Impact du récepteur de la prorénine soluble dans le plasma chez les patients obèses et diabétiques de type 2

Des échantillons de sang humain seront prélevés de manière prospective auprès de 50 patients obèses inscrits et prévoyant d'entreprendre une chirurgie bariatrique à la clinique ambulatoire de chirurgie bariatrique de l'Université de Tulane, HSC (Christopher G. Ducoin, MD, MPH; président de la clinique de chirurgie bariatrique et chirurgien, et Shauna Levy, MD, spécialiste en chirurgie bariatrique). Le type de chirurgie bariatrique utilisé chez chaque patient sera enregistré. Parce qu'il a été démontré qu'après 6 mois de chirurgie bariatrique, il y a environ 50 à 60 % de perte de poids corporel 15-18, nous prévoyons d'obtenir deux tubes d'échantillons sanguins de 5 mL de sang chacun. Le sang sera prélevé lors de la visite préopératoire et lors des 3 visites suivant la chirurgie bariatrique : 1 semaine ± 2-3 jours, 1 mois ± 2 semaines et 6 mois ± 1 - 2 mois. Des échantillons de sang seront utilisés pour les mesures plasmatiques de : glycémie, HbA1c, profil lipidique (LDL, HDL, triglycérides) et sPRR. L'heure du prélèvement de l'échantillon de sang sera enregistrée en raison des effets potentiels des rythmes circadiens sur le RAS. La quantification du plasma sPRR par ELISA sera effectuée dans le laboratoire du Dr Minolfa Prieto situé à l'École de médecine de l'Université de Tulane. Les échantillons biologiques des patients seront identifiés par un code qui reliera l'échantillon au patient. Après la conclusion de l'étude, les échantillons seront utilisés exclusivement pour la recherche sur l'obésité et les conditions liées au DT2. Les facteurs contextuels incluront : le sexe, l'âge, la race, l'origine ethnique, le statut d'assurance maladie et les antécédents médicaux personnels évalueront la présence de l'une des conditions suivantes : diabète sucré ou hypertension (y compris l'un des traitements suivants : médicaments antihypertenseurs -ACEi, bloqueurs AT1R , diurétiques ou antagonistes calciques), utilisation de contraceptifs oraux ou de substituts hormonaux, chirurgies antérieures (type, date), date des dernières menstruations, y compris toute irrégularité menstruelle, insuffisance cardiaque congestive (ICC), maladie vasculaire périphérique (PVD), hypertension pulmonaire (PHTN ), ou cardiopathie ischémique, apnée obstructive du sommeil (SAOS), asthme, thrombose veineuse profonde/embolie pulmonaire (TVP/EP), reflux gastro-œsophagien (RGO), maladie hépatique, dyslipidémie, syndrome des ovaires polykystiques, dépression, consommation d'alcool, toxicomanie l'abus et/ou l'usage du tabac. L'examen physique comprendra : le poids corporel, l'IMC, le tour de taille, la taille, la pression artérielle au cabinet (la PAD et la PAS mesurées à la clinique externe avec le patient en position assise après s'être reposé pendant au moins 5 minutes) et la fréquence du pouls. Des échantillons biologiques du patient seront identifiés. par un code liant l'échantillon au patient. Les échantillons de plasma pour les mesures ELISA seront dosés en double en aveugle. Les kits ELISA sont disponibles dans le commerce et fabriqués par IBL America, Inc. Ce test est régulièrement effectué dans le laboratoire du PI et a été validé à l'aide de normes appropriées (fournies par les fabricants). Nous utiliserons des échantillons en double ou en triple lors de l'analyse. Les contrôles biologiques tels que le tampon en tant que blanc seront utilisés comme contrôles techniques. Étant donné que les kits ELISA seront obtenus auprès de fournisseurs commerciaux, l'authentification par le ou les fournisseurs comprend des certifications de réactivité, de pureté et d'applications. Ces méthodes et résultats ont déjà été rapportés. La courbe standard des contrôles internes de diverses concentrations de sPRR sera incluse dans chaque lecture de plaque à des fins de comparaison. Pour réduire les biais, les échantillons seront analysés de manière aléatoire dans la mesure du possible et comprendront des contrôles standard positifs avec des concentrations connues à des fins de comparaison. Un plan de traitement des données (valeurs aberrantes, rapport de données manquantes) et un plan d'analyse statistique (plan d'analyse statistique, paramètres [primaires et secondaires], inclusion pour les tests multiples seront utilisés. Notre laboratoire a authentifié sPRR ELISA et comparé avec des mesures publiées par d'autres. Pour assurer la détection de différences significatives et réalistes, les nombres d'échantillons sont basés sur l'exigence d'effectuer chaque test (calculs de puissance et de taille d'échantillon). Pour assurer la reproductibilité, tous les protocoles seront rapportés, y compris toutes les conditions expérimentales en détail. Après la conclusion de l'étude, les échantillons seront utilisés exclusivement pour la recherche liée à l'obésité et au diabète sucré. Objectif 1 : Déterminer si les taux plasmatiques de sPRR diminuent chez les patients obèses après une chirurgie bariatrique. Prémisse scientifique et justification : Chez les rats obèses, le PRR et la rénine sont doublés dans le tissu adipeux. Les données préliminaires de souris atteintes de DT2 induit par un régime riche en graisses ont montré la présence d'un phénotype caractérisé par l'obésité, une augmentation de la PAS, une intolérance au glucose, une résistance marquée à l'insuline et une augmentation des niveaux de sPRR dans le plasma à 18 semaines du régime alimentaire. Ces souris ont également montré une expression accrue de PRR dans les adipocytes de la graisse viscérale. Notre étude préliminaire a montré que les taux plasmatiques de sPRR sont plus élevés chez les hommes maigres que chez les femmes maigres. En revanche, les taux plasmatiques de sPRR étaient plus élevés chez les femmes diabétiques obèses que chez les hommes. De plus, nous avons constaté que les patients obèses atteints de DT2 présentaient une corrélation positive entre le sPRR plasmatique et l'IMC chez les femmes mais pas chez les hommes. Cet objectif vise à tester l'hypothèse selon laquelle le tissu adipeux est le principal fournisseur de sPRR plasmatique chez les patients obèses.

Conception expérimentale : les quantifications seront effectuées dans des échantillons de plasma provenant de 50 patients obèses subissant une chirurgie bariatrique. Des échantillons de plasma seront prélevés avant la chirurgie bariatrique (visite pré-op) et à chacune des 2 visites de suivi (1 mois ± 1 - 2 semaines et à 6 mois ± 1-2 mois) pour l'évaluation du plasma sPRR par ELISA ( Prieto's Lab, Tulane University) (Voir l'analyse de puissance). Ces échantillons seront obtenus auprès de patients de la clinique de chirurgie bariatrique et mini-invasive de Christopher G. Ducoin, MD à Tulane HSC (collaborateur). Des comparaisons seront établies avec des échantillons de plasma biologique humain anonymisé provenant de patients témoins maigres qui ont déjà été collectés et sont disponibles dans le cadre de l'étude Tulane sur l'obésité et les endocannabinoïdes (Tina Thethi, M.D, collaboratrice). Après l'accord de consentement du patient, le patient sera examiné à la clinique de chirurgie bariatrique et mini-invasive pour les signes vitaux, la pression artérielle (PAS et PAD, prises par sphygmomanométrie), le rapport taille-hanches et l'IMC. Des échantillons de sang à jeun seront prélevés par ponction veineuse pour la glycémie, l'HbA1c, le profil lipidique (LDL, HDL, triglycérides) et le sPRR. Les facteurs contextuels et les antécédents médicaux personnels seront pris en compte comme décrit dans la section Conception de l'étude. Analyse de puissance et considérations statistiques : Tous les résultats à chaque instant seront résumés sous forme de moyenne et d'écart type (ET). L'analyse de la variance des mesures répétées et le test apparié seront effectués pour évaluer le changement à travers les points dans le temps. Les données historiques suggèrent qu'environ 10 patients reçoivent une chirurgie bariatrique par mois à la clinique bariatrique ambulatoire de l'Université de Tulane ; nous prévoyons qu'au moins 50 patients éligibles seront recrutés au cours des 6 premiers mois de ce projet.

Objectif 2 : Définir si les modifications des taux plasmatiques de sPRR sont corrélées à l'amélioration des paramètres du DT2 chez les patients obèses suite à une perte de poids après une chirurgie bariatrique. Prémisse scientifique et justification : L'obésité et le DT2 sont des facteurs de risque majeurs de MCV.

L'activation du RAS est impliquée dans la pathogenèse des facteurs de risque CV. Souvent, le DT2 s'améliore immédiatement après la chirurgie bariatrique et même davantage avec la perte substantielle et soutenue de poids corporel. Cependant, on ne sait toujours pas si le tissu adipeux est le principal fournisseur de sPRR dans le plasma des patients obèses, et si le sPRR plasmatique contribue au DT2 et aux complications CV chez ces patients. L'utilisation d'inhibiteurs de sPRR constituerait une nouvelle approche thérapeutique pour gérer l'obésité chez les femmes et les complications CV. Nous testerons l'hypothèse selon laquelle la diminution des taux plasmatiques de sPRR après chirurgie bariatrique est associée à l'amélioration du contrôle glycémique et du profil lipidique chez les patients obèses. Analyse et considérations statistiques : Des modèles de régression linéaire multiple seront utilisés pour mesurer l'association entre sPRR, glycémie, HbA1c, profil lipidique (LDL, HDL, triglycérides). Des comparaisons seront établies avec les valeurs avant et 2 visites après la chirurgie. Le n = 50 proposé sera suffisant pour ajuster les modèles avec jusqu'à 7 prédicteurs et pour avoir une puissance de 80 % pour détecter une association significative entre le sPRR et n'importe quel prédicteur si au moins 12,25 % de la variabilité totale du sPRR est expliquée par le prédicteur . Les corrélations non ajustées et ajustées et les valeurs P associées seront signalées.

Résultats attendus, pièges et approche alternative Objectif 1 : À notre connaissance, aucune étude antérieure n'a défini la relation entre le plasma sPRR-obésité-T2DM ou n'a établi les corrélations entre le plasma sPRR et l'IMC, le WHR ou l'HbA1c. Nous nous attendons à ce que les niveaux plasmatiques de sPRR soient plus élevés chez les obèses que dans les échantillons témoins maigres, et que par rapport au contrôle, les niveaux plasmatiques de sPRR seront plus élevés chez les patients obèses atteints de DT2. Nous prévoyons que les taux plasmatiques de sPRR seront positivement associés à l'obésité chez les femmes obèses atteintes de DT2, mais pas chez leurs homologues masculins après ajustement pour les facteurs de fond, ce qui suggère que l'augmentation du sPRR plasmatique chez les femmes pourrait être due à l'hyperandrogénémie. Objectif 2 : définir si les modifications du sPRR plasmatique sont corrélées à l'amélioration du DT2 et du profil lipidique chez les patients obèses après une chirurgie bariatrique. Sur la base de nos solides données préliminaires, nous prévoyons que les résultats permettront de mieux comprendre le rôle du sPRR et des facteurs de risque métaboliques chez les patients obèses. Pièges potentiels : Étant donné que les patients subissant une chirurgie bariatrique sont plus souvent des femmes, si le recrutement/l'inscription d'hommes s'avère faible, nous justifierons l'analyse avec un ratio de données de fréquence femmes/hommes de 4:1.19 Approche alternative : Nous nous attendions à ce que les résultats permettent de comparer l'impact des effets directs de la chirurgie bariatrique par rapport aux effets à long terme (probablement liés à la perte de poids) sur le sPRR plasmatique et la résistance à l'insuline. Si le recrutement est moins important que prévu, nous contacterons d'autres centres de chirurgie bariatrique locaux, y compris la clinique Ochsner.