Micobiota e microbioma bucal vaginal, placentário e neonatal no parto prematuro

O nascimento prematuro é responsável por mais de 70% de todas as mortes neonatais e infantis. Além disso, o risco de paralisia cerebral em crianças nascidas pré-termo é 10 vezes maior do que nas nascidas a termo. O risco de parto prematuro está inversamente relacionado ao comprimento do colo do útero no meio da gestação. Ensaios clínicos randomizados envolvendo gestações únicas com comprimento cervical curto (menos de 25 mm) mostraram que o uso profilático de progesterona diminui significativamente a taxa de parto prematuro e morte neonatal. A relação da micobiota vaginal com o parto prematuro foi documentada. No entanto, o impacto do comprimento cervical curto e tratamento com progesterona na microbiota e micobiota vaginal, neonatal e placentária não foi avaliado. Os objetivos do presente estudo são abordar os seguintes pontos;

1. O perfil metagenômico longitudinal materno (vaginal), fetal (oral) e placentário (placa basal e parênquima) baseado em 16S e 18S com metagenômica inferida revelará comunidades microbianas distintas em associação com nascimento prematuro.
2. Comparação do rRNA 16s vaginal, neonatal (bucal) e placentário (placa basal e parênquima) com bactérias e 18s rRNA com fungos em gestantes com colo curto com aquelas com colo normal;

2. Comparação do rRNA 16s materno (vaginal), neonatal (oral) e placentário (placa basal e parênquima) com bactérias e 18s rRNA com fungos em gestantes com colo curto que deram à luz pré-termo com aquelas que deram à luz a termo; 3. O efeito da progesterona no rRNA 16s materno (vaginal), neonatal (bucal) e placentário (placa basal e parênquima) com bactérias e 18s rRNA com fungos.

As medidas do comprimento cervical serão realizadas em dois períodos gestacionais distintos (11-14 e 18-22 semanas de gestação) em gestações únicas. Primeiramente, serão coletados swabs vaginais de mulheres que aceitarem participar do estudo entre 11 e 14 semanas de gestação, imediatamente antes da medição do comprimento do colo do útero. Além disso, os esfregaços vaginais serão feitos novamente entre 18 e 22 semanas de gestação, conforme explicado acima. A progesterona micronizada será iniciada em mulheres com comprimento cervical igual ou inferior a 25 mm (menor que o percentil 3) entre 18 e 22 semanas de gestação. A medicação (progesterona 200mg) será administrada por via intravaginal todas as noites antes de dormir e continuará até a 36ª semana de gestação, a menos que a paciente dê à luz. A medição do comprimento cervical será repetida por via transvaginal na 28ª e 32ª semanas de gestação, e amostras serão obtidas com swab cervical antes dessas medições. Para avaliar a presença de micobiota e microbiota placentária, 1 cm x 1 cm x 1 cm da amostra de tecido da placenta que está a 3 cm lateral da inserção do cordão umbilical será coletada em condições estéreis após o nascimento. Para avaliação do compartimento amniótico, será coletado swab da mucosa bucal dos neonatos imediatamente após o nascimento. Todas as amostras serão entregues ao nosso Laboratório de Pesquisa imediatamente e armazenadas em um gabinete de -80 ℃ até a avaliação. As regiões V3-V4 pelo método de sequenciamento de RNA ribossômico 16s serão sequenciadas com o dispositivo Illumina MiSeq e os dados serão analisados ​​de acordo com os protocolos padronizados no Projeto Microbioma Humano.

Amostras de DNA que serão classificadas a partir dos dados a serem sequenciados de acordo com o protocolo de metabiota da região ITS1 serão avaliadas dentro do Projeto Microbioma Humano.

Pseudomonas, Escherichia, Neisseria, Streptococcus, Lactobacillus, Candida, Actinomyces serão usados ​​como controles positivos e as regiões V3-V4 e ITS serão pareadas para microbiota bacteriana e microbiota fúngica. Após a configuração das "Unidades taxonômicas operacionais" dos amplicons com o programa VSEARCH, as análises serão realizadas com os dados de microbiota e micobiota do GENBANK.