Firmas del microambiente tisular del granuloma de micetoma

El micetoma es una enfermedad inflamatoria crónica, específica, subcutánea, granulomatosa, progresiva y desfigurante. Es causada por hongos verdaderos o por ciertas bacterias y, por lo tanto, generalmente se clasifica en eumicetoma y actinomicetoma, respectivamente. Madurella mycetomatis es el agente causal más común del eumicetoma, mientras que Streptomyces somaliensis y Nocardia brasiliensis son los organismos causantes comunes del actinomicetoma. La tríada de una masa subcutánea indolora, formación de senos paranasales y secreción purulenta o seropurulenta que contiene granos es patognomónica de micetoma. El granuloma subcutáneo inflamatorio generalmente se disemina para involucrar la piel y las estructuras profundas, resultando en destrucción, deformidad y pérdida de función, ocasionalmente puede ser fatal. El pie y la mano son los sitios afectados con mayor frecuencia en el 82% de los casos. En áreas endémicas, otras partes del cuerpo pueden verse afectadas, como la rodilla, el brazo, la pierna, la cabeza y el cuello, el muslo y el perineo. Ninguna edad está exenta en el micetoma; sin embargo, ocurre con mayor frecuencia en hombres adultos jóvenes en el rango de edad de 20 a 40 años y casi el 30% de los pacientes informados eran estudiantes jóvenes.

La verdadera incidencia y prevalencia del micetoma en todo el mundo no se conoce con precisión. Es interesante notar que la mayoría de los datos informados sobre micetoma están relacionados con pacientes hospitalizados con enfermedad avanzada. Esto se atribuye a la naturaleza del micetoma, que suele ser indoloro, lentamente progresivo y la presentación tardía de la mayoría de los pacientes debido a la mala educación sanitaria, la falta de instalaciones sanitarias y las limitaciones financieras.

La distribución mundial del micetoma varía ampliamente. Es endémico en muchas regiones tropicales y subtropicales y prevalece en el cinturón de micetoma, que incluye los países de Sudán, Somalia, Senegal, India, Yemen, México, Venezuela, Colombia, Argentina y algunos otros. El continente africano parece tener la mayor carga y prevalencia de la enfermedad. También se ha informado ampliamente de la India. Sin embargo, también se ha informado de micetoma en muchas regiones templadas. Hay algunos informes sobre micetoma de EE. UU., Sri Lanka, Alemania, Egipto, Turquía, Filipinas, Japón, Líbano, Tailandia, Arabia Saudita, Túnez e Irán.

El tratamiento adecuado del micetoma depende principalmente de un diagnóstico preciso. Es fundamental identificar el organismo causal a nivel de especie y las pruebas actuales para ello son el cultivo clásico de granos, el examen histopatológico de biopsia quirúrgica y diversas técnicas moleculares como la PCR. Se utilizan varias técnicas de imagen, como la radiología convencional, la ecografía, la tomografía computarizada y la resonancia magnética, para determinar la extensión de la enfermedad. La mayoría de estas pruebas y técnicas son invasivas, costosas y de baja sensibilidad y especificidad. Además, no están disponibles en las regiones endémicas de micetoma y, por lo tanto, existe una necesidad desesperada de una prueba fácil de usar y fácil de usar para identificar el agente causal.

El manejo de esta angustiosa y devastadora enfermedad es decepcionante. El tratamiento depende principalmente del agente etiológico, el sitio y la extensión de la enfermedad. Hasta hace poco tiempo, el único tratamiento disponible para el micetoma era la amputación o múltiples escisiones quirúrgicas mutilantes y desfigurantes. El tratamiento médico combinado en forma de antimicóticos para el eumicetoma y antibióticos y agentes antimicrobianos para el actinomicetoma y varias escisiones quirúrgicas es el estándar de oro en el micetoma.

Los informes sobre el tratamiento médico en eumicetoma son escasos e inadecuados. A lo largo de los años y hasta ahora, el tratamiento del eumicetoma se basó en la experiencia clínica personal y en los resultados de informes de casos esporádicos, más que en ensayos clínicos controlados. En general, las escisiones quirúrgicas masivas o la amputación de la parte afectada es el tratamiento de elección para el eumicetoma. Se han probado varios agentes antimicóticos con poco éxito. Esto quizás sea sorprendente, ya que los agentes causantes del eumicetoma son organismos infecciosos de bajo grado y su erradicación debe lograrse fácilmente mediante la administración de fármacos antifúngicos. En general, el actinomicetoma es susceptible de tratamiento médico con antibióticos y otros agentes quimioterapéuticos. La terapia de medicamentos combinados siempre se prefiere a un solo medicamento para evitar la resistencia a los medicamentos y para la erradicación de la enfermedad.

El tratamiento médico para ambos tipos de micetoma debe continuar hasta que el paciente esté curado clínica, radiológica, ultrasónica y citológicamente. La recurrencia es más común después de un tratamiento médico incompleto o irregular. Con el incumplimiento del paciente, existe una buena posibilidad de que el organismo desarrolle resistencia a los medicamentos.

El estudio se llevó a cabo en la clínica Mycetoma del Centro de Investigación de Mycetoma (MRC), Jartum, Sudán. Los pacientes se inscribieron en el estudio después de obtener el consentimiento informado por escrito de acuerdo con la Declaración de Helsinki.

Los pacientes se clasificaron en tres grupos;

• Pacientes con lesiones de eumicetoma (n=10)
• Pacientes con lesiones de actinomicetoma (n=12)
• Pacientes con lesiones de causalidad desconocida (n=6)

La fijación en formalina y la inclusión en parafina se realizaron en el MRC de acuerdo con los procedimientos estándar.

Se recolectaron aspirados con aguja fina (FNA) para citometría de flujo al mismo tiempo y en la misma ubicación de la lesión en el cuerpo.

Los aspirados se congelaron a -80ºC para futuros análisis. Al mismo tiempo, se tomaron 15 ml de sangre de cada paciente para los ensayos de función inmunológica.

Se prepararon células mononucleares de sangre periférica utilizando protocolos estándar y se almacenaron en nitrógeno líquido hasta que se necesitaron.

Se recogieron 5 ml de sangre en tubos Paxgene para análisis transcriptómicos.

Inmunohistoquímica La inmunohistoquímica se realizó en la Universidad de York, Reino Unido. Las secciones incrustadas en parafina fijadas en formalina (FFPE) se analizaron utilizando el panel de perfilado de células inmunes de PanCancer Nanostring de 700 genes para obtener una vista de alto nivel de la firma inmunitaria/inflamatoria.

Las secciones en serie se sometieron a una tinción de anticuerpos altamente multiplexada utilizando el sistema de perfilado espacial digital Nanostring para obtener una visión completa y resuelta espacialmente del microambiente de la lesión.

Las dianas candidatas de pan-micetoma identificadas mediante estos enfoques se confirmaron utilizando anticuerpos inmunofluorescentes e hibridación in situ con ARN fluorescente.

Todos los datos se registraron como imágenes de diapositivas completas digitalizadas para su publicación y archivo.

Respuestas de células T específicas de antígeno El análisis de respuestas de células T se realizó en el Instituto de Enfermedades Endémicas de la Universidad de Jartum.

Se estimularon células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de pacientes y controles sanos de la misma edad y sexo del área endémica durante 7 días con lisados ​​de hongos y bacterias. Las respuestas de IFN, IL-17, IL-4 e IL-10 se determinaron mediante el ensayo ELISPOT.

Se realizó citometría de flujo en FNB con paneles de anticuerpos para evaluar el fenotipo de células T y células mieloides.

Transcripción de sangre total La sangre se recogió en Paxgene y se almacenó a -80ºC. El ARN se extrajo de las muestras almacenadas. Los datos transcriptómicos de sangre completa se obtuvieron mediante RNA-Seq.

Las mediciones de citocinas en aspirados de micetoma se realizaron utilizando kits ELISA disponibles en el mercado.