A plazmában oldódó prorenin receptor hatása elhízott és 2-es típusú cukorbetegekben

Emberi vérmintákat gyűjtenek 50 elhízott betegtől, akik beiratkoztak és bariatriai műtétet terveznek a Tulane Egyetem ambuláns bariatriai sebészeti klinikáján, HSC (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; a Bariatric Surgery Clinic elnöke és sebész, és Shauna Levy, MD, Bariatric Surgeon Specialist). Az egyes betegeknél alkalmazott bariátriai műtét típusa rögzítésre kerül. Mivel kimutatták, hogy 6 hónapos bariátriai műtét után körülbelül 50-60%-os testtömegveszteség 15-18 között van, két cső vérmintát veszünk, egyenként 5 ml vérrel. Vérvétel a műtét előtti és a bariátriai műtétet követő 3 vizit során: 1 hét ± 2-3 nap, 1 hónap ± 2 hét és 6 hónap ± 1-2 hónap. Vérmintákat használnak a következők plazmaméréséhez: glikémia, HbA1c, lipidprofil (LDL, HDL, trigliceridek) és sPRR. A vérminta felvételének időpontja a cirkadián ritmusok RAS-ra gyakorolt ​​lehetséges hatásai miatt rögzítésre kerül. A plazma sPRR mennyiségi meghatározását ELISA módszerrel Dr. Minolfa Prieto laboratóriumában végzik el, amely a Tulane Egyetem Orvostudományi Karán található. A páciens biológiai mintáit egy kód azonosítja, amely összekapcsolja a mintát a pácienssel. A vizsgálat befejezése után a mintákat kizárólag az elhízás és a T2DM-hez kapcsolódó állapotok kutatására használjuk fel. A háttértényezők a következők: nem, életkor, rassz, etnikai hovatartozás, egészségbiztosítási státusz és a személyes kórtörténet a következő állapotok bármelyikének meglétét értékelik: diabetes mellitus vagy magas vérnyomás (beleértve a következő kezelések bármelyikét: vérnyomáscsökkentő szerek - ACEi, AT1R blokkolók , diuretikumok vagy kalcium-antagonisták), orális fogamzásgátlók vagy hormonpótlás, korábbi műtétek (típus, dátum), utolsó menstruáció dátuma, beleértve a menstruációs rendellenességeket, pangásos szívelégtelenség (CHF), perifériás érbetegség (PVD), pulmonalis hipertónia (PHTN) ), vagy ischaemiás szívbetegség, obstruktív alvási apnoe (OSA), asztma, mélyvénás trombózis/tüdőembólia (DVT/PE), gastrooesophagealis reflux betegség (GERD), májbetegség, diszlipidémia, policisztás petefészek szindróma, depresszió, alkoholfogyasztás, szer visszaélés és/vagy dohányzás. A fizikális vizsgálat a következőket tartalmazza: BW, BMI, derékkörfogat, magasság, irodai BP (a DBP és SBP mérése a Rendelőintézetben, a beteg legalább 5 perces pihentetés után ülő helyzetben), valamint pulzusszám A beteg biológiai mintáinak azonosítása megtörténik. a mintát a pácienssel összekötő kóddal. Az ELISA mérésekhez használt plazmamintákat két párhuzamos vizsgálatban, vak módszerrel vizsgálják. Az ELISA készletek kereskedelmi forgalomban kaphatók és az IBL America, Inc. gyártja. Ezt a vizsgálatot rutinszerűen elvégzik a PI laboratóriumában, és a megfelelő szabványok (a gyártók által biztosított) használatával validálták. A vizsgálat során duplikált vagy három párhuzamos mintát használunk. Technikai kontrollként biológiai kontrollokat, például üres puffert használnak. Mivel az ELISA készleteket kereskedelmi szállítóktól szerezzük be, a szállító(k) általi hitelesítés magában foglalja a reakcióképesség, a tisztaság és az alkalmazások tanúsítását. Ezekről a módszerekről és eredményekről korábban már beszámoltunk. Az sPRR különböző koncentrációira vonatkozó belső kontrollok standard görbéje összehasonlítás céljából minden lemezen szerepelni fog. A torzítás csökkentése érdekében a mintákat lehetőség szerint véletlenszerűen megvizsgálják, és összehasonlítás céljából pozitív standard kontrollokat is tartalmaznak ismert koncentrációkkal. Mind az adatkezelési tervet (kiugró értékek, a hiányzó adatok jelentése), mind a statisztikai elemzési tervet (Statisztikai elemzési terv, végpontok [elsődleges és másodlagos], többszörös tesztelés bevonása) egyaránt használni fogják. Laboratóriumunk hitelesítette az sPRR ELISA-t, és összehasonlította mások által közzétett mérésekkel. Az értelmes és reális különbségek kimutatása érdekében a mintaszámok az egyes vizsgálatok elvégzésének követelményén alapulnak (teljesítmény és mintaméret számítások). A reprodukálhatóság biztosítása érdekében minden protokollról jelentést kell készíteni, beleértve az összes kísérleti körülményt is. A vizsgálat befejezése után a mintákat kizárólag elhízással és DM-vel kapcsolatos kutatásokhoz használjuk fel. 1. cél: Annak meghatározása, hogy az sPRR plazmaszintje csökken-e elhízott betegeknél bariátriai műtét után. Tudományos előfeltevés és indoklás: Elhízott patkányokban a PRR és a renin kétszeresére nő a zsírszövetben. A magas zsírtartalmú diéta által kiváltott T2DM-ben szenvedő egerek előzetes adatai elhízással, megnövekedett SBP-vel, glükóz intoleranciával, kifejezett inzulinrezisztenciával és 18 héttel megnövekedett sPRR-szinttel jellemezhető fenotípus jelenlétét mutatták ki a diéta mellett. Ezek az egerek fokozott PRR expressziót mutattak a zsigeri zsírból származó zsírsejtekben. Előzetes vizsgálatunk kimutatta, hogy a plazma sPRR szintje magasabb a sovány férfiakban, mint a sovány nőkben. Ezzel szemben a plazma sPRR szintje magasabb volt az elhízott cukorbeteg nőkben, mint a férfiakban. Továbbá azt találtuk, hogy a T2DM-ben szenvedő elhízott betegek pozitív korrelációt mutattak a plazma sPRR és a BMI között nőkben, férfiakban azonban nem. Ennek célja annak a hipotézisnek a tesztelése, hogy a zsírszövet az elhízott betegek plazma sPRR fő szállítója.

Kísérleti terv: a kvantifikációt 50, bariátriai műtéten átesett elhízott beteg plazmamintáján végzik el. Plazmamintát vesznek a bariátriai műtét előtt (operációs vizit előtt) és 2 utánkövetési vizit mindegyike alkalmával (1 hónap ± 1-2 hét és 6 hónap ± 1-2 hónap után) a plazma sPRR ELISA-val történő értékelése céljából. Prieto's Lab, Tulane Egyetem) (lásd: Erőelemzés). Ezeket a mintákat a Tulane HSC (Munkatárs) MD Christopher G. Ducoin Bariatric és Minimal Invasive Surgery Klinikájának betegeitől szerezzük be. Összehasonlításokat végeznek majd a sovány kontroll betegektől származó, már összegyűjtött és a Tulane Obesity-Endocannabinoids Study (Tina Thethi, M.D, munkatárs) részeként rendelkezésre álló emberi biológiai azonosítás nélküli plazmamintákkal. A beteg beleegyezése után a Bariatric és Minimal Invasive Surgery Klinikán megvizsgálják a beteget az életjelekre, a vérnyomásra (SBP és DBP, vérnyomásmérővel), a derék-csípő arányra és a BMI-re. Éhgyomri vérmintákat vesznek véna punkcióval a glikémia, a HbA1c, a lipidprofil (LDL, HDL, trigliceridek) és az sPRR kimutatására. A háttértényezőket és a személyes kórtörténetet a Tanulmánytervezés részben leírtak szerint veszik fel. Teljesítményelemzés és statisztikai megfontolások: Az egyes időpontokban elért eredményeket átlagban és szórásban (SD) összegzik. Az ismételt mérési varianciaanalízist és a páros tesztet elvégzik az időpontok változásának értékelésére. A történelmi adatok arra utalnak, hogy havonta körülbelül 10 beteget végeznek bariátriai műtéten a Tulane Egyetem Bariatric Ambuláns Klinikáján; arra számítunk, hogy a projekt első 6 hónapjában legalább 50 jogosult beteget fognak toborozni.

2. cél: Annak meghatározása, hogy az sPRR plazmaszintjének változása korrelál-e a T2DM paraméterek javulásával elhízott betegeknél a bariátriai műtét utáni súlycsökkenést követően. Tudományos előfeltevés és indoklás: Az elhízás és a T2DM a szív- és érrendszeri betegségek fő kockázati tényezői.

A RAS aktiválása szerepet játszik a CV kockázati tényezőinek patogenezisében. A T2DM gyakran közvetlenül a bariátriai műtét után javul, és még tovább is javul a tartós jelentős testtömeg-veszteséggel. Azonban továbbra sem ismert, hogy a zsírszövet az sPRR fő szállítója az elhízott betegek plazmájában, és hogy a plazma sPRR hozzájárul-e ezeknél a betegeknél a T2DM és CV szövődmények kialakulásához. Az sPRR-inhibitorok alkalmazása új terápiás megközelítést jelentene a nők elhízása és a szív-érrendszeri szövődmények kezelésére. Megvizsgáljuk azt a hipotézist, hogy a plazma sPRR szintjének bariátriai műtét utáni csökkenése összefüggésbe hozható az elhízott betegek glikémiás kontrolljának és lipidprofiljának javulásával. Elemzés és statisztikai megfontolások: Több lineáris regressziós modellt alkalmazunk az sPRR, a glikémia, a HbA1c, a lipidprofil (LDL, HDL, trigliceridek) közötti összefüggés mérésére. Az összehasonlítás a műtét előtti és a műtét utáni 2 vizit értékeivel történik. A javasolt n=50 elegendő lesz a legfeljebb 7 prediktort tartalmazó modellek beillesztésére, és 80%-os képességgel rendelkezik az sPRR és bármely prediktor közötti szignifikáns összefüggés kimutatására, ha az sPRR teljes variabilitásának legalább 12,25%-át a prediktor magyarázza. . A kiigazítatlan és korrigált korrelációkat és a kapcsolódó P értékeket jelenteni kell.

Várható eredmények, buktatók és alternatív megközelítés 1. cél: Tudomásunk szerint egyetlen korábbi tanulmány sem határozta meg a plazma sPRR-elhízás-T2DM közötti összefüggést, illetve nem állapított meg összefüggést a plazma sPRR és a BMI, WHR vagy HbA1c között. Arra számítunk, hogy a plazma sPRR szintje magasabb lesz az elhízott betegekben, mint a sovány kontrollmintákban, és a kontrollhoz képest a plazma sPRR szintje magasabb lesz a T2DM elhízott betegekben. Arra számítunk, hogy a plazma sPRR szintje pozitívan kapcsolódik az elhízáshoz a T2DM elhízott nőknél, de nem a férfi társaiknál, miután a háttértényezőket kiigazították, ami arra utal, hogy a plazma sPRR növekedése nőknél a hyperandrogenemia következménye lehet. 2. cél: annak meghatározása, hogy a plazma sPRR változásai összefüggésben állnak-e a T2DM és a lipidprofil javulásával elhízott betegeknél bariátriai műtét után. Erős előzetes adataink alapján azt várjuk, hogy az eredmények lehetővé teszik az sPRR és a metabolikus kockázati tényezők szerepének jobb megértését elhízott betegekben. Lehetséges buktatók: Mivel a bariátriai műtéten átesett betegek gyakrabban nők, ha a férfiak toborzása/beiratkozása alacsony, akkor az elemzést 4:1,19-es nők és férfiak gyakorisági adatarányával indokoljuk. Alternatív megközelítés: Arra számítottunk, hogy az eredmények lehetővé teszik az összehasonlítást. a bariátriai műtét közvetlen hatásainak hatása a plazma sPRR-re és inzulinrezisztenciára gyakorolt ​​​​hosszú távú (valószínűleg a súlycsökkenéssel összefüggő) hatásokkal szemben. Ha a toborzás a vártnál kevesebb, felvesszük a kapcsolatot más helyi bariátriai sebészeti központokkal, beleértve az Ochsner Klinikát is.