Влияние растворимых в плазме рецепторов проренина на пациентов с ожирением и диабетом 2 типа

Образцы крови человека будут взяты проспективно у 50 пациентов с ожирением, которые зарегистрированы и планируют провести бариатрическую операцию в амбулаторной клинике бариатрической хирургии Университета Тулейна, HSC (Кристофер Г. Дюкойн, доктор медицинских наук, магистр здравоохранения; заведующий клиникой бариатрической хирургии и хирург, и Шона Леви, доктор медицинских наук, бариатрический хирург-специалист). Тип бариатрической хирургии, использованной для каждого пациента, будет записан. Поскольку было показано, что после 6 месяцев бариатрической хирургии потеря массы тела составляет около 50-60% 15-18, мы планируем получить две пробирки с образцами крови по 5 мл в каждой. Кровь будет браться во время предоперационного посещения и во время 3 посещений после бариатрической операции: 1 неделя ± 2-3 дня, 1 месяц ± 2 недели и 6 месяцев ± 1-2 месяца. Образцы крови будут использоваться для измерения плазмы: гликемии, HbA1c, липидного профиля (ЛПНП, ЛПВП, триглицериды) и sPRR. Время взятия образца крови будет зарегистрировано из-за потенциального влияния циркадных ритмов на РАС. Количественное определение sPRR в плазме с помощью ELISA будет проводиться в лаборатории доктора Минольфы Прието, расположенной в Медицинской школе Университета Тулейн. Биологические образцы пациента будут идентифицированы кодом, который свяжет образец с пациентом. После завершения исследования образцы будут использоваться исключительно для исследования состояний, связанных с ожирением и СД2. Исходные факторы будут включать: пол, возраст, расу, этническую принадлежность, статус медицинского страхования и личную историю болезни, будут оценивать наличие любого из следующих состояний: сахарный диабет или гипертония (включая любое из следующих методов лечения: антигипертензивные препараты -ACEi, блокаторы AT1R). , диуретики или антагонисты кальция), использование оральных контрацептивов или заместительной гормональной терапии, предыдущие операции (тип, дата), дата последней менструации, включая любые нарушения менструального цикла, застойная сердечная недостаточность (ЗСН), заболевание периферических сосудов (ЗПС), легочная гипертензия (PHTN ), или ишемическая болезнь сердца, синдром обструктивного апноэ во сне (СОАС), астма, тромбоз глубоких вен/эмболия легочной артерии (ТГВ/ТЭЛА), гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь (ГЭРБ), заболевания печени, дислипидемия, синдром поликистозных яичников, депрессия, употребление алкоголя, употребление психоактивных веществ злоупотребление и/или употребление табака. Физикальное обследование будет включать: массу тела, ИМТ, окружность талии, рост, офисное АД (ДАД и САД измеряются в амбулаторной клинике, когда пациент находится в сидячем положении после отдыха не менее 5 минут) и частоту пульса. Будут идентифицированы биологические образцы пациента. кодом, связывающим образец с пациентом. Образцы плазмы для измерений ELISA будут анализироваться в двух экземплярах слепым методом. Наборы ELISA являются коммерчески доступными и производятся IBL America, Inc. Этот анализ обычно проводится в лаборатории ИП и подтвержден с использованием соответствующих стандартов (предоставляемых производителями). Мы будем использовать дубликаты или тройные образцы при анализе. Биологические контроли, такие как буфер в качестве бланка, будут использоваться в качестве технических контролей. Поскольку наборы ELISA приобретаются у коммерческих поставщиков, аутентификация поставщика (продавцов) включает в себя сертификаты реактивности, чистоты и применения. Об этих методах и результатах уже сообщалось ранее. Кривая стандартов внутреннего контроля для различных концентраций sPRR будет включена в показания каждого планшета для целей сравнения. Чтобы уменьшить погрешность, образцы будут анализироваться случайным образом, где это возможно, и включать положительные стандартные контроли с известными концентрациями для целей сравнения. Будут использоваться как план обработки данных (выбросы, отчет об отсутствующих данных), так и план статистического анализа (план статистического анализа, конечные точки [первичные и вторичные], включение для множественного тестирования). Наша лаборатория подтвердила подлинность ELISA sPRR и сравнила результаты с измерениями, опубликованными другими. Чтобы обеспечить обнаружение значимых и реалистичных различий, количество образцов основано на требованиях к выполнению каждого анализа (расчет мощности и размера образца). Чтобы обеспечить воспроизводимость, все протоколы будут сообщены, включая все экспериментальные условия в деталях. После завершения исследования образцы будут использоваться исключительно для исследований, связанных с ожирением и сахарным диабетом. Цель 1: определить, снижаются ли уровни sPRR в плазме у пациентов с ожирением после бариатрической хирургии. Научная предпосылка и обоснование: у крыс с ожирением уровень PRR и ренина увеличен в два раза в жировой ткани. Предварительные данные по мышам с СД2, вызванным диетой с высоким содержанием жиров, показали наличие фенотипа, характеризующегося ожирением, повышенным САД, непереносимостью глюкозы, выраженной резистентностью к инсулину и повышенным уровнем sPRR в плазме через 18 недель диетического режима. Эти мыши также показали повышенную экспрессию PRR в адипоцитах висцерального жира. Наше предварительное исследование показало, что уровни sPRR в плазме выше у худых мужчин, чем у худых женщин. Напротив, уровни sPRR в плазме были выше у женщин с ожирением и диабетом, чем у мужчин. Кроме того, мы обнаружили, что у пациентов с ожирением и СД2 выявлена ​​положительная корреляция между sPRR в плазме и ИМТ у женщин, но не у мужчин. Эта цель направлена ​​на проверку гипотезы о том, что жировая ткань является основным поставщиком sPRR в плазме у пациентов с ожирением.

Экспериментальный дизайн: количественные оценки будут проводиться в образцах плазмы, полученных от 50 пациентов с ожирением, перенесших бариатрическую операцию. Образцы плазмы будут взяты перед бариатрической операцией (посещение перед операцией) и во время каждого из 2 последующих посещений (через 1 месяц ± 1–2 недели и через 6 месяцев ± 1–2 месяца) для оценки sPRR в плазме с помощью ELISA ( Лаборатория Прието, Тулейнский университет) (см. анализ мощности). Эти образцы будут получены от пациентов Клиники бариатрической и малоинвазивной хирургии Кристофера Г. Дюкойна, доктора медицины в Tulane HSC (сотрудник). Сравнения будут проведены с биологически деидентифицированными образцами плазмы человека у худых пациентов из контрольной группы, которые уже были собраны и доступны в рамках исследования тулейнского ожирения и эндоканнабиноидов (Тина Тети, доктор медицинских наук, соавтор). После согласия пациента пациент будет обследован в Клинике бариатрической и малоинвазивной хирургии для определения основных показателей жизнедеятельности, АД (САД и ДАД, полученные с помощью сфигмоманометрии), соотношения талии и бедер и ИМТ. Образцы крови натощак будут взяты путем пункции вены для определения гликемии, HbA1c, профиля липидов (ЛПНП, ЛПВП, триглицериды) и sPRR. Исходные факторы и личная история болезни будут учитываться, как описано в разделе «Дизайн исследования». Анализ мощности и статистические соображения. Все результаты в каждый момент времени будут суммированы как среднее значение и стандартное отклонение (SD). Анализ дисперсии с повторными измерениями и парный тест будут проводиться для оценки изменений в разные моменты времени. Исторические данные свидетельствуют о том, что около 10 пациентов получают бариатрическую операцию в месяц в амбулаторной бариатрической клинике Тулейнского университета; мы ожидаем, что в течение первых 6 месяцев этого проекта будет набрано не менее 50 подходящих пациентов.

Цель 2: определить, коррелируют ли изменения уровней sPRR в плазме с улучшением параметров СД2 у пациентов с ожирением после потери веса после бариатрической хирургии. Научная предпосылка и обоснование: Ожирение и СД2 являются основными факторами риска сердечно-сосудистых заболеваний.

Активация РАС вовлечена в патогенез факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний. Часто СД2 улучшается сразу после бариатрической хирургии и даже в дальнейшем при устойчивой значительной потере массы тела. Однако остается неизвестным, является ли жировая ткань основным источником sPRR в плазме пациентов с ожирением, и способствует ли sPRR плазмы СД2 и сердечно-сосудистым осложнениям у этих пациентов. Использование ингибиторов sPRR представляет собой новый терапевтический подход к лечению ожирения у женщин и сердечно-сосудистых осложнений. Мы проверим гипотезу о том, что снижение уровня sPRR в плазме после бариатрической хирургии связано с улучшением гликемического контроля и липидного профиля у пациентов с ожирением. Анализ и статистические соображения. Для измерения связи между sPRR, гликемией, HbA1c, липидным профилем (ЛПНП, ЛПВП, триглицериды) будут использоваться множественные модели линейной регрессии. Сравнения будут установлены со значениями до и после 2 посещений после операции. Предложенного n=50 будет достаточно, чтобы подобрать модели, содержащие до 7 предикторов, и иметь 80% мощности для обнаружения значимой связи между sPRR и любым одним предиктором, если не менее 12,25 % общей вариабельности sPRR приходится на предиктор. . Будут сообщены нескорректированные и скорректированные корреляции и связанные значения P.

Ожидаемые результаты, подводные камни и альтернативный подход Цель 1. Насколько нам известно, ни одно из предыдущих исследований не определяло взаимосвязь между sPRR в плазме, ожирением и СД2 или не устанавливало корреляции между sPRR в плазме и ИМТ, WHR или HbA1c. Мы ожидаем, что уровни sPRR в плазме будут выше у пациентов с ожирением, чем у худых контрольных образцов, и что по сравнению с контролем уровни sPRR в плазме будут выше у пациентов с ожирением СД2. Мы ожидаем, что уровни sPRR в плазме будут положительно связаны с ожирением у женщин с ожирением, страдающих СД2, но не у мужчин после поправки на фоновые факторы, предполагая, что увеличение sPRR в плазме у женщин может быть связано с гиперандрогенемией. Цель 2: определить, коррелируют ли изменения sPRR в плазме с улучшением СД2 и липидного профиля у пациентов с ожирением после бариатрической хирургии. Основываясь на наших убедительных предварительных данных, мы ожидаем, что результаты позволят лучше понять роль sPRR и метаболических факторов риска у пациентов с ожирением. Потенциальные подводные камни: поскольку пациентами, перенесшими бариатрическую операцию, чаще являются женщины, если набор/зачисление мужчин окажется низким, мы обосновываем анализ соотношением частоты данных женщин и мужчин 4:1.19 Альтернативный подход: мы ожидали, что результаты позволят сравнить влияние прямых эффектов бариатрической хирургии по сравнению с долгосрочными эффектами (вероятно, связанными с потерей веса) на sPRR в плазме и резистентность к инсулину. Если набор будет меньше, чем ожидалось, мы обратимся к другим местным центрам бариатрической хирургии, включая клинику Окснера.