足分枝菌肉芽肿的组织微环境特征

足菌肿是一种慢性、特异性、皮下肉芽肿性、进行性和毁容性炎症性疾病。 它是由真正的真菌或某些细菌引起的，因此通常将其分为真菌菌和放线菌。 Madurella mycetomatis 是最常见的真足分枝菌病原体，而 Streptomyces somaliensis 和 Nocardia brasiliensis 是放线菌病的常见病原体。 无痛性皮下肿块、鼻窦形成和含有颗粒的化脓性或血清化脓性分泌物的三联征是足菌肿的特征性表现。 炎性皮下肉芽肿通常扩散至累及皮肤和深部结构，导致破坏、畸形和功能丧失，偶可致命。 在 82% 的病例中，脚和手是最常受影响的部位。 在流行区，身体的其他部位可能会受累，例如膝盖、手臂、腿部、头颈、大腿和会阴部。 任何年龄都不能免除足菌肿；然而，它在 20-40 岁的年轻成年男性中更常见，并且几乎 30% 的报告患者是年轻学生。

世界范围内足菌分枝杆菌的真实发病率和患病率尚不清楚。 有趣的是，大多数报告的足菌肿数据都与患有晚期疾病的住院患者有关。 这归因于足菌肿的性质，通常是无痛的、进展缓慢的，并且大多数患者由于缺乏健康教育、缺乏医疗设施和经济拮据而出现较晚。

足菌肿的全球分布差异很大。 它在许多热带和亚热带地区流行，并流行于足菌带，包括苏丹、索马里、塞内加尔、印度、也门、墨西哥、委内瑞拉、哥伦比亚、阿根廷和其他一些国家。 非洲大陆似乎是该病负担和流行率最高的地区。 印度也对此进行了广泛报道。 然而，在许多温带地区也有足菌肿的报道。 美国、斯里兰卡、德国、埃及、土耳其、菲律宾、日本、黎巴嫩、泰国、沙特阿拉伯、突尼斯和伊朗有一些关于足菌肿的报道。

足菌肿的正确治疗主要取决于准确的诊断。 必须将致病生物体鉴定到物种水平，目前对此进行的测试包括经典谷物培养、手术活检、组织病理学检查和各种分子技术，如 PCR。 各种成像技术，如常规放射学、超声检查、CT 扫描和 MRI 用于确定疾病范围。 大多数这些测试和技术都是侵入性的、昂贵的并且灵敏度和特异性低。 此外，它们在足菌肿流行地区不可用，因此迫切需要易于使用、现场友好的测试来识别病原体。

这种令人痛苦和毁灭性的疾病的管理令人失望。 治疗主要取决于病因、发病部位和范围。 直到最近，唯一可用的足菌肿治疗方法是截肢或多处毁容毁容手术切除。 以针对真足菌肿的抗真菌药和针对放线菌和各种手术切除的抗生素和抗微生物剂形式的联合医学治疗是足菌肿的金标准。

关于足菌肿的医学治疗的报道很少且不充分。 多年来，直到现在，对足菌肿的治疗都是基于个人的临床经验和零星病例报告的结果，而不是临床对照试验。 一般来说，大面积手术切除或截肢受影响部位是足菌肿的首选治疗方法。 已经尝试了多种抗真菌剂但收效甚微。 这也许是令人惊讶的，因为真菌分枝杆菌病的病原体是低级感染性生物体，它们的根除应该很容易通过施用抗真菌药物来实现。 一般来说，放线菌病适合使用抗生素和其他化疗药物进行治疗。 联合药物治疗总是优于单一药物治疗，以避免耐药性和根除疾病。

两种类型的足分枝菌病的药物治疗必须持续进行，直到患者在临床、放射学、超声和细胞学上得到治愈。 不完整或不规则的疗程后复发更常见。 如果患者不依从，有机体很可能会产生耐药性。

该研究在苏丹喀土穆足菌肿研究中心 (MRC) 的足菌肿诊所进行。 在根据赫尔辛基宣言获得书面知情同意后，患者被纳入研究。

患者分为三组；

• 有足菌肿病灶的患者 (n=10)
• 放线菌病灶患者 (n=12)
• 因果关系不明的病变患者 (n=6)

根据标准程序在 MRC 进行福尔马林固定和石蜡包埋。

同时收集细针穿刺物 (FNA) 用于流式细胞术，同时收集身体病变的相同位置。

将吸出物冷冻在-80℃以备将来分析。 同时，从每位患者身上抽取 15 毫升血液用于免疫功能测定。

使用标准方案制备外周血单核细胞并储存在液氮中直至需要。

在 Paxgene 管中收集 5 毫升血液用于转录组学分析。

免疫组织化学免疫组织化学在英国约克大学进行。 使用 700 基因 Nanostring PanCancer 免疫细胞分析面板分析福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 切片，以获得免疫/炎症特征的高水平视图。

使用 Nanostring 数字空间分析系统对连续切片进行高度多重抗体染色，以获得对病变微环境的全面和空间分辨的洞察力。

使用免疫荧光抗体和 RNA 荧光原位杂交确认了通过这些方法确定的候选泛足菌肿目标。

所有数据都记录为数字化的整个幻灯片图像，用于发布和存档。

抗原特异性 T 细胞反应 T 细胞反应分析在喀土穆大学地方病研究所进行。

来自患者的外周血单核细胞 (PBMC) 以及来自流行地区的年龄和性别匹配的健康对照用真菌和细菌裂解物刺激 7 天。 IFN、IL-17、IL-4 和 IL-10 反应通过 ELISPOT 测定法确定。

使用抗体组对 FNB 进行流式细胞术，以评估 T 细胞和骨髓细胞表型。

全血转录组学 将血液收集到 Paxgene 中并储存在 - 80c。 从储存的样本中提取 RNA 通过 RNA-Seq 获得全血转录组数据。

使用市售的 ELISA 试剂盒进行足菌肿抽吸物中的细胞因子测量。