軽度認知障害の危険因子としての糖尿病とマイクロRNA: ライフスタイルの修正の影響

今回の調査は2016年2月から2019年6月までの期間に2段階で実施された。

1. 第 1 ステップ (ベースライン評価): これは、NRC の外来診療所に通う 163 人の 2 型糖尿病 (T2DM) 患者を対象に実施された横断研究でした。患者は男性65名、女性98名であった。 40歳から65歳まで。 すべての患者は読み書きができ、認知機能の検査を完了することができました。 除外基準は、頭部外傷、脳卒中、一過性脳虚血発作、脳腫瘍、てんかん、精神疾患、心不全または肝不全、および視覚障害または聴覚障害の病歴を有するT2DM患者であった。 NRC倫理委員会の承認を得ており、登録番号は15131です。 参加者は研究に参加する前に書面によるインフォームドコンセントに署名した。

1.1 人口統計、病歴、認知機能に関するデータを収集するために、すべての参加者に対して対面インタビューが実施されました。 データには、年齢、性別、教育レベル、喫煙が含まれます。 糖尿病と診断された年齢、低血糖発作の頻度、治療の種類（インスリンまたは経口血糖降下薬）、高血圧、脂質異常症または他の病気の病歴、および服用した薬剤など、糖尿病の詳細な病歴が患者から採取されました。 手と足のチクチク感、灼熱痛、しびれなどの感覚性末梢神経障害の存在を示唆するあらゆる訴えを記録した。 研究対象者全員は徹底的な臨床検査、収縮期血圧と拡張期血圧、および身体測定評価（体重と身長の測定）を受けました。

1.2 ドメインによる認知機能の評価は、注意、記憶、言語流暢さ、言語、視空間能力の 5 つの認知ドメインを評価する Adenbrooke の認知検査 III (ACE III) テストを使用して実施されました。 これは最も信頼性が高く検証されたアラビア語形式の認知スケールであり、自由に適用できます。 ACE III スコアが 88 未満の場合、他覚的軽度認知障害 (MCI) が考慮されました。 トレイルメイキングテスト (TMT) も使用されました。 TMT は、認知処理と実行機能の速度の指標として神経心理学的評価で最も広く使用されている手段の 1 つです。 連続した番号と文字が付けられた一連の円を接続するのに必要な時間を測定することにより、注意力、集中力、精神運動速度、認知の変化、および複雑な順序付け機能を評価します。 テストは 2 つの部分 (A と B) で構成されます。 各パートの直接のスコアは、タスクの完了時間によって表されます。 時間が短いほど認知機能が良好であることを示します。

1.3 ハミルトンうつ病評価尺度 (HRSD) が使用されました。これは、うつ病の重症度を客観的に評価する最も広く使用されている尺度の 1 つです。 この尺度には 17 の項目が含まれており、各項目は 3 点または 5 点の尺度で採点され、最終スコアは患者のうつ病の重症度を示します。 うつ病レベルの分類は、英国国立衛生研究所（英国）に従って行われました（0-7 = 正常、8-13 = 軽度のうつ病、14-18 = 中等度のうつ病、19-22 =重度のうつ病および 23 以上 = 非常に重度のうつ病)。

1.4 健康関連の生活の質 (HRQOL) の評価は、Short Form-36 (SF-36) アンケートを使用して実施されました。 アンケートには、身体機能（PF）、身体的役割（RP）、身体の痛み（BP）、一般的な健康認識（GH）、活力（VT）、社会的機能（SF）、感情的役割の健康状態の8つの領域からなる36項目が含まれています。 (RE) とメンタルヘルス (MH)。 各ドメインのスコアは 0 ～ 100 で、スコア「100」が健全性の最高の評価となります。 アラビア語版の質問票が使用されました。

1.5 T2DM患者のライフスタイルの評価。 患者には、栄養習慣、身体的、社会的、精神的活動に関するライフスタイルと、ライフスタイルを変える動機付けの最良の方法についての意見を評価するために設計されたアンケートが与えられました。

1.6 ベースライン検査室分析。 研究開始時に少なくとも10時間絶食させた後、各参加者から完全な無菌技術下で5mlの血液サンプルを採取した。 これを、乾燥プレーンとラベンダーのエチレンジアミン四酢酸 (EDTA) バキュテナー チューブに分割しました。 糖化ヘモグロビン (HbA1c) および総血中コレステロールのレベルは、Olympus-au-400 化学自動分析装置を使用して評価されました。 血清中のマロンジアルデヒド (MDA) 濃度は、競合結合酵素免疫測定法に基づく ELISA キットを使用して測定されました。 赤血球を、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ（GPx）およびグルタチオンレダクターゼ（GR）の酵素的抗酸化活性について検査した。

1.7 miRNA 発現解析の場合: 血液を特別な RNA 保存チューブに採取しました。 8〜10回反転し、さらにRNAを抽出するために-80℃で凍結保存しました。 miRNA 発現の特性評価を開始する前に、RNA の単離と RNA の品質の推定を採用しました。 目的の miRNA を確実に定量するには、わずか 1 ～ 10 ナノグラムの精製総 RNA または同等品で十分でした。 この研究で選択された miRNA の濃度は、製造元の指示に従って、血漿サンプル中の単一ターゲット TaqMan miRNA 定量的リアルタイム (qRT) ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) アッセイ (Applied Biosystems) によって決定されました。 miRNA 特異的プライマーを使用した逆転写のみを必要とする 2 段階のプロトコールを適用し、その後 TaqMan プローブを使用したリアルタイム PCR を実行しました。 TaqMan MicroRNA Assays は、標的特異的なステムループ構造逆転写プライマーです。 ステムループは 2 つの目標を達成します: 1) 成熟 miRNA 標的のみに対する特異性、および 2) 逆転写酵素 (RT) プライマー/成熟 miRNA キメラの形成、miRNA の 5' 末端の伸長。 RNA サンプル、ループ状プライマー、1 X バッファー、逆転写酵素、および RNase インヒビターを含む RT 反応は、16°C および 42°C でそれぞれ 30 分間インキュベートされます。 得られたより長い RT アンプリコンは、TaqMan アッセイを使用した標準的なリアルタイム PCR に適したテンプレートを示します。 次に、リアルタイム PCR を Quant Studio 12 K Flex リアルタイム PCR 装置で実行しました。

第 2 ステップ (介入試験): このステップは、健康教育とライフ スタイルの修正のための介入研究でした。 これは、T2DM患者に対するライフスタイル修正プログラムを実施するために実施されました。

2.1 2 冊の健康教育小冊子のデザイン T2DM 参加者のニーズを特定した後、研究チームは 2 冊の健康教育小冊子をデザインしました。 「糖尿病とその合併症を制御する方法」と題された最初の小冊子。 この小冊子には、T2DM 疾患に関する情報と、それが糖尿病 (DM) 合併症を引き起こすさまざまな身体システムにどのような影響を与えるかについての情報が含まれています。 空腹時血糖値と糖化ヘモグロビン (HbA1c) の正常レベルと異常レベルに関する情報も含まれます。 健康的な栄養と炭水化物の計算、身体活動、医療計画の厳守、ストレスの回避に重点を置き、DM 合併症を制御および予防する方法を示します。 「軽度認知障害とその予防方法」というタイトルの 2 番目の小冊子には、認知機能、MCI、アルツハイマー病の定義、T2DM との関係、認知障害の危険因子、認知機能を制御および改善する方法に関する情報が含まれています。

2.2 患者教育プログラムの実施: 健康教育 (HE) セッションへの招待を受け入れた参加者は 144 名のみでした。 実際の参加者はわずか121名でした。 不参加の理由としては、興味がなかったこと、ライフスタイルプログラムへの参加を拒否したことが挙げられます。

2.2.1 ライフスタイルの修正を促すための対面およびグループディスカッションの HE セッション: 研究対象となった患者全員が HE セッションに参加するよう招待されました。 NRC では 2 か月近くにわたって 7 つのセッションが開催され、デザインされた 2 冊の小冊子について説明されました。 HE の講義は、公衆衛生チームと糖尿病の専門家によって行われ、グループ ディスカッションに参加して、T2DM の管理に関する説明と質問に答えました。 HE プログラムは、DM を制御するために提供され、脳の健康に重要な食品に関する情報や、認知力を向上させるためのさまざまな知的ゲームが提供されました。

2.2.2 教材の配布 作成した冊子を出席者全員に配布した。 参加者は、T2DM と MCI に関する科学情報を向上させる上で、これら 2 冊の小冊子の重要性について知らされました。

2.2.3 検査室分析の再評価。 健康教育時に少なくとも 10 時間絶食した後、各参加者から完全な無菌技術の下で 3 ml の血液サンプルが採取されました。 この検査は、介入直前に FBG、HbA1c、総血中コレステロールを評価することを目的としており、ライフスタイルの修正によって達成された進歩をモニタリングするための患者へのインセンティブとなるよう、介入中の 3 か月後に再評価されました。 各参加者は、研究チームから個人的に実験結果を受け取るように求められました。 これにより、彼の結果の解釈について話し合うことができ、ライフスタイル修正プログラムの順守を維持するために必要なアドバイスを再度奨励したり、与えたりすることができました。

2.2.4 臨床追跡調査と管理は、検査結果と患者のコンプライアンスに応じて、内分泌学と神経学の専門家によって実施されました。

2.2.5 個別の医療栄養プログラム: 各参加者は 3 日間の食事日記を記入するように求められました。 これらについては、食習慣を変えるようアドバイスし、説得するために、対面インタビューを通じて各参加者と個別に話し合いました。 すべての患者は、検査結果と炭水化物数に応じて食事を調整する方法を教えられました。

2.2.6 個別の隔週フォローアップスキームも、変更する必要がある対象を絞った健康的な行動のガイドとして配布され、達成された進歩を自己監視できるようになりました。 参加者は6か月間にわたり、患者のライフスタイル修正プログラムの順守と順守を評価するために、設計されたシートを使用して携帯電話を介して追跡調査された。

2.2.7 WhatsApp 電話アプリケーション グループ: 参加者は、ライフ スタイルや治療の変更に関する質問がある場合は、いつでも研究チームに連絡することが歓迎されました。 このグループを通じて、12 個の音声メッセージが録音され、配布されました。 これらのメッセージは、患者が健康教育を受講するのに役立つように、小冊子の内容を要約したもので、簡単にアクセスできる方法です。 健康的な習慣に関するヒントや精神活動のためのエクササイズもこのグループにアップロードされました。

2.3.8 臨床状態と臨床検査プロファイルの最終的な再評価。 募集から 6 か月後、研究終了まで継続した 98 人の参加者に対して対面インタビューが実施されました。 彼らは、プログラムへの遵守状況を評価するための最終シートに記入しました。 ACE III 検査とその 2 つのパート A および B 検査を含む TMT は、認知機能に対するライフスタイル修正プログラムの影響を評価するために、臨床検査、体重および血圧の再評価とともに再評価されました。 生活の質とうつ病は、それぞれ SF-36 アンケートと HRDS アンケートを使用して再評価されました。 介入後に、HbA1c レベル、脂質プロファイル、酸化剤および抗酸化剤の検査室分析が再評価されました。