Impacto del receptor de prorrenina soluble en plasma en pacientes obesos y diabéticos tipo 2

Se recolectarán prospectivamente muestras de sangre humana de 50 pacientes obesos, que están inscritos y planean someterse a una cirugía bariátrica en la Clínica de Cirugía Bariátrica para Pacientes Ambulatorios de la Universidad de Tulane, HSC (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; Presidente de la Clínica de Cirugía Bariátrica y Cirujano, y Shauna Levy, MD, especialista en cirugía bariátrica). Se registrará el tipo de cirugía bariátrica utilizada en cada paciente. Debido a que se ha demostrado que después de 6 meses de cirugía bariátrica, hay alrededor de un 50-60 % de pérdida de peso corporal 15-18, planeamos obtener dos tubos de muestras de sangre con 5 ml de sangre cada uno. Se extraerá sangre durante la visita preoperatoria y durante las 3 visitas posteriores a la cirugía bariátrica: 1 semana ± 2-3 días, 1 mes ± 2 semanas y 6 meses ± 1 - 2 meses. Las muestras de sangre se utilizarán para las mediciones de plasma de: glucemia, HbA1c, perfil de lípidos (LDL, HDL, triglicéridos) y sPRR. Se registrará la hora de extracción de la muestra de sangre debido a los posibles efectos de los ritmos circadianos en el RAS. La cuantificación de sPRR en plasma por ELISA se realizará en el laboratorio de la Dra. Minolfa Prieto ubicado en la Facultad de Medicina de la Universidad de Tulane. Las muestras biológicas de los pacientes se identificarán mediante un código que vinculará la muestra al paciente. Después de la conclusión del estudio, las muestras se utilizarán exclusivamente para la investigación de enfermedades relacionadas con la obesidad y la DM2. Los factores de antecedentes incluirán: sexo, edad, raza, etnia, estado del seguro de salud e historial médico personal evaluarán la presencia de cualquiera de las siguientes condiciones: diabetes mellitus o hipertensión (incluyendo cualquiera de los siguientes tratamientos: medicamentos antihipertensivos -ACEi, bloqueadores AT1R , diuréticos o antagonistas del calcio), uso de anticonceptivos orales o reemplazo hormonal, cirugías previas (tipo, fecha), fecha de la última menstruación, incluida cualquier irregularidad menstrual, insuficiencia cardíaca congestiva (CHF), enfermedad vascular periférica (PVD), hipertensión pulmonar (PHTN ), o cardiopatía isquémica, apnea obstructiva del sueño (AOS), asma, trombosis venosa profunda/embolia pulmonar (TVP/PE), enfermedad por reflujo gastroesofágico (ERGE), enfermedad hepática, dislipidemia, síndrome de ovario poliquístico, depresión, consumo de alcohol, consumo de sustancias abuso y/o consumo de tabaco. El examen físico incluirá: peso corporal, índice de masa corporal, circunferencia de la cintura, altura, presión arterial en el consultorio (PAD y PAS medidas en la Clínica ambulatoria con el paciente sentado después de descansar durante al menos 5 minutos) y frecuencia del pulso. Se identificarán las muestras biológicas del paciente. por un código que vincula la muestra con el paciente. Las muestras de plasma para las mediciones de ELISA se analizarán por duplicado de manera ciega. Los kits ELISA están disponibles comercialmente y son fabricados por IBL America, Inc. Este ensayo se realiza de forma rutinaria en el laboratorio del PI y ha sido validado usando estándares apropiados (proporcionados por los fabricantes). Usaremos muestras duplicadas o triplicadas cuando se analicen. Los controles biológicos, como el tampón como blanco, se utilizarán como controles técnicos. Debido a que los kits ELISA se obtendrán de proveedores comerciales, la autenticación por parte de los proveedores incluye certificaciones de reactividad, pureza y aplicaciones. Estos métodos y resultados se informaron anteriormente. La curva de estándares de controles internos de varias concentraciones de sPRR se incluirá en cada lectura de placa con fines comparativos. Para reducir el sesgo, las muestras se analizarán aleatoriamente siempre que sea posible e incluirán controles estándar positivos con concentraciones conocidas con fines comparativos. Se utilizará tanto un plan de manejo de datos (valores atípicos, informe de datos faltantes) como un plan de análisis estadístico (plan de análisis estadístico, criterios de valoración [primarios y secundarios], inclusión para pruebas múltiples... Nuestro laboratorio ha autenticado sPRR ELISA y comparado con mediciones publicadas por otros. Para garantizar la detección de diferencias significativas y realistas, los números de muestra se basan en los requisitos para realizar cada ensayo (cálculos de potencia y tamaño de muestra). Para garantizar la reproducibilidad, se informará de todos los protocolos, incluidas todas las condiciones experimentales en detalle. Una vez concluido el estudio, las muestras se utilizarán exclusivamente para investigaciones relacionadas con la obesidad y la DM. Objetivo 1: Determinar si los niveles plasmáticos de sPRR disminuyen en pacientes obesos después de la cirugía bariátrica. Premisa científica y justificación: en ratas obesas, el PRR y la renina se duplican en el tejido adiposo. Los datos preliminares de ratones con DMT2 inducida por una dieta alta en grasas mostraron la presencia de un fenotipo caracterizado por obesidad, aumento de la PAS, intolerancia a la glucosa, marcada resistencia a la insulina y aumento de los niveles de sPRR en plasma a las 18 semanas del régimen dietético. Estos ratones también mostraron una mayor expresión de PRR en los adipocitos de la grasa visceral. Nuestro estudio preliminar mostró que los niveles de sPRR en plasma son más altos en hombres delgados que en mujeres delgadas. Por el contrario, los niveles de sPRR en plasma fueron más altos en mujeres diabéticas obesas que en hombres. Además, encontramos que los pacientes obesos con DM2 presentaban una correlación positiva entre la sPRR plasmática y el IMC en mujeres pero no en hombres. Este objetivo busca probar la hipótesis de que el tejido adiposo es el principal proveedor de plasma sPRR en pacientes obesos.

Diseño experimental: las cuantificaciones se realizarán en muestras de plasma obtenidas de 50 pacientes obesos sometidos a cirugía bariátrica. Se extraerán muestras de plasma antes de la cirugía bariátrica (visita preoperatoria) y en cada una de las 2 visitas de seguimiento (1 mes ± 1 a 2 semanas y a los 6 meses ± 1 a 2 meses) para la evaluación de la sPRR en plasma mediante ELISA ( Prieto's Lab, Tulane University) (Ver Análisis de Potencia). Estas muestras se obtendrán de pacientes de la Clínica de Cirugía Bariátrica y Mínimamente Invasiva de Christopher G. Ducoin, MD en Tulane HSC (Colaborador). Se establecerán comparaciones con muestras biológicas humanas desidentificadas de plasma de pacientes delgados de control que ya se han recolectado y están disponibles como parte del Estudio de obesidad y endocannabinoides de Tulane (Tina Thethi, M.D, colaboradora). Después del acuerdo de consentimiento del paciente, el paciente será examinado en la Clínica de Cirugía Bariátrica y de Mínima Invasión para determinar los signos vitales, la PA (PAS y la PAD, tomadas por esfigmomanometría), la relación cintura-cadera y el IMC. Se extraerán muestras de sangre en ayunas mediante punción venosa para glucemia, HbA1c, perfil de lípidos (LDL, HDL, triglicéridos) y sPRR. Los factores de antecedentes y el historial médico personal se tomarán como se describe en la sección Diseño del estudio. Análisis de potencia y consideraciones estadísticas: todos los resultados en cada momento se resumirán como media y desviación estándar (DE). El análisis de varianza de medidas repetidas y la prueba pareada se llevarán a cabo para evaluar el cambio a lo largo de los puntos de tiempo. Los datos históricos sugieren que alrededor de 10 pacientes reciben cirugía bariátrica por mes en la Clínica Bariátrica para Pacientes Ambulatorios de la Universidad de Tulane; esperamos que al menos 50 pacientes elegibles sean reclutados en los primeros 6 meses de este proyecto.

Objetivo 2: Definir si los cambios en los niveles plasmáticos de sPRR se correlacionan con la mejora de los parámetros de DM2 en pacientes obesos posteriores a la pérdida de peso después de la cirugía bariátrica. Premisa científica y justificación: La obesidad y la DM2 son los principales factores de riesgo de ECV.

La activación de RAS está implicada en la patogenia de los factores de riesgo CV. A menudo, la DM2 mejora inmediatamente después de la cirugía bariátrica e incluso más con la pérdida de peso sustancial sostenida. Sin embargo, aún se desconoce si el tejido adiposo es el principal proveedor de sPRR en el plasma de pacientes obesos y si el sPRR en plasma contribuye a la DM2 y las complicaciones CV en estos pacientes. El uso de inhibidores de sPRR constituiría un enfoque terapéutico novedoso para controlar la obesidad en mujeres y las complicaciones CV. Probaremos la hipótesis de que la disminución de los niveles de sPRR en plasma después de la cirugía bariátrica se asocia con la mejora en el control glucémico y el perfil lipídico en pacientes obesos. Análisis y consideraciones estadísticas: Se utilizarán modelos de regresión lineal múltiple para medir la asociación entre sPRR, glucemia, HbA1c, perfil de lípidos (LDL, HDL, triglicéridos). Se establecerán comparaciones con valores antes y 2 visitas después de la cirugía. El n=50 propuesto será suficiente para ajustar modelos con hasta 7 predictores y tener un poder del 80 % para detectar una asociación significativa entre sPRR y cualquier predictor si el predictor representa al menos el 12,25 % de la variabilidad total de sPRR . Se informarán las correlaciones no ajustadas y ajustadas y los valores de P asociados.

Resultados esperados, trampas y enfoque alternativo Objetivo 1: Hasta donde sabemos, ningún estudio previo ha definido la relación entre sPRR plasmático-obesidad-T2DM o ha establecido las correlaciones entre sPRR plasmático e IMC, WHR o HbA1c. Esperamos que los niveles de sPRR en plasma sean más altos en obesos que en las muestras de control delgadas y que, en comparación con el control, los niveles de sPRR en plasma sean más altos en pacientes obesos con DM2. Anticipamos que los niveles de sPRR en plasma se asociarán positivamente con la obesidad en mujeres obesas con DM2 pero no en sus homólogos masculinos después de ajustar los factores de fondo, lo que sugiere que los aumentos en sPRR en plasma en mujeres podrían deberse a hiperandrogenemia. Objetivo 2: definirá si los cambios en el sPRR plasmático se correlacionan con la mejora de la DM2 y el perfil lipídico en pacientes obesos después de la cirugía bariátrica. En base a nuestros sólidos datos preliminares, anticipamos que los resultados permitirán una mejor comprensión del papel de la sPRR y los factores de riesgo metabólicos en pacientes obesos. Peligros potenciales: Debido a que los pacientes que se someten a cirugía bariátrica son más comúnmente mujeres, si el reclutamiento/inscripción de hombres resulta ser bajo, justificaremos el análisis con una proporción de datos de frecuencia de mujeres a hombres de 4:1.19 Enfoque alternativo: Esperábamos que los resultados permitieran comparar el impacto de los efectos directos de la cirugía bariátrica frente a los efectos a largo plazo (probablemente relacionados con la pérdida de peso) sobre la sPRR plasmática y la resistencia a la insulina. Si el reclutamiento es menor de lo esperado, nos comunicaremos con otros centros locales de cirugía bariátrica, incluida la Clínica Ochsner.