Plasmaan liukoisen proreniinireseptorin vaikutus liikalihavilla ja tyypin 2 diabeetikoilla

Ihmisverinäytteitä kerätään 50 lihavalta potilaalta, jotka ovat ilmoittautuneet ja suunnittelevat bariatrista leikkausta Tulane Universityn, HSC:n avohoidon bariatrisen kirurgian klinikalla (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; Bariatric Surgery Clinicin ja kirurgin puheenjohtaja, ja Shauna Levy, MD, bariatric kirurgin asiantuntija). Jokaisella potilaalla käytetyn bariatrisen leikkauksen tyyppi kirjataan. Koska on osoitettu, että 6 kuukautta kestäneen bariatrisen leikkauksen jälkeen painohäviö on noin 50-60 % 15-18, aiomme ottaa kaksi verinäytteen putkea, joissa kussakin on 5 ml verta. Veri otetaan leikkausta edeltävän käynnin aikana ja kolmen bariatrisen leikkauksen jälkeisen käynnin aikana: 1 viikko ± 2-3 päivää, 1 kuukausi ± 2 viikkoa ja 6 kuukautta ± 1 - 2 kuukautta. Verinäytteitä käytetään plasman: glykemian, HbA1c:n, lipidiprofiilin (LDL, HDL, triglyseridit) ja sPRR:n ​​mittaamiseen. Verinäytteen ottoaika kirjataan, koska vuorokausirytmit voivat vaikuttaa RAS:iin. Plasman sPRR:n ​​kvantifiointi ELISA:lla suoritetaan Dr. Minolfa Prieton laboratoriossa Tulane University School of Medicine -koulussa. Potilaan biologiset näytteet tunnistetaan koodilla, joka yhdistää näytteen potilaaseen. Tutkimuksen päätyttyä näytteitä käytetään yksinomaan liikalihavuuden ja T2DM-sairauksien tutkimukseen. Taustatekijöitä ovat: sukupuoli, ikä, rotu, etnisyys, sairausvakuutusasema ja henkilökohtainen sairaushistoria arvioivat minkä tahansa seuraavista tiloista: diabetes mellitus tai verenpainetauti (mukaan lukien mikä tahansa seuraavista hoidoista: verenpainelääkkeet -ACEi, AT1R-salpaajat diureetit tai kalsiumantagonistit), ehkäisyvalmisteiden tai hormonikorvaushoitojen käyttö, aiemmat leikkaukset (tyyppi, päivämäärä), viimeisten kuukautisten päivämäärä, mukaan lukien kuukautiskierron epäsäännöllisyys, kongestiivinen sydämen vajaatoiminta (CHF), perifeerinen verisuonisairaus (PVD), keuhkoverenpainetauti (PHTN) ), tai iskeeminen sydänsairaus, obstruktiivinen uniapnea (OSA), astma, syvä laskimotukos/keuhkoembolia (DVT/PE), gastroesofageaalinen refluksitauti (GERD), maksasairaus, dyslipidemia, munasarjojen monirakkulatauti, masennus, alkoholin käyttö, päihteet väärinkäytöstä ja/tai tupakan käytöstä. Fyysinen tarkastus sisältää: BW, BMI, vyötärön ympärysmitta, pituus, toimisto-BP (DBP ja SBP mitataan poliklinikalla potilaan ollessa istuma-asennossa vähintään 5 minuutin levon jälkeen) ja syke Potilaan biologiset näytteet tunnistetaan koodilla, joka yhdistää näytteen potilaaseen. Plasmanäytteet ELISA-mittauksia varten analysoidaan kahtena rinnakkaisena sokkomenetelmällä. ELISA-sarjat ovat kaupallisesti saatavilla ja niitä valmistaa IBL America, Inc. Tämä määritys suoritetaan rutiininomaisesti PI:n laboratoriossa ja se on validoitu asianmukaisilla standardeilla (valmistajien toimittamilla). Käytämme kaksois- tai kolminkertaisia ​​näytteitä määritettäessä. Teknisinä kontrolleina käytetään biologisia kontrolleja, kuten puskuria tyhjänä. Koska ELISA-sarjat hankitaan kaupallisilta toimittajilta, myyjä(t) suorittavat todennustodistukset reaktiivisuudesta, puhtaudesta ja sovelluksista. Nämä menetelmät ja tulokset on raportoitu aiemmin. Sisäisten kontrollien standardikäyrä eri sPRR-pitoisuuksista sisällytetään jokaiseen levylukemaan vertailua varten. Virheen vähentämiseksi näytteet analysoidaan satunnaisesti aina kun mahdollista ja sisältävät vertailua varten positiivisia standardikontrolleja tunnetuilla pitoisuuksilla. Sekä tiedonkäsittelysuunnitelmaa (poikkeamat, puuttuvien tietojen raportti) että tilastollista analyysisuunnitelmaa (tilastollinen analyysisuunnitelma, päätepisteet [ensisijainen ja toissijainen], sisällyttäminen useisiin testauksiin) käytetään. Laboratoriomme on todentanut sPRR ELISA:n ja verrannut sitä muiden julkaisemiin mittauksiin. Merkittävien ja realististen erojen havaitsemisen varmistamiseksi näytenumerot perustuvat kunkin määrityksen suorittamisvaatimukseen (teho- ja näytekokolaskelmat). Toistettavuuden varmistamiseksi kaikki protokollat ​​raportoidaan, mukaan lukien kaikki koeolosuhteet yksityiskohtaisesti. Tutkimuksen päätyttyä näytteitä käytetään yksinomaan liikalihavuuteen ja DM-tutkimukseen. Tavoite 1: Selvitä, laskevatko plasman sPRR-tasot lihavilla potilailla bariatrisen leikkauksen jälkeen. Tieteellinen lähtökohta ja perustelut: Lihavilla rotilla PRR ja reniini lisääntyvät kaksinkertaisesti rasvakudoksessa. Alustavat tiedot hiiristä, joilla oli T2DM-indusoitu runsasrasvainen ruokavalio, osoittivat fenotyypin läsnäolon, jolle on tunnusomaista liikalihavuus, kohonnut verenpaine, glukoosi-intoleranssi, merkittävä insuliiniresistenssi ja kohonneet sPRR-tasot plasmassa 18 viikon ruokavaliolla. Nämä hiiret osoittivat myös lisääntynyttä PRR-ilmentymistä viskeraalisesta rasvasta peräisin olevissa adiposyyteissä. Alustava tutkimuksemme osoitti, että plasman sPRR-tasot ovat korkeammat laihoilla miehillä kuin laihoilla naisilla. Sitä vastoin plasman sPRR-tasot olivat korkeammat lihavilla diabeetikoilla naisilla kuin miehillä. Lisäksi havaitsimme, että lihavilla potilailla, joilla oli T2DM, oli positiivinen korrelaatio plasman sPRR:n ​​ja BMI:n välillä naisilla, mutta ei miehillä. Tällä pyritään testaamaan hypoteesia, jonka mukaan rasvakudos on pääasiallinen plasman sPRR:n ​​toimittaja lihavilla potilailla.

Kokeellinen suunnittelu: kvantitatiiviset määritykset tehdään plasmanäytteillä, jotka on otettu 50 lihavalta potilaalta, joille tehdään bariatrinen leikkaus. Plasmanäytteet otetaan ennen bariatrista leikkausta (pre-op-käyntiä) ja jokaisella kahdella seurantakäynnillä (1 kk ± 1 - 2 viikkoa ja 6 kk ± 1-2 kuukautta) plasman sPRR:n ​​arvioimiseksi ELISA-menetelmällä ( Prieto's Lab, Tulane University) (katso tehoanalyysi). Nämä näytteet saadaan potilailta Bariatric and Minimal Invassive Surgery Clinic, Christopher G. Ducoin, MD, Tulane HSC (Collaborator). Vertailuja tehdään ihmisen biologisesti de-identifioituihin plasmanäytteisiin laihoista verrokkipotilaista, jotka on jo kerätty ja jotka ovat saatavilla osana Tulane Obesity-Endocannabinoids -tutkimusta (Tina Thethi, M.D, yhteistyökumppani). Potilaan suostumuksen jälkeen potilas tutkitaan Bariatric and Minimal Invassive Surgery Clinicissa elintoimintojen, verenpaineen (SBP ja DBP, mitataan sfygmomanometrisesti), vyötärön ja lonkan välisen suhteen ja BMI:n varalta. Paastoverinäytteet otetaan laskimopunktiolla glykemian, HbA1c:n, lipidiprofiilin (LDL, HDL, triglyseridit) ja sPRR:n ​​varalta. Taustatekijät ja henkilökohtainen sairaushistoria otetaan opintojen suunnittelu -osiossa kuvatulla tavalla. Tehoanalyysi ja tilastolliset huomiot: Kaikki kunkin ajankohdan tulokset kootaan keskiarvona ja keskihajonnana (SD). Toistettujen mittausten varianssianalyysi ja paritesti suoritetaan muutoksen arvioimiseksi aikapisteiden välillä. Historialliset tiedot viittaavat siihen, että noin 10 potilasta saa bariatrista leikkausta kuukaudessa Tulane Universityn bariatric-poliklinikalla; Odotamme, että tämän projektin ensimmäisten kuuden kuukauden aikana rekrytoidaan vähintään 50 kelvollista potilasta.

Tavoite 2: Määrittele, korreloivatko muutokset plasman sPRR-tasoissa lihavien potilaiden T2DM-parametrien paranemisen kanssa bariatrisen leikkauksen jälkeisen painonpudotuksen jälkeen. Tieteellinen lähtökohta ja perustelut: Liikalihavuus ja T2DM ovat merkittäviä sydän- ja verisuonitautien riskitekijöitä.

RAS:n aktivaatio on osallisena sydän- ja verisuonitautien riskitekijöiden patogeneesissä. Usein T2DM paranee välittömästi bariatrisen leikkauksen jälkeen ja vieläkin pidemmälle jatkuvan huomattavan painohäviön myötä. On kuitenkin edelleen epäselvää, onko rasvakudos tärkein sPRR:n ​​toimittaja liikalihavien potilaiden plasmassa ja edistääkö plasman sPRR näiden potilaiden T2DM- ja CV-komplikaatioita. sPRR-estäjien käyttö muodostaisi uuden terapeuttisen lähestymistavan naisten liikalihavuuden ja sydän- ja verisuonitautien komplikaatioiden hallitsemiseksi. Testaamme hypoteesia, jonka mukaan plasman sPRR-tason lasku bariatrisen leikkauksen jälkeen liittyy glykeemisen kontrollin ja lipidiprofiilin paranemiseen lihavilla potilailla. Analyysi ja tilastolliset huomiot: sPRR:n, glykemian, HbA1c:n ja lipidiprofiilin (LDL, HDL, triglyseridit) välisen yhteyden mittaamiseen käytetään useita lineaarisia regressiomalleja. Vertailu tehdään arvoihin ennen leikkausta ja 2 käyntiä sen jälkeen. Ehdotettu n = 50 riittää sovittamaan malleihin, joissa on enintään 7 ennustajaa ja joilla on 80 %:n teho havaitsemaan merkittävä yhteys sPRR:n ​​ja minkä tahansa ennustajan välillä, jos ennustaja ottaa huomioon vähintään 12,25 % sPRR:n ​​kokonaisvaihteluista. . Säätämättömät ja korjatut korrelaatiot ja niihin liittyvät P-arvot raportoidaan.

Odotetut tulokset, sudenkuopat ja vaihtoehtoinen lähestymistapa Tavoite 1: Tietojemme mukaan mikään aikaisempi tutkimus ei ole määrittänyt suhdetta plasman sPRR-lihavuus-T2DM:n välillä tai osoittanut korrelaatioita plasman sPRR:n ​​ja BMI:n, WHR:n tai HbA1c:n välillä. Odotamme, että plasman sPRR-tasot ovat korkeammat lihavilla kuin laihoilla kontrollinäytteillä ja että verrattuna kontrolliin plasman sPRR-tasot ovat korkeammat T2DM-lihavilla potilailla. Odotamme, että plasman sPRR-tasot liittyvät positiivisesti liikalihavuuteen T2DM-lihavilla naisilla, mutta eivät miespuolisilla vastineilla taustatekijöiden mukauttamisen jälkeen, mikä viittaa siihen, että plasman sPRR:n ​​nousu naisilla saattaa johtua hyperandrogenemiasta. Tavoite 2: määrittää, korreloivatko plasman sPRR:n ​​muutokset T2DM:n ja lipidiprofiilin paranemisen kanssa lihavilla potilailla bariatrisen leikkauksen jälkeen. Vahvojen alustavien tietojemme perusteella odotamme, että tulokset auttavat ymmärtämään paremmin sPRR:n ​​ja metabolisten riskitekijöiden roolia lihavilla potilailla. Mahdolliset sudenkuopat: Koska bariatriselle leikkaukselle saatavat potilaat ovat useammin naisia, jos miesten rekrytointi/ilmoittautuminen on vähäistä, perustelemme analyysin naisten ja miesten tiheyden datasuhteella 4:1,19 Vaihtoehtoinen lähestymistapa: Odotimme, että tulokset mahdollistavat vertailun bariatrisen leikkauksen suorien vaikutusten vaikutus vs. pitkän aikavälin vaikutukset (todennäköisesti painonpudotukseen liittyvät) plasman sPRR:ään ja insuliiniresistenssiin. Jos rekrytointi on odotettua pienempi, otamme yhteyttä muihin paikallisiin bariatrian kirurgian keskuksiin, mukaan lukien Ochsner Clinic.