Признаки тканевого микроокружения мицетомной гранулемы

Мицетома представляет собой хроническое, специфическое, подкожное гранулематозное, прогрессирующее и обезображивающее воспалительное заболевание. Это вызвано настоящими грибами или некоторыми бактериями, и поэтому обычно классифицируется как эумицетома и актиномицетома соответственно. Madurella mycetomatis является наиболее распространенным возбудителем эумицетомы, тогда как Streptomyces somaliensis и Nocardia brasiliensis являются распространенными возбудителями актиномицеты. Патогномонична для мицетомы триада безболезненного подкожного образования, образования синусов и гнойного или серозно-гнойного отделяемого, содержащего крупинки. Воспалительная подкожная гранулема обычно распространяется на кожу и глубокие структуры, что приводит к деструкции, деформации и потере функции, иногда может привести к летальному исходу. Стопа и кисть являются наиболее часто поражаемыми участками, наблюдаемыми в 82% случаев. В эндемичных районах могут поражаться и другие части тела, такие как колено, рука, нога, голова и шея, бедро и промежность. При мицетоме не исключается возраст; однако это чаще встречается у молодых мужчин в возрасте 20-40 лет, и почти 30% зарегистрированных пациентов были молодыми студентами.

Истинная заболеваемость и распространенность мицетомы во всем мире точно не известны. Интересно отметить, что большинство зарегистрированных данных о мицетоме относятся к госпитальным пациентам с запущенным заболеванием. Это связано с характером мицетомы, которая обычно безболезненна, медленно прогрессирует, и поздним обращением большинства пациентов из-за плохого санитарного просвещения, отсутствия медицинских учреждений и финансовых ограничений.

Мировое распространение мицетомы широко варьируется. Эндемична во многих тропических и субтропических регионах и преобладает в мицетомном поясе, включающем страны Судана, Сомали, Сенегала, Индии, Йемена, Мексики, Венесуэлы, Колумбии, Аргентины и некоторых других. Африканский континент, по-видимому, имеет самое высокое бремя и распространенность этого заболевания. Об этом также широко сообщалось из Индии. Однако о мицетоме сообщалось и во многих регионах с умеренным климатом. Есть несколько сообщений о мицетоме из США, Шри-Ланки, Германии, Египта, Турции, Филиппин, Японии, Ливана, Таиланда, Саудовской Аравии, Туниса и Ирана.

Правильное лечение мицетомы зависит главным образом от точного диагноза. Очень важно идентифицировать возбудитель на уровне вида, и в настоящее время для этого используются классическая культура зерен, гистопатологическое исследование хирургической биопсии и различные молекулярные методы, такие как ПЦР. Различные методы визуализации, такие как обычная радиология, ультразвуковое исследование, компьютерная томография и МРТ, используются для определения распространения заболевания. Большинство этих тестов и методов являются инвазивными, дорогими и имеют низкую чувствительность и специфичность. Кроме того, они недоступны в регионах, эндемичных по мицетоме, и, следовательно, существует острая необходимость в простом в использовании и удобном в полевых условиях тесте для идентификации возбудителя.

Лечение этой мучительной и разрушительной болезни вызывает разочарование. Лечение зависит в основном от этиологического агента, локализации и распространенности заболевания. До недавнего времени единственным доступным методом лечения мицетомы была ампутация или множественные уродующие хирургические иссечения. Комбинированное медикаментозное лечение в виде противогрибковых препаратов при эумицетоме и антибиотиков и противомикробных препаратов при актиномицете и различных хирургических иссечений является золотым стандартом при мицетоме.

Сообщения о медикаментозном лечении эумицетомы немногочисленны и неадекватны. На протяжении многих лет и до сих пор лечение эумицетомы основывалось на личном клиническом опыте и результатах отдельных сообщений, а не на контролируемых клинических испытаниях. Как правило, массивное хирургическое иссечение или ампутация пораженной части является методом выбора при эумицетоме. Различные противогрибковые средства были опробованы с небольшим успехом. Это, возможно, удивительно, поскольку возбудители эумицетомы представляют собой инфекционные организмы низкой степени тяжести, и их эрадикация должна быть легко достигнута введением противогрибковых препаратов. Как правило, актиномицетома поддается медикаментозному лечению антибиотиками и другими химиотерапевтическими средствами. Комбинированная лекарственная терапия всегда предпочтительнее одного препарата, чтобы избежать лекарственной устойчивости и для ликвидации болезни.

Медикаментозное лечение обоих типов мицетомы должно продолжаться до тех пор, пока пациент не будет клинически, рентгенологически, ультразвуковым и цитологически излечен. Рецидивы чаще возникают после неполного или нерегулярного курса лечения. При несоблюдении пациентом режима лечения высока вероятность развития у организма лекарственной устойчивости.

Исследование проводилось в клинике Mycetoma Исследовательского центра Mycetoma (MRC), Хартум, Судан. Пациентов включали в исследование после получения письменного информированного согласия в соответствии с Хельсинкской декларацией.

Пациенты были разделены на три группы;

• Пациенты с эумицетомными поражениями (n=10)
• Пациенты с актиномицетомными поражениями (n=12)
• Пациенты с поражениями неизвестной этиологии (n=6)

Фиксацию формалином и заливку парафином проводили в МНЦ по стандартной методике.

Тонкоигольные аспираты (FNA) собирали для проточной цитометрии в то же время и в том же месте поражения в организме.

Аспираты были заморожены при -80°C для последующего анализа. Параллельно у каждого пациента было взято по 15 мл крови для исследования иммунологических функций.

Мононуклеарные клетки периферической крови готовили по стандартным протоколам и хранили в жидком азоте до тех пор, пока они не понадобятся.

5 мл крови было собрано в пробирки Paxgene для транскриптомного анализа.

Иммуногистохимия Иммуногистохимия проводилась в Йоркском университете, Великобритания. Срезы, фиксированные формалином и залитые парафином (FFPE), анализировали с использованием панели профилирования иммунных клеток Nanostring PanCancer с 700 генами для получения высокоуровневой картины иммунных/воспалительных признаков.

Серийные срезы подвергали высокомультиплексному окрашиванию антителами с использованием системы цифрового пространственного профилирования Nanostring, чтобы получить всестороннее представление о микроокружении очага с пространственным разрешением.

Мишени-кандидаты пан-мицетомы, идентифицированные этими подходами, были подтверждены с использованием иммунофлуоресцентных антител и РНК-флуоресцентной гибридизации in situ.

Все данные были записаны в виде оцифрованных изображений целых слайдов для публикации и архивирования.

Ответы антиген-специфических Т-клеток Анализ ответов Т-клеток выполняли в Институте эндемических заболеваний Университета Хартума.

Мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) пациентов и здорового контроля, соответствующего возрасту и полу, из эндемичных районов стимулировали в течение 7 дней лизатами грибов и бактерий. Ответы IFN, IL-17, IL-4 и IL-10 определяли с помощью анализа ELISPOT.

Проточную цитометрию FNB проводили с панелями антител для оценки фенотипа Т-клеток и миелоидных клеток.

Транскриптомика цельной крови Кровь собирали в Paxgene и хранили при -80°С. РНК экстрагировали из хранящихся образцов. Полные транскриптомные данные цельной крови были получены с помощью RNA-Seq.

Измерения цитокинов в аспиратах мицетомы проводили с использованием имеющихся в продаже наборов ELISA.