Vaginale, plazentare und neonatale bukkale Mykobiota und Mikrobiome bei Frühgeburten

Frühgeburten sind für mehr als 70 % aller Todesfälle bei Neugeborenen und Säuglingen verantwortlich. Darüber hinaus ist das Risiko einer Zerebralparese bei frühgeborenen Kindern zehnmal höher als bei termingeborenen. Das Risiko einer Frühgeburt steht in umgekehrter Beziehung zur Zervixlänge in der Mitte der Schwangerschaft. Randomisierte kontrollierte Studien mit Einlingsschwangerschaften mit einer kurzen Zervixlänge (weniger als 25 mm) haben gezeigt, dass die prophylaktische Anwendung von Progesteron die Rate an Frühgeburten und neonatalen Todesfällen signifikant senkt. Der Zusammenhang zwischen vaginaler Mikrobiota und Frühgeburt wurde dokumentiert. Die Auswirkungen einer kurzen Gebärmutterhalslänge und einer Progesteronbehandlung auf die Mikrobiota und Mykobiota der Vagina, des Neugeborenen und der Plazenta wurden jedoch nicht untersucht. Die Ziele der vorliegenden Studie bestehen darin, die folgenden Punkte anzugehen;

1. 16S-basiertes und 18S-basiertes metagenomisches Längsprofiling der Mutter (vaginal), des Fötus (oral) und der Plazenta (Basalplatte und Parenchym) mit abgeleiteter Metagenomik wird unterschiedliche mikrobielle Gemeinschaften im Zusammenhang mit Frühgeburten aufdecken.
2. Vergleich von vaginaler, neonataler (bukkaler) und plazentaler (Basalplatte und Parenchym) 16s-rRNA mit Bakterien und 18s-rRNA mit Pilzen bei Schwangeren mit kurzer Gebärmutterhalslänge mit solchen mit normaler Gebärmutterhalslänge;

2. Vergleich von mütterlicher (vaginal), neonataler (oral) und plazentaler (Basalplatte und Parenchym) 16s-rRNA mit Bakterien und 18s-rRNA mit Pilzen bei Schwangeren mit kurzer Gebärmutterhalslänge, die eine Frühgeburt hatten, mit solchen, die am Termin geboren wurden; 3. Die Wirkung von Progesteron auf mütterliche (vaginale), neonatale (bukkale) und plazentare (Basalplatte und Parenchym) 16s-rRNA bei Bakterien und 18s-rRNA bei Pilzen.

Die Messungen der Zervixlänge werden bei Einlingsschwangerschaften in zwei unterschiedlichen Schwangerschaftsabschnitten (11.-14. und 18.-22. Schwangerschaftswoche) durchgeführt. Zunächst werden die Vaginalabstriche von Frauen entnommen, die sich in der 11. bis 14. Schwangerschaftswoche kurz vor der Messung der Zervixlänge bereit erklären, an der Studie teilzunehmen. Außerdem werden die Vaginalabstriche wie oben beschrieben in der 18. bis 22. Schwangerschaftswoche erneut durchgeführt. Mikronisiertes Progesteron wird bei Frauen mit einer Gebärmutterhalslänge von 25 mm oder weniger (kleiner als 3. Perzentil) in der 18. bis 22. Schwangerschaftswoche begonnen. Das Medikament (Progesteron 200 mg) wird jeden Abend vor dem Schlafengehen intravaginal verabreicht und wird bis zur 36. Schwangerschaftswoche fortgesetzt, es sei denn, die Patientin entbindet. Die Messung der Zervixlänge wird in der 28. und 32. Schwangerschaftswoche transvaginal wiederholt, und vor diesen Messungen werden Proben mit einem Zervixabstrich entnommen. Um das Vorhandensein von plazentaren Mykobiota und Mikrobiota zu beurteilen, werden 1 cm x 1 cm x 1 cm der Gewebeprobe aus der Plazenta, die 3 cm lateral des Nabelschnuransatzes liegt, nach der Geburt unter sterilen Bedingungen entnommen. Zur Beurteilung des Fruchtwassers wird den Neugeborenen unmittelbar nach der Geburt ein Wangenschleimhautabstrich entnommen. Alle Proben werden sofort an unser Forschungslabor geliefert und bis zur Auswertung in einem -80 ℃ Schrank gelagert. Die V3-V4-Regionen werden mit der 16s-ribosomalen RNA-Sequenzierungsmethode mit dem Illumina MiSeq-Gerät sequenziert und die Daten werden gemäß den im Human Microbiome Project standardisierten Protokollen analysiert.

DNA-Proben, die aus den zu sequenzierenden Daten gemäß dem ITS1-Region-Metabiota-Protokoll gerankt werden, werden im Rahmen des Human Microbiome Project evaluiert.

Pseudomonas, Escherichia, Neisseria, Streptococcus, Lactobacillus, Candida, Actinomyces werden als Positivkontrollen verwendet und V3-V4- und ITS-Regionen werden auf bakterielle Mikrobiota und Pilzmikrobiota abgeglichen. Nachdem die „Operativen taxonomischen Einheiten“ der Amplikons mit dem VSEARCH-Programm konfiguriert wurden, werden die Analysen mit GENBANK-Mikrobiota und Mikrobiota-Daten durchgeführt.