マイセトーマ肉芽腫の組織微小環境シグネチャ

マイセトーマは、慢性、特異的、皮下肉芽腫性、進行性および外観を損なう炎症性疾患です。 それは真の真菌または特定の細菌によって引き起こされるため、通常、それぞれユーミセトーマとアクチノミセトーマに分類されます。 Madurella mycetomatis は最も一般的な真菌菌腫の原因菌であり、放線菌の一般的な原因菌は Streptomyces somaliensis と Nocardia brasiliensis です。 無痛の皮下腫瘤、副鼻腔の形成、化膿性または漿液化膿性分泌物（穀物を含む）の 3 つが、マイセトーマの特徴です。 炎症性皮下肉芽腫は通常、皮膚や深部構造に広がり、破壊、変形​​、機能の喪失を引き起こし、時には致命的になることがあります. 足と手は、症例の 82% で見られる最も頻繁に影響を受ける部位です。 風土病地域では、膝、腕、脚、頭と首、太もも、会陰など、体の他の部分が関与する可能性があります. マイセトーマでは、免除される年齢はありません。しかし、20 歳から 40 歳の若年成人男性でより頻繁に発生し、報告された患者のほぼ 30% が若い学生でした。

世界中のマイセトーマの真の発生率と有病率は正確にはわかっていません。 報告されたマイセトーマのデータのほとんどが進行性疾患の入院患者に関連していることに注目するのは興味深いことです。 これは、通常は痛みがなく、ゆっくりと進行するマイセトーマの性質に起因し、不十分な健康教育、医療施設の不足、および財政的制約により、大多数の患者の発症が遅れています。

マイセトーマの世界的な分布は大きく異なります。 それは多くの熱帯および亜熱帯地域で風土病であり、スーダン、ソマリア、セネガル、インド、イエメン、メキシコ、ベネズエラ、コロンビア、アルゼンチン、およびその他のいくつかの国を含むマイセトーマベルトで優勢です. アフリカ大陸は、この病気の負担と有病率が最も高いようです。 インドからも広く報告されています。 しかし、マイセトーマは多くの温帯地域でも報告されています。 米国、スリランカ、ドイツ、エジプト、トルコ、フィリピン、日本、レバノン、タイ、サウジアラビア、チュニジア、イランからマイセトーマに関する報告がいくつかあります。

マイセトーマの適切な治療は、主に正確な診断にかかっています。 原因生物を種レベルで特定することが不可欠であり、そのための現在の検査は、古典的な穀物培養、外科的生検組織病理学的検査、および PCR などのさまざまな分子技術です。 従来の放射線、超音波検査、CT スキャン、MRI などのさまざまな画像技術が、疾患の広がりを判断するために使用されています。 これらの検査と技術のほとんどは、侵襲的で費用がかかり、感度と特異度が低い. さらに、それらはマイセトーマの風土病地域では利用できないため、原因物質を特定するための使いやすく、現場にやさしいテス​​トが切実に必要とされています。

この悲惨で破滅的な病気の管理は残念です。 治療は、主に病因、疾患の部位および広がりに依存する。 最近まで、マイセトーマの唯一の利用可能な治療法は、切断または複数回の切断、外観を損なう外科的切除でした。 真菌腫に対する抗真菌薬と、放線菌腫に対する抗生物質および抗菌薬の形での併用療法と、さまざまな外科的切除が、真菌腫のゴールド スタンダードです。

真菌性菌腫の治療に関する報告は少なく、不十分です。 何年にもわたり、現在に至るまで、真菌性菌腫の治療は、対照臨床試験ではなく、個人の臨床経験と散発的な症例報告の結果に基づいていました。 一般に、大量の外科的切除または患部の切断が、真菌性菌腫の最適な治療法です。 さまざまな抗真菌剤が試されてきましたが、ほとんど成功していません。 真菌性菌腫の原因物質は低悪性度の感染性生物であり、抗真菌薬の投与によってそれらの根絶が容易に達成されるはずであるため、これはおそらく驚くべきことです。 一般に、放線菌腫は、抗生物質および他の化学療法剤による治療に適しています。 薬剤耐性を回避し、病気を根絶するためには、単一の薬剤よりも併用薬剤療法が常に好まれます。

両方のタイプのマイセトーマの治療は、患者が臨床的、放射線学的、超音波的、および細胞学的に治癒するまで続けなければなりません。 再発は、不完全または不規則な治療過程の後でより一般的です。 患者が服薬を守らないと、生物が薬剤耐性を発現する可能性が高くなります。

この研究は、スーダンのハルツームにあるマイセトーマ研究センター (MRC) のマイセトーマ クリニックで実施されました。 ヘルシンキ宣言に沿って書面によるインフォームドコンセントが得られた後、患者は研究に登録されました。

患者は 3 つのグループに分類されました。

• 真菌性菌腫病変を有する患者 (n=10)
• 放線菌病変を有する患者 (n=12)
• 因果関係不明の病変を有する患者 (n=6)

ホルマリン固定とパラフィン包埋は、標準的な手順に従って MRC で実行されました。

同時に、体内の病変の同じ位置で、フローサイトメトリーのために細針吸引物 (FNA) を収集しました。

将来の分析のために吸引物を-80℃で凍結した。 同時に、免疫学的機能アッセイのために各患者から15mlの血液を採取した。

末梢血単核細胞は、標準プロトコルを使用して調製し、必要になるまで液体窒素で保存しました。

トランスクリプトミクス分析のために、5mlの血液をPaxgeneチューブに採取した。

免疫組織化学 免疫組織化学は、英国のヨーク大学で実施されました。 ホルマリン固定パラフィン包埋 (FFPE) 切片を 700 遺伝子 Nanostring PanCancer Immune Cell プロファイリング パネルを使用して分析し、免疫/炎症シグネチャの高レベル ビューを取得しました。

連続切片は、Nanostring Digital Spatial Profiling システムを使用して高度に多重化された抗体染色にかけられ、病変の微小環境に関する包括的で空間的に解決された洞察が得られました。

これらのアプローチによって特定された候補汎マイセトーマ ターゲットは、免疫蛍光抗体と RNA 蛍光 in situ ハイブリダイゼーションを使用して確認されました。

すべてのデータは、公開およびアーカイブ用にデジタル化されたスライド全体の画像として記録されました。

抗原特異的 T 細胞応答 T 細胞応答分析は、ハルツーム大学の風土病研究所で実施されました。

患者からの末梢血単核細胞 (PBMC) と、風土病地域からの年齢と性別が一致する健康なコントロールを、真菌と細菌のライセートで 7 日間刺激しました。 IFN、IL-17、IL-4、および IL-10 の応答は、ELISPOT アッセイによって決定されました。

T 細胞および骨髄細胞の表現型を評価するために、抗体のパネルを使用して FNB のフローサイトメトリーを実施しました。

全血トランスクリプトミクス 血液を Paxgene に収集し、-80℃で保存しました。 RNA は、保存されたサンプルから抽出されました。完全な全血トランスクリプトーム データは、RNA-Seq によって取得されました。

マイセトーマ吸引物中のサイトカイン測定は、市販のELISAキットを使用して行われました。