Micobiota y microbioma bucal vaginal, placentario y neonatal en el parto prematuro

El parto prematuro es responsable de más del 70% de todas las muertes neonatales e infantiles. Además, el riesgo de parálisis cerebral entre los niños prematuros es 10 veces mayor que los nacidos a término. El riesgo de parto prematuro está inversamente relacionado con la longitud del cuello uterino en la mitad de la gestación. Los ensayos controlados aleatorios que involucran embarazos únicos con una longitud cervical corta (menos de 25 mm) han demostrado que el uso profiláctico de progesterona reduce significativamente la tasa de parto prematuro y muerte neonatal. Se ha documentado la relación de la micobiota vaginal con el parto prematuro. Sin embargo, no se ha evaluado el impacto de la longitud cervical corta y el tratamiento con progesterona en la microbiota y micobiota vaginal, neonatal y placentaria. Los objetivos del presente estudio son abordar los siguientes puntos;

1. El perfil metagenómico longitudinal materno (vaginal), fetal (oral) y placentario (placa basal y parénquima) basado en 16S y basado en 18S con metagenómica inferida revelará distintas comunidades microbianas en asociación con el parto prematuro.
2. Comparación de rRNA 16s con bacterias y rRNA 18s con hongos vaginales, neonatales (bucales) y placentarios (placa basal y parénquima) en mujeres embarazadas con una longitud cervical corta con aquellas con una longitud cervical normal;

2. Comparación de ARNr 16s materno (vaginal), neonatal (oral) y placentario (placa basal y parénquima) con bacterias y ARNr 18s con hongos en mujeres embarazadas con cuello cervical corto que dieron a luz pretérmino con aquellas que dieron a luz a término; 3. El efecto de la progesterona sobre el ARNr 16s materno (vaginal), neonatal (bucal) y placentario (placa basal y parénquima) con bacterias y ARNr 18s con hongos.

Las mediciones de longitud cervical se realizarán en dos periodos diferentes de embarazo (11-14 y 18-22 semanas de gestación) en embarazos únicos. En primer lugar, se recogerán muestras vaginales de mujeres que acepten participar en el estudio entre las semanas 11 y 14 de gestación, justo antes de medir la longitud del cuello uterino. Además, los hisopados vaginales se realizarán nuevamente a las 18-22 semanas de gestación como se explicó anteriormente. La progesterona micronizada se iniciará en mujeres con una longitud cervical igual o inferior a 25 mm (menor que el percentil 3) a las 18-22 semanas de gestación. El medicamento (200 mg de progesterona) se administrará por vía intravaginal todas las noches antes de acostarse y continuará hasta la semana 36 de gestación, a menos que la paciente dé a luz. La medición de la longitud del cuello uterino se repetirá por vía transvaginal en las semanas 28 y 32 de gestación, y las muestras se obtendrán con un hisopo cervical antes de estas mediciones. Para evaluar la presencia de micobiota y microbiota placentaria, se tomará 1 cm x 1 cm x 1 cm de la muestra de tejido de la placenta que se encuentra a 3 cm lateral de la inserción del cordón en condiciones estériles después del nacimiento. Para evaluar el compartimento amniótico, se recolectará un hisopo de la mucosa bucal de los recién nacidos inmediatamente después del nacimiento. Todas las muestras se entregarán a nuestro laboratorio de investigación de inmediato y se almacenarán en un gabinete de -80 ℃ hasta la evaluación. Las regiones V3-V4 por el método de secuenciación del ARN ribosomal 16s se secuenciarán con el dispositivo Illumina MiSeq y los datos se analizarán de acuerdo con los protocolos estandarizados en el Proyecto Microbioma Humano.

Las muestras de ADN que se clasificarán a partir de los datos que se secuenciarán de acuerdo con el protocolo de metabiota de la región ITS1 se evaluarán dentro del Proyecto Microbioma Humano.

Pseudomonas, Escherichia, Neisseria, Streptococcus, Lactobacillus, Candida, Actinomyces se utilizarán como controles positivos y las regiones V3-V4 e ITS se combinarán para microbiota bacteriana y microbiota fúngica. Después de configurar las "Unidades taxonómicas operativas" de los amplicones con el programa VSEARCH, los análisis se realizarán con datos de microbiota y micobiota de GENBANK.