陷：由于接受减肥手术的患者更常见的是女性，如果男性的招募/注册结果较低，我们将证明女性与男性频率数据比率为 4:1.19 的分析是合理的 替代方法：我们预计结果允许比较减肥手术的直接影响与长期影响（可能与体重减轻有关）对血浆 sPRR 和胰岛素抵抗的影响。 如果招募人数少于预期，我们将联系其他当地的减肥手术中心，包括 Ochsner Clinic。