Weefsel Micro-omgeving Handtekeningen van het Mycetoma Granuloma

Mycetoma is een chronische, specifieke, subcutane granulomateuze, progressieve en ontsierende ontstekingsziekte. Het wordt veroorzaakt door echte schimmels of door bepaalde bacteriën en daarom wordt het gewoonlijk ingedeeld in respectievelijk eumycetoma en actinomycetoma. Madurella mycetomatis is de meest voorkomende veroorzaker van eumycetoma, terwijl Streptomyces somaliensis en Nocardia brasiliensis de meest voorkomende veroorzakers zijn van actinomycetoma. De triade van een pijnloze onderhuidse massa, vorming van sinussen en purulente of sero-purulente afscheiding die korrels bevat, is pathognomonisch voor mycetoma. Het inflammatoire subcutane granuloom verspreidt zich meestal naar de huid en de diepe structuren, wat resulteert in vernietiging, misvorming en functieverlies, soms kan het fataal zijn. De voet en hand zijn in 82% van de gevallen de meest getroffen plaatsen. In endemische gebieden kunnen andere delen van het lichaam betrokken zijn, zoals de knie, arm, been, hoofd en nek, dij en perineum. Geen enkele leeftijd is vrijgesteld bij mycetoma; het komt echter vaker voor bij jongvolwassen mannen in de leeftijdscategorie 20-40 jaar en bijna 30% van de gemelde patiënten waren jonge studenten.

De werkelijke incidentie en prevalentie van mycetoma wereldwijd is niet precies bekend. Het is interessant om op te merken dat de meeste gerapporteerde mycetoomgegevens betrekking hebben op ziekenhuispatiënten met gevorderde ziekte. Dit wordt toegeschreven aan de aard van mycetoma, dat meestal pijnloos is, langzaam progressief en de late presentatie van de meerderheid van de patiënten als gevolg van slechte gezondheidseducatie, gebrek aan gezondheidsfaciliteiten en financiële beperkingen.

De wereldwijde verspreiding van mycetoma loopt sterk uiteen. Het is endemisch in veel tropische en subtropische regio's en heerst in de mycetoma-gordel, waaronder de landen Soedan, Somalië, Senegal, India, Jemen, Mexico, Venezuela, Colombia, Argentinië en enkele andere. Het Afrikaanse continent lijkt de hoogste last en prevalentie van de ziekte te hebben. Het is ook uitgebreid gemeld uit India. Mycetoma is echter ook in veel gematigde streken gemeld. Er zijn enkele rapporten over mycetoma uit de VS, Sri Lanka, Duitsland, Egypte, Turkije, de Filippijnen, Japan, Libanon, Thailand, Saoedi-Arabië, Tunesië en Iran.

De juiste behandeling van mycetoma hangt voornamelijk af van een nauwkeurige diagnose. Het is essentieel om het veroorzakende organisme tot op soortniveau te identificeren en de huidige tests daarvoor zijn de klassieke graancultuur, chirurgisch biopsie, histopathologisch onderzoek en verschillende moleculaire technieken zoals PCR. Verschillende beeldvormende technieken zoals conventionele radiologie, echografie, CT-scan en MRI zijn in gebruik om de ziekte-uitbreiding te bepalen. De meeste van deze tests en technieken zijn invasief, duur en hebben een lage sensitiviteit en specificiteit. Bovendien zijn ze niet beschikbaar in de endemische gebieden van mycetoma en daarom is er een dringende behoefte aan een gebruiksvriendelijke, veldvriendelijke test om de veroorzaker te identificeren.

De behandeling van deze schrijnende en verwoestende ziekte is teleurstellend. De behandeling hangt voornamelijk af van de etiologische agens, de plaats en de omvang van de ziekte. Tot voor kort was de enige beschikbare behandeling voor mycetoma amputatie of meervoudige mutilerende, misvormende chirurgische excisies. Gecombineerde medische behandeling in de vorm van antischimmelmiddelen voor het eumycetoom en antibiotica en antimicrobiële middelen voor actinomycetoom en verschillende chirurgische excisies is de gouden standaard bij mycetoom.

Rapporten over de medische behandeling van eumycetoma zijn schaars en ontoereikend. Door de jaren heen en tot nu toe was de behandeling van eumycetoom gebaseerd op persoonlijke klinische ervaring en op de resultaten van sporadische casusrapporten, in plaats van op gecontroleerde klinische onderzoeken. Over het algemeen zijn massieve chirurgische excisies of amputatie van het aangetaste deel de voorkeursbehandeling voor eumycetoom. Verschillende antischimmelmiddelen zijn geprobeerd met weinig succes. Dit is misschien verrassend, aangezien de veroorzakers van eumycetoma laagwaardige infectieuze organismen zijn en hun uitroeiing gemakkelijk zou moeten worden bereikt door de toediening van antischimmelmiddelen. Over het algemeen is actinomycetoom vatbaar voor medische behandeling met antibiotica en andere chemotherapeutische middelen. Gecombineerde medicamenteuze therapie heeft altijd de voorkeur boven een enkel medicijn om resistentie tegen geneesmiddelen te voorkomen en om ziekten uit te roeien.

Medische behandeling voor beide soorten mycetoma moet worden voortgezet totdat de patiënt klinisch, radiologisch, ultrasoon en cytologisch is genezen. Herhaling komt vaker voor na een onvolledige of onregelmatige medische behandeling. Bij niet-naleving door de patiënt is de kans groot dat het organisme resistentie tegen geneesmiddelen ontwikkelt.

De studie werd uitgevoerd in de Mycetoma-kliniek in het Mycetoma Research Center (MRC), Khartoum, Soedan. Patiënten werden in de studie opgenomen nadat schriftelijke geïnformeerde toestemming was verkregen in overeenstemming met de Verklaring van Helsinki.

Patiënten werden onderverdeeld in drie groepen;

• Patiënten met laesies van eumycetoma (n=10)
• Patiënten met actinomycetoma-laesies (n=12)
• Patiënten met laesies van onbekende oorzaak (n=6)

Formalinefixatie en paraffine-inbedding werden uitgevoerd in het MRC volgens standaardprocedures.

Fijne naaldaspiraten (FNA) werden tegelijkertijd en op dezelfde locatie van de laesie in het lichaam verzameld voor flowcytometrie.

Aspiraten werden ingevroren bij -80°C voor toekomstige analyse. Tegelijkertijd werd bij elke patiënt 15 ml bloed afgenomen voor immunologische functietesten.

Perifere mononucleaire bloedcellen werden bereid met behulp van standaardprotocollen en bewaard in vloeibare stikstof totdat ze nodig waren.

5 ml bloed werd verzameld in Paxgene-buisjes voor transcriptomics-analyse.

Immunohistochemie Immunohistochemie werd uitgevoerd aan de Universiteit van York, VK. In formaline gefixeerde paraffine-ingebedde (FFPE) secties werden geanalyseerd met behulp van het 700-gen Nanostring PanCancer Immune Cell-profileringspaneel om een ​​hoog niveau van de immuun- / inflammatoire signatuur te verkrijgen.

Seriële secties werden onderworpen aan sterk gemultiplexte antilichaamkleuring met behulp van het Nanostring Digital Spatial Profiling-systeem om een ​​uitgebreid en ruimtelijk opgelost inzicht in de micro-omgeving van laesies te verkrijgen.

Kandidaat-pan-mycetoma-doelen die door deze benaderingen werden geïdentificeerd, werden bevestigd met behulp van immunofluorescente antilichamen en RNA-fluorescerende in situ hybridisatie.

Alle gegevens werden geregistreerd als gedigitaliseerde hele dia-afbeeldingen voor publicatie en archivering.

Antigeenspecifieke T-celreacties Analyse van T-celreacties werd uitgevoerd bij het Instituut voor Endemische Ziekten, Universiteit van Khartoum.

Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) van patiënten en qua leeftijd en geslacht overeenkomende gezonde controle uit endemisch gebied werden gedurende 7 dagen gestimuleerd met schimmel- en bacteriële lysaten. IFN-, IL-17-, IL-4- en IL-10-responsen werden bepaald met de ELISPOT-assay.

Flowcytometrie op FNB's werd uitgevoerd met panelen van antilichamen om het fenotype van T-cellen en myeloïde cellen te evalueren.

Volbloed transcriptomics Bloed werd verzameld in Paxgene en bewaard bij -80°C. RNA werd geëxtraheerd uit opgeslagen monsters Volledig volbloed transcriptomische gegevens werden verkregen door RNA-Seq.

Cytokinemetingen in aspiraten van mycetoma werden uitgevoerd met behulp van in de handel verkrijgbare ELISA-kits.