Mycetoma Granuloman kudosmikroympäristön allekirjoitukset

Mysetooma on krooninen, spesifinen, subkutaaninen granulomatoottinen, etenevä ja vääristävä tulehduksellinen sairaus. Sen aiheuttavat todelliset sienet tai tietyt bakteerit, ja siksi se luokitellaan yleensä eumysetoomaan ja aktinomycetoomaan. Madurella mycetomatis on yleisin eumysetooman aiheuttaja, kun taas Streptomyces somaliensis ja Nocardia brasiliensis ovat yleisimpiä aktinomysetooman aiheuttajia. Kivuton ihonalainen massa, poskionteloiden muodostuminen ja jyviä sisältävä märkivä tai sero-märkivä erite on mysetooman patognomoninen. Tulehduksellinen subkutaaninen granulooma leviää yleensä koskettamaan ihoa ja syviä rakenteita, mikä johtaa tuhoon, epämuodostumiin ja toiminnan menettämiseen, joskus se voi olla kohtalokas. Jalka ja käsi ovat yleisimmin sairastuneita alueita, joita havaitaan 82 prosentissa tapauksista. Endeemisillä alueilla voi olla mukana muita kehon osia, kuten polvi, käsivarsi, jalka, pää ja niska, reisi ja perineum. Ikä ei ole vapautettu mysetoomassa; sitä esiintyy kuitenkin useammin nuorilla aikuisilla miehillä 20–40-vuotiailla ja lähes 30 % raportoiduista potilaista oli nuoria opiskelijoita.

Mysetooman todellista ilmaantuvuutta ja esiintyvyyttä maailmanlaajuisesti ei tiedetä tarkasti. On mielenkiintoista huomata, että suurin osa raportoiduista mysetoomatiedoista liittyy sairaalapotilaisiin, joilla on pitkälle edennyt sairaus. Tämä johtuu mysetooman luonteesta, joka on yleensä kivuton, hitaasti etenevä ja useimpien potilaiden myöhäinen ilmaantuminen huonon terveyskoulutuksen, terveyspalvelujen puutteen ja taloudellisten rajoitusten vuoksi.

Mysetooman maailmanlaajuinen levinneisyys vaihtelee suuresti. Se on endeeminen monilla trooppisilla ja subtrooppisilla alueilla ja vallitsee mycetoomavyöhykkeellä, johon kuuluvat Sudan, Somalia, Senegal, Intia, Jemen, Meksiko, Venezuela, Kolumbia, Argentiina ja muutama muu maa. Afrikan mantereella näyttää olevan taudin suurin taakka ja esiintyvyys. Siitä on raportoitu laajasti myös Intiasta. Mysetoomaa on kuitenkin raportoitu myös monilla lauhkean vyöhykkeen alueilla. Mysetoomasta on muutamia raportteja Yhdysvalloista, Sri Lankasta, Saksasta, Egyptistä, Turkista, Filippiineistä, Japanista, Libanonista, Thaimaasta, Saudi-Arabiasta, Tunisiasta ja Iranista.

Mysetooman oikea hoito riippuu pääasiassa tarkasta diagnoosista. Olennaista on tunnistaa taudinaiheuttaja lajitasolla ja nykyiset testit sitä varten ovat klassinen jyväviljelmä, kirurginen biopsian histopatologinen tutkimus ja erilaiset molekyylitekniikat, kuten PCR. Taudin laajuuden määrittämiseen käytetään erilaisia ​​kuvantamistekniikoita, kuten tavanomainen radiologia, ultraääni, CT-skannaus ja MRI. Useimmat näistä testeistä ja tekniikoista ovat invasiivisia, kalliita ja heikosti herkkiä ja spesifisiä. Lisäksi niitä ei ole saatavilla mysetooman endeemisillä alueilla, ja siksi on olemassa kipeä tarve helppokäyttöiselle, kenttäystävälliselle testille taudinaiheuttajan tunnistamiseksi.

Tämän ahdistavan ja tuhoisan taudin hallinta on pettymys. Hoito riippuu pääasiassa etiologisesta tekijästä, taudin paikasta ja laajuudesta. Viime aikoihin asti ainoa saatavilla oleva mysetooman hoito oli amputaatio tai useita silvottavia, vääristäviä kirurgisia leikkauksia. Yhdistelmälääkehoito sienilääkkeiden muodossa eumysetooman sekä antibioottien ja mikrobilääkkeiden muodossa aktinomysetooman hoitoon ja erilaisiin kirurgisiin leikkauksiin on kultainen standardi mysetoomassa.

Raportit eumysetooman lääkehoidosta ovat niukkoja ja riittämättömiä. Vuosien ja tähän asti eumysetooman hoito perustui henkilökohtaiseen kliiniseen kokemukseen ja satunnaisten tapausraporttien tuloksiin kontrolloitujen kliinisten tutkimusten sijaan. Yleensä massiiviset kirurgiset leikkaukset tai vaurioituneen osan amputointi ovat eumysetooman ensisijainen hoito. Erilaisia ​​antifungaalisia aineita on kokeiltu huonolla menestyksellä. Tämä on ehkä yllättävää, koska eumysetooman aiheuttajat ovat heikkolaatuisia infektoivia organismeja ja niiden hävittäminen tulisi helposti saavuttaa antamalla sienilääkkeitä. Yleensä aktinomysetoomaa voidaan hoitaa lääketieteellisesti antibiooteilla ja muilla kemoterapeuttisilla aineilla. Yhdistelmälääkehoito on aina parempi kuin yksi lääke lääkeresistenssin välttämiseksi ja taudin hävittämiseksi.

Molempien mysetoomatyyppien lääkehoitoa on jatkettava, kunnes potilas on kliinisesti, radiologisesti, ultraäänellä ja sytologisesti parantunut. Uusiutuminen on yleisempää epätäydellisen tai epäsäännöllisen lääketieteellisen hoidon jälkeen. Jos potilas ei noudata määräyksiä, organismilla on hyvät mahdollisuudet kehittää lääkeresistenssi.

Tutkimus suoritettiin Mycetoma-klinikalla Mycetoma Research Centerissä (MRC), Khartoum Sudanissa. Potilaat otettiin mukaan tutkimukseen saatuaan kirjallisen suostumuksen Helsingin julistuksen mukaisesti.

Potilaat luokiteltiin kolmeen ryhmään;

• Potilaat, joilla on eumycetoomaleesioita (n = 10)
• Potilaat, joilla on aktinomycetoomaleesioita (n = 12)
• Potilaat, joilla on tuntematon syy-yhteys (n = 6)

Formaliinikiinnitys ja parafiiniin upottaminen suoritettiin MRC:ssä standardimenettelyjen mukaisesti.

Hienot neula-aspiraatit (FNA) kerättiin virtaussytometriaa varten samaan aikaan ja samasta vaurion sijainnista kehossa.

Aspiraatit jäädytettiin -80 °C:seen tulevaa analyysiä varten. Samanaikaisesti jokaiselta potilaalta otettiin 15 ml verta immunologisen toiminnan määrityksiä varten.

Perifeerisen veren mononukleaarisolut valmistettiin käyttäen standardiprotokollia ja säilytettiin nestetypessä tarvittaviin tarkoituksiin.

5 ml verta kerättiin Paxgene-putkiin transkriptioanalyysiä varten.

Immunohistokemia Immunohistokemia suoritettiin Yorkin yliopistossa Isossa-Britanniassa. Formaliinikiinnitetyt parafiiniin upotetut (FFPE) leikkeet analysoitiin käyttämällä 700 geenin Nanostring PanCancer Immune Cell -profilointipaneelia korkean tason kuvan saamiseksi immuuni-/tulehduksellisesta allekirjoituksesta.

Sarjaleikkeet altistettiin erittäin multipleksoituneelle vasta-ainevärjäykselle käyttämällä Nanostring Digital Spatial Profiling -järjestelmää, jotta saatiin kattava ja spatiaalisesti erottuva näkemys leesion mikroympäristöstä.

Näillä lähestymistavoilla tunnistetut ehdokkaat pan-mysetoomakohteet vahvistettiin käyttämällä immunofluoresoivia vasta-aineita ja RNA-fluoresoivaa in situ -hybridisaatiota.

Kaikki tiedot tallennettiin digitoituina kokonaisina diakuvina julkaisua ja arkistointia varten.

Antigeenispesifiset T-soluvasteet T-soluvasteiden analyysi suoritettiin Institute for Endemic Diseases, University of Khartoum.

Perifeerisen veren mononukleaarisoluja (PBMC:t) potilailta ja ikään ja sukupuoleen soveltuvia terveitä verrokkeja endeemiseltä alueelta stimuloitiin 7 päivän ajan sienellä ja bakteerilysaatilla. IFN-, IL-17-, IL-4- ja IL-10-vasteet määritettiin ELISPOT-määrityksellä.

FNB-solujen virtaussytometria suoritettiin vasta-ainepaneeleilla T-solu- ja myeloidisolufenotyypin arvioimiseksi.

Kokoveren transkriptomiikka Veri kerättiin Paxgeneen ja säilytettiin -80 °C:ssa. RNA uutettiin varastoituista näytteistä Täydelliset kokoveren transkriptomitiedot saatiin RNA-Seq:llä.

Sytokiinimittaukset mysetoomaaspiraateissa suoritettiin käyttämällä kaupallisesti saatavia ELISA-pakkauksia.