Impacto do receptor de prorenina solúvel no plasma em pacientes obesos e diabéticos tipo 2

Amostras de sangue humano serão coletadas prospectivamente de 50 pacientes obesos, que estão matriculados e planejando realizar cirurgia bariátrica na Clínica de Cirurgia Bariátrica Ambulatorial da Universidade de Tulane, HSC (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; Presidente da Clínica de Cirurgia Bariátrica e Cirurgião, e Shauna Levy, MD, especialista em cirurgia bariátrica). O tipo de cirurgia bariátrica utilizada em cada paciente será registrado. Como foi demonstrado que após 6 meses de cirurgia bariátrica há cerca de 50-60% de perda de peso corporal 15-18, planejamos obter dois tubos de amostras de sangue com 5 mL de sangue cada. O sangue será coletado durante a visita pré-operatória e durante 3 visitas após a cirurgia bariátrica: 1 semana ± 2-3 dias, 1 mês ± 2 semanas e 6 meses ± 1 - 2 meses. Amostras de sangue serão utilizadas para dosagens plasmáticas de: glicemia, HbA1c, perfil lipídico (LDL, HDL, triglicerídeos) e sPRR. O tempo de coleta da amostra de sangue será registrado devido aos efeitos potenciais dos ritmos circadianos no SRA. A quantificação do plasma sPRR por ELISA será realizada no laboratório do Dr. Minolfa Prieto localizado na Tulane University School of Medicine. As amostras biológicas do paciente serão identificadas por um código que vinculará a amostra ao paciente. Após a conclusão do estudo, as amostras serão utilizadas exclusivamente para pesquisa de obesidade e doenças relacionadas ao DM2. Os fatores de histórico incluirão: sexo, idade, raça, etnia, status de plano de saúde e histórico médico pessoal avaliarão a presença de qualquer uma das seguintes condições: diabetes mellitus ou hipertensão (incluindo qualquer um dos seguintes tratamentos: medicamentos anti-hipertensivos -ACEi, bloqueadores AT1R , diuréticos ou antagonistas do cálcio), uso de contraceptivos orais ou reposição hormonal, cirurgias anteriores (tipo, data), data da última menstruação incluindo qualquer irregularidade menstrual, insuficiência cardíaca congestiva (ICC), doença vascular periférica (PVD), hipertensão pulmonar (PHTN ), ou doença cardíaca isquêmica, apneia obstrutiva do sono (OSA), asma, trombose venosa profunda/embolia pulmonar (TVP/EP), doença do refluxo gastroesofágico (DRGE), doença hepática, dislipidemia, síndrome do ovário policístico, depressão, uso de álcool, substância abuso e/ou uso de tabaco. O exame físico incluirá: PC, IMC, circunferência da cintura, altura, PA no consultório (PAD e PAS medidos no Ambulatório com o paciente sentado após repouso de pelo menos 5 min) e frequência de pulso Amostras biológicas do paciente serão identificadas por um código que liga a amostra ao paciente. As amostras de plasma para medições de ELISA serão analisadas em duplicado de forma cega. Os kits ELISA estão disponíveis comercialmente e são fabricados pela IBL America, Inc. Este ensaio é realizado rotineiramente no laboratório do PI e foi validado usando padrões apropriados (fornecidos pelos fabricantes). Usaremos amostras duplicadas ou triplicadas quando analisadas. Controles biológicos, como tampão ou branco, serão usados ​​como controles técnicos. Como os kits ELISA serão obtidos de fornecedores comerciais, a autenticação do(s) fornecedor(es) inclui certificações de reatividade, pureza e aplicações. Esses métodos e resultados foram relatados anteriormente. A curva padrão dos controles internos de várias concentrações de sPRR será incluída em cada leitura de placa para fins de comparação. Para reduzir o viés, as amostras serão analisadas aleatoriamente sempre que possível e incluirão controles padrão positivos com concentrações conhecidas para fins de comparação. Ambos, um plano de tratamento de dados (outliers, relatório de dados ausentes) e um plano de análise estatística (plano de análise estatística, endpoints [primários e secundários], inclusão para testes múltiplos serão usados. Nosso laboratório autenticou o sPRR ELISA e comparou com medições publicadas por outros. Para garantir a detecção de diferenças significativas e realistas, os números das amostras são baseados no requisito para realizar cada ensaio (cálculos de potência e tamanho da amostra). Para garantir a reprodutibilidade, todos os protocolos serão relatados incluindo todas as condições experimentais em detalhes. Após a conclusão do estudo, as amostras serão utilizadas exclusivamente para pesquisas relacionadas à obesidade e DM. Objetivo 1: Determinar se os níveis plasmáticos de sPRR diminuem em pacientes obesos após cirurgia bariátrica. Premissa Científica e Justificativa: Em ratos obesos, PRR e renina são aumentados duas vezes no tecido adiposo. Dados preliminares de camundongos com DM2 induzido por dieta rica em gordura mostraram a presença de um fenótipo caracterizado por obesidade, aumento da PAS, intolerância à glicose, acentuada resistência à insulina e aumento dos níveis de sPRR no plasma em 18 semanas no regime dietético. Esses camundongos também mostraram aumento da expressão de PRR em adipócitos da gordura visceral. Nosso estudo preliminar mostrou que os níveis plasmáticos de sPRR são maiores em homens magros do que em mulheres magras. Em contraste, os níveis plasmáticos de sPRR foram maiores em mulheres diabéticas obesas do que em homens. Além disso, descobrimos que pacientes obesos com DM2 exibiram uma correlação positiva entre sPRR plasmático e IMC em mulheres, mas não em homens. Este visa testar a hipótese de que o tecido adiposo é o principal fornecedor de sPRR plasmático em pacientes obesos.

Desenho Experimental: as quantificações serão feitas em amostras de plasma obtidas de 50 pacientes obesos submetidos à cirurgia bariátrica. Amostras de plasma serão coletadas antes da cirurgia bariátrica (visita pré-operatória) e em cada uma das 2 visitas de acompanhamento (1 mês ± 1 - 2 semanas e aos 6 meses ± 1-2 meses) para a avaliação do plasma sPRR por ELISA ( Prieto's Lab, Tulane University) (Veja Análise de Poder). Essas amostras serão obtidas de pacientes da Clínica de Cirurgia Bariátrica e Minimamente Invasiva de Christopher G. Ducoin, MD em Tulane HSC (Colaborador). As comparações serão estabelecidas com amostras de plasma humano sem identificação biológica de pacientes de controle magro que já foram coletadas e estão disponíveis como parte do Tulane Obesity-Endocannabinoids Study (Tina Thethi, M.D, Colaboradora). Após o consentimento do paciente, o paciente será examinado na Clínica de Cirurgia Bariátrica e Minimamente Invasiva para sinais vitais, PA (PAS e PAD, medidos por esfigmomanometria), relação cintura-quadril e IMC. Amostras de sangue em jejum serão coletadas por punção venosa para glicemia, HbA1c, perfil lipídico (LDL, HDL, triglicerídeos) e sPRR. Fatores de antecedentes e histórico médico pessoal serão obtidos conforme descrito na seção Desenho do estudo. Análise de poder e considerações estatísticas: Todos os resultados em cada ponto de tempo serão resumidos como média e desvio padrão (DP). A análise de variância de medidas repetidas e o teste pareado serão conduzidos para avaliar a mudança ao longo dos pontos de tempo. Os dados históricos sugerem que cerca de 10 pacientes recebem cirurgia bariátrica por mês no Ambulatório de Bariátrica da Universidade de Tulane; esperamos que pelo menos 50 pacientes elegíveis sejam recrutados nos primeiros 6 meses deste projeto.

Objetivo 2: Definir se as alterações nos níveis plasmáticos de sPRR se correlacionam com a melhora dos parâmetros de DM2 em pacientes obesos após perda de peso após cirurgia bariátrica. Premissa e Justificativa Científica: Obesidade e DM2 são os principais fatores de risco para DCV.

A ativação do SRA está implicada na patogênese dos fatores de risco CV. Freqüentemente, o DM2 melhora imediatamente após a cirurgia bariátrica e ainda mais com a perda substancial de peso corporal sustentada. No entanto, permanece desconhecido se o tecido adiposo é o principal fornecedor de sPRR no plasma de pacientes obesos e se o sPRR plasmático contribui para o DM2 e complicações CV nesses pacientes. O uso de inibidores de sPRR constituiria uma nova abordagem terapêutica para controlar a obesidade em mulheres e complicações CV. Testaremos a hipótese de que a diminuição dos níveis plasmáticos de sPRR após a cirurgia bariátrica está associada à melhora do controle glicêmico e do perfil lipídico em pacientes obesos. Análise e Considerações Estatísticas: Modelos de regressão linear múltipla serão usados ​​para medir a associação entre sPRR, glicemia, HbA1c, perfil lipídico (LDL, HDL, triglicerídeos). As comparações serão estabelecidas com valores antes e 2 visitas após a cirurgia. O n=50 proposto será suficiente para ajustar modelos com até 7 preditores e ter 80% de poder para detectar uma associação significativa entre sPRR e qualquer preditor se pelo menos 12,25% da variabilidade total de sPRR for contabilizado pelo preditor . Correlações não ajustadas e ajustadas e valores de P associados serão relatados.

Resultados esperados, armadilhas e abordagem alternativa Objetivo 1: Até onde sabemos, nenhum estudo anterior definiu a relação entre sPRR-obesidade-T2DM plasmático ou estabeleceu as correlações entre sPRR plasmático e IMC, RCQ ou HbA1c. Esperamos que os níveis plasmáticos de sPRR sejam maiores em obesos do que em amostras de controle magras e que, em comparação com o controle, os níveis plasmáticos de sPRR sejam maiores em pacientes obesos com DM2. Prevemos que os níveis plasmáticos de sPRR estarão positivamente associados à obesidade em mulheres obesas com DM2, mas não em contrapartes masculinas após o ajuste para fatores de base, sugerindo que aumentos no sPRR plasmático em mulheres podem ser devidos à hiperandrogenemia. Objetivo 2: definirá se as alterações no sPRR plasmático se correlacionam com a melhora do DM2 e perfil lipídico em pacientes obesos após cirurgia bariátrica. Com base em nossos fortes dados preliminares, prevemos que os resultados permitirão uma melhor compreensão do papel do sPRR e dos fatores de risco metabólico em pacientes obesos. Armadilhas potenciais: como os pacientes submetidos à cirurgia bariátrica são mais comumente mulheres, se o recrutamento/inscrição de homens for baixo, justificaremos a análise com relação de dados de frequência de mulheres para homens de 4:1.19 Abordagem alternativa: esperávamos que os resultados permitissem comparar o impacto dos efeitos diretos da cirurgia bariátrica versus os efeitos a longo prazo (provavelmente relacionados à perda de peso) no sPRR plasmático e na resistência à insulina. Se o recrutamento for menor do que o esperado, entraremos em contato com outros centros locais de cirurgia bariátrica, incluindo a Ochsner Clinic.