早産における膣、胎盤および新生児の口腔菌叢およびマイクロバイオーム

早産は、すべての新生児および乳児死亡の 70% 以上を占めています。 さらに、早産児の脳性麻痺のリスクは、正期産児の 10 倍です。 早産のリスクは、妊娠中期の子宮頸管の長さに反比例します。 子宮頸管の長さが短い (25 mm 未満) 単胎妊娠を含む無作為対照試験では、プロゲステロンの予防的使用が早産率と新生児死亡率を大幅に低下させることが示されています。 膣内細菌叢と早産との関係は文書化されています。 しかし、短い子宮頸管長とプロゲステロン治療が膣、新生児、胎盤の微生物叢と菌類に及ぼす影響は評価されていません。 本研究の目的は、以下の点に取り組むことです。

1. 母体（膣）、胎児（口腔）、および胎盤（基底板および実質）の縦方向の16Sベースおよび18Sベースのメタゲノムプロファイリングと、推定されたメタゲノミクスを使用すると、早産に関連する異なる微生物群集が明らかになります。
2. 子宮頸部の長さが短い妊婦と正常な子宮頸部の長さの妊婦における、膣、新生児（頬側）および胎盤（基底板と実質）の16s rRNAと細菌、18s rRNAと真菌の比較。

2. 子宮頸管長が短い妊婦と正期産の妊婦における、母体 (膣)、新生児 (口腔)、および胎盤 (基底板と実質) の 16s rRNA と細菌、および真菌との 18s rRNA の比較。 3. 母体 (膣)、新生児 (頬側) および胎盤 (基底板および実質) に対するプロゲステロンの効果。細菌では 16s rRNA、真菌では 18s rRNA。

子宮頸管の長さの測定は、単胎妊娠の 2 つの異なる妊娠期間 (妊娠 11 ～ 14 週および 18 ～ 22 週) で行われます。 まず、子宮頸管の長さの測定の直前に、妊娠 11 ～ 14 週に研究への参加を受け入れる女性から膣スワブが収集されます。 また、膣スワブは、上記で説明したように、妊娠 18 ～ 22 週に再度行われます。 微粉化プロゲステロンは、妊娠 18 ～ 22 週で子宮頸管の長さが 25 mm 以下（3 パーセンタイル未満）の女性に開始されます。 投薬（プロゲステロン 200mg）は、毎晩就寝前に膣内に投与され、患者が出産しない限り、妊娠 36 週まで継続されます。 子宮頸管の長さの測定は、妊娠 28 週目と 32 週目に経膣的に繰り返され、これらの測定の前に子宮頸部スワブでサンプルが取得されます。 胎盤菌叢および微生物叢の存在を評価するために、出生後、臍帯挿入部の外側 3 cm にある胎盤から 1 cm x 1 cm x 1 cm の組織サンプルを採取します。 羊膜コンパートメントを評価するために、出生直後の新生児から頬粘膜スワブが採取されます。 すべてのサンプルはすぐに当社の研究所に配送され、評価まで-80℃のキャビネットに保管されます。 16s リボソーム RNA シーケンス法による V3-V4 領域は、Illumina MiSeq デバイスでシーケンスされ、Human Microbiome Project で標準化されたプロトコルに従ってデータが分析されます。

ITS1 領域メタバイオータ プロトコルに従って配列決定されるデータからランク付けされる DNA サンプルは、Human Microbiome Project 内で評価されます。

Pseudomonas、Escherichia、Neisseria、Streptococcus、Lactobacillus、Candida、Actinomyces を陽性対照として使用し、V3-V4 および ITS 領域を細菌微生物叢と真菌微生物叢に一致させます。 アンプリコンの「運用分類単位」が VSEARCH プログラムで構成された後、GENBANK 微生物叢および微生物叢データを使用して分析が実行されます。