A Mycetoma Granuloma szöveti mikrokörnyezetének jelei

A mycetoma egy krónikus, specifikus, szubkután granulomatózus, progresszív és torzító gyulladásos betegség. Valódi gombák vagy bizonyos baktériumok okozzák, ezért általában eumycetomára és actinomycetomára osztják. A Madurella mycetomatis a leggyakoribb eumycetoma kórokozó, míg a Streptomyces somaliensis és a Nocardia brasiliensis az aktinomycetoma gyakori kórokozója. A fájdalommentes bőr alatti tömeg, az orrmelléküregek kialakulása és a szemeket tartalmazó gennyes vagy szero-gennyes váladék hármasa a mycetoma patognómikusa. A gyulladásos szubkután granuloma általában kiterjed a bőrre és a mély struktúrákra, ami pusztulást, deformációt és funkcióvesztést eredményez, esetenként végzetes is lehet. A láb és a kéz a leggyakrabban érintett helyek az esetek 82%-ában. Az endémiás területeken a test más részei is érintettek lehetnek, például a térd, a kar, a láb, a fej és a nyak, a comb és a perineum. Mycetoma esetén az életkor nem mentesül; azonban gyakrabban fordul elő fiatal felnőtt férfiaknál, 20-40 éves kor között, és a bejelentett betegek közel 30%-a fiatal diák volt.

A mycetoma valódi előfordulása és prevalenciája világszerte nem ismert pontosan. Érdekes megjegyezni, hogy a legtöbb jelentett mycetoma-adat előrehaladott betegségben szenvedő kórházi betegekre vonatkozik. Ez a mycetoma természetének tulajdonítható, amely általában fájdalommentes, lassan progresszív, és a betegek többsége későn jelentkezik a rossz egészségügyi oktatás, az egészségügyi létesítmények hiánya és a pénzügyi korlátok miatt.

A mycetoma világméretű elterjedése nagyon változó. Számos trópusi és szubtrópusi régióban endemikus, és a mycetoma övezetben uralkodik, amely magában foglalja Szudánt, Szomáliát, Szenegált, Indiát, Jement, Mexikót, Venezuelát, Kolumbiát, Argentínát és néhány más országot. Úgy tűnik, hogy az afrikai kontinensen a legnagyobb a betegség terhe és előfordulása. Indiából is széles körben beszámoltak róla. Azonban számos mérsékelt égövi régióban is jelentettek mycetomát. Néhány jelentés érkezett a mycetomáról az Egyesült Államokból, Srí Lankáról, Németországból, Egyiptomból, Törökországból, Fülöp-szigetekről, Japánból, Libanonból, Thaiföldről, Szaúd-Arábiából, Tunéziából és Iránból.

A mycetoma megfelelő kezelése elsősorban a pontos diagnózistól függ. Elengedhetetlen a kórokozó fajszintű azonosítása, ennek jelenlegi vizsgálatai a klasszikus szemtenyésztés, a sebészi biopsziás kórszövettani vizsgálat és a különböző molekuláris technikák, mint például a PCR. A betegség kiterjedésének meghatározására különféle képalkotó technikákat alkalmaznak, mint például a hagyományos radiológia, ultrahang, CT és MRI. A legtöbb ilyen teszt és technika invazív, költséges és alacsony érzékenységű és specifitású. Ezenkívül nem állnak rendelkezésre a mycetoma endémiás régiókban, ezért égető szükség van egy könnyen használható, terepbarát tesztre a kórokozó azonosítására.

Ennek a nyomasztó és pusztító betegségnek a kezelése kiábrándító. A kezelés elsősorban az etiológiai októl, a betegség helyétől és kiterjedésétől függ. Egészen a közelmúltig a mycetoma egyetlen elérhető kezelése az amputáció vagy a többszörös csonkító, elcsúfító sebészeti kimetszés volt. A kombinált orvosi kezelés gombaellenes szerek formájában az eumycetoma és az antibiotikumok és antimikrobiális szerek formájában az aktinomycetoma és a különböző sebészeti kimetszések formájában az arany standard a mycetomában.

Az eumycetoma orvosi kezeléséről szóló jelentések ritkák és nem megfelelőek. Az évek során és mostanáig az eumycetoma kezelése a személyes klinikai tapasztalatokon és a szórványos esetjelentések eredményein alapult, nem pedig kontrollált klinikai vizsgálatokon. Általánosságban elmondható, hogy az eumycetoma esetén az érintett rész masszív sebészeti kimetszése vagy amputációja a választott kezelés. Különféle gombaellenes szereket próbáltak ki kevés sikerrel. Ez talán meglepő, mivel az eumycetoma kórokozói alacsony fokú fertőző organizmusok, és felszámolásukat könnyen elérhető gombaellenes szerek adásával. Az actinomycetoma általában alkalmas antibiotikumokkal és más kemoterápiás szerekkel végzett orvosi kezelésre. A gyógyszerrezisztencia elkerülése és a betegségek felszámolása érdekében mindig előnyben részesítik a kombinált gyógyszeres terápiát az egyetlen gyógyszerrel szemben.

Mindkét típusú mycetoma orvosi kezelését addig kell folytatni, amíg a beteg klinikailag, radiológiailag, ultrahangosan és citológiailag meg nem gyógyul. A kiújulás gyakrabban fordul elő hiányos vagy szabálytalan orvosi kezelés után. A beteg nem-megfelelősége esetén jó esély van arra, hogy a szervezetben gyógyszerrezisztencia alakuljon ki.

A vizsgálatot a Mycetoma Kutatóközpont (MRC) Mycetoma klinikáján végezték, Szudán Kartúmban. A betegeket a Helsinki Nyilatkozattal összhangban írásos beleegyezésük után vonták be a vizsgálatba.

A betegeket három csoportba sorolták;

• Eumycetoma elváltozásban szenvedő betegek (n=10)
• Actinomycetoma elváltozásban szenvedő betegek (n=12)
• Ismeretlen ok-okozati összefüggésű elváltozásokkal rendelkező betegek (n=6)

A formalin rögzítést és a paraffin beágyazást az MRC-ben standard eljárások szerint végeztük.

A finom tűs aspirátumokat (FNA) áramlási citometriához gyűjtöttük a lézióval egy időben és ugyanabban a helyen a testben.

Az aspirátumokat -80 °C-on lefagyasztottuk a jövőbeni elemzés céljából. Ezzel egyidejűleg minden betegtől 15 ml vért vettünk az immunológiai funkció vizsgálatára.

A perifériás vér mononukleáris sejtjeit standard protokollok szerint állítottuk elő, és folyékony nitrogénben tároltuk, amíg szükséges.

5 ml vért Paxgene csövekbe gyűjtöttünk a transzkriptomikai elemzéshez.

Immunhisztokémia Az immunhisztokémiát a York-i Egyetemen (Egyesült Királyság) végezték. A formalin fixált paraffinba ágyazott (FFPE) metszeteket a 700 génből álló Nanostring PanCancer Immune Cell profilozó panel segítségével elemeztük, hogy magas szintű képet kapjunk az immun/gyulladásos szignatúráról.

A sorozatos metszeteket erősen multiplex antitest-festésnek vetettük alá a Nanostring Digital Spatial Profiling rendszerrel, hogy átfogó és térben feloldott betekintést nyerjünk a léziók mikrokörnyezetébe.

Az ezekkel a megközelítésekkel azonosított pan-mycetoma célpontokat immunfluoreszcens antitestek és RNS-fluoreszcens in situ hibridizáció segítségével igazoltuk.

Minden adatot digitalizált teljes diaképként rögzítettünk közzététel és archiválás céljából.

Antigén-specifikus T-sejtes válaszok A T-sejtekre adott válaszok elemzését a Kartúmi Egyetem Endémikus Betegségek Intézetében végezték.

A betegek perifériás vér mononukleáris sejtjeit (PBMC), valamint az endémiás területről származó egészséges kontroll kor és neme megfelelőségét 7 napon keresztül gomba és bakteriális lizátumokkal stimuláltuk. Az IFN, IL-17, IL-4 és IL-10 válaszokat ELISPOT vizsgálattal határoztuk meg.

FNB-ken az áramlási citometriát antitestpanelekkel végeztük a T-sejt és a mieloid sejt fenotípusának értékelésére.

Teljes vér transzkriptomika A vért Paxgene-be gyűjtöttük és -80 °C-on tároltuk. Az RNS-t a tárolt mintákból extraháltuk. A teljes vér transzkriptómiai adatokat az RNA-Seq.

A citokin méréseket mycetoma aspirátumokban a kereskedelemben kapható ELISA kitekkel végeztük.