Diabetes Mellitus y microARN como Factores de Riesgo para Deterioro Cognitivo Leve: Impacto de la Modificación del Estilo de Vida

El estudio actual se llevó a cabo durante el período de febrero de 2016 a junio de 2019 en dos etapas.

1. Primer paso (evaluación inicial): fue un estudio transversal realizado en 163 pacientes con diabetes mellitus tipo 2 (T2DM) que asistían a las clínicas ambulatorias del NRC. Los pacientes fueron 65 hombres y 98 mujeres; edad de 40 a 65 años. Todos los pacientes sabían leer y escribir y pudieron completar las pruebas de función cognitiva. Los criterios de exclusión fueron pacientes con DM2 con antecedentes de traumatismo craneoencefálico, ictus, accidente isquémico transitorio, tumor cerebral, epilepsia, enfermedad psiquiátrica, insuficiencia cardíaca o hepática y discapacidad visual o auditiva. Se obtuvo la aprobación del comité de ética de la NRC con el número de registro 15131. Los participantes firmaron un consentimiento informado por escrito antes de ser incluidos en el estudio.

1.1 Se realizó una entrevista cara a cara con todos los participantes para recopilar datos sobre demografía, historial médico y función cognitiva. Los datos incluyeron edad, género, nivel de educación y tabaquismo. Se tomó el historial médico detallado de la diabetes de los pacientes, incluida la edad de diagnóstico de la diabetes, la frecuencia de los ataques hipoglucémicos, el tipo de tratamiento (insulina o hipoglucemiante oral), antecedentes de hipertensión, dislipidemia u otras enfermedades y medicamentos tomados. Se registró cualquier queja que sugiriera la presencia de neuropatía periférica sensorial, como hormigueo, dolor ardiente o entumecimiento en manos y pies. Todos los participantes estudiados fueron sometidos a un examen clínico completo, presión arterial sistólica y diastólica y evaluación antropométrica (medidas de peso y altura).

1.2 La evaluación de la función cognitiva con sus dominios se realizó mediante la prueba Cognitive Examination III (ACE III) de Adenbrooke, que evalúa cinco dominios cognitivos: atención, memoria, fluidez verbal, lenguaje y habilidades visuoespaciales. Es la escala cognitiva en forma árabe más confiable y validada y disponible gratuitamente para ser aplicada. Se consideró deterioro cognitivo leve (DCL) objetivo si la puntuación ACE III es inferior a 88. También se utilizó el Trail Making Test (TMT). El TMT es uno de los instrumentos más utilizados en la evaluación neuropsicológica como indicador de la velocidad del procesamiento cognitivo y del funcionamiento ejecutivo. Evalúa la atención, la concentración, la velocidad psicomotora, el cambio cognitivo y la función de secuenciación compleja midiendo el tiempo necesario para conectar una serie de círculos numerados y con letras secuencialmente. La prueba consta de dos partes (A y B). La puntuación directa de cada parte está representada por el tiempo de finalización de las tareas. Un tiempo más corto indica una mejor función cognitiva.

1.3 Se utilizó la Escala de Calificación de Hamilton para la Depresión (HRSD, por sus siglas en inglés), una de las escalas más utilizadas que califica objetivamente la gravedad de la depresión. La escala incluye 17 ítems, cada uno se puntúa en una escala de 3 o 5 puntos, siendo la puntuación final indicativa de la gravedad de la depresión del paciente. La clasificación del nivel de depresión se realizó en función del National Institute for Health & Clinical Excellence del Reino Unido (UK) (0-7 = Normal, 8-13 = Depresión leve, 14-18 = Depresión moderada, 19-22 = Depresión severa y ≥ 23 = Depresión muy severa).

1.4 La evaluación de la calidad de vida relacionada con la salud (CVRS) se llevó a cabo mediante el cuestionario Short Form-36 (SF-36). El cuestionario contiene 36 ítems que comprenden ocho dominios del estado de salud que son funcionamiento físico (PF), rol físico (RP), dolor corporal (BP), percepción general de salud GH), vitalidad (VT), funcionamiento social (SF), rol emocional (RE) y salud mental (MH). La puntuación de cada dominio es de 0 a 100, con una puntuación de '100' como la mejor calificación de salud. Se utilizó la versión árabe del cuestionario.

1.5 Evaluación del estilo de vida de los pacientes con DM2. A los pacientes se les entregó un cuestionario diseñado para evaluar su estilo de vida en cuanto a hábitos nutricionales, actividades físicas, sociales y mentales y la opinión sobre la mejor manera de motivarlos para cambiar su estilo de vida.

1.6 Análisis de laboratorio de referencia. Se extrajo una muestra de sangre de cinco ml bajo una técnica completamente aséptica de cada participante, después de un ayuno de al menos 10 horas al comienzo del estudio. Se dividió en tubos vacutainer de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) seco simple y lavanda. El nivel de hemoglobina glicosilada (HbA1c) y el colesterol total en sangre se evaluaron utilizando el autoanalizador químico Olympus-au-400. Las concentraciones de malondialdehído (MDA) en suero se determinaron utilizando un kit ELISA basado en la técnica de inmunoensayo enzimático de unión competitiva. Se examinó la actividad antioxidante enzimática de la catalasa, la glutatión peroxidasa (GPx) y la glutatión reductasa (GR) en los eritrocitos.

1.7 Para el análisis de expresión de miARN: se extrajo sangre en tubos especiales de conservación de ARN; invertida 8-10 veces, y luego almacenada congelada a -80°C para una mayor extracción de ARN. El aislamiento de ARN y la estimación de la calidad del ARN se emplearon antes de iniciar la caracterización de la expresión de miARN. Solo 1-10 nanogramos de ARN total purificado o equivalente fue suficiente para cuantificar de forma fiable los miARN de interés. Las concentraciones de miARN seleccionadas en este estudio se determinaron mediante el ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cuantitativa en tiempo real (qRT) TaqMan miARN de diana única (Applied Biosystems) en las muestras de plasma de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se aplicó un protocolo de dos pasos que solo requiere transcripción inversa con un cebador específico de miARN, seguido de PCR en tiempo real con sondas TaqMan. El TaqMan MicroRNA Assays es un cebador de transcripción inversa de estructura de bucle de tallo específico del objetivo. El bucle de tallo logra dos objetivos: 1) especificidad solo para el objetivo de miARN maduro, y 2) formación de un cebador de transcriptasa inversa (RT)/quimera de miARN maduro, extendiendo el extremo 5' del miARN. Las reacciones de RT que contengan muestras de ARN, cebadores en bucle, tampón 1 X, transcriptasa inversa e inhibidor de ARNasa se incubarán durante 30 min cada una, a 16 °C ya 42 °C. El amplicón de RT más largo resultante presenta una plantilla susceptible de PCR en tiempo real estándar, utilizando ensayos TaqMan. Luego se realizó la PCR en tiempo real en el instrumento de PCR en tiempo real Quant Studio 12 K Flex.

Segundo paso (ensayo de intervención): Este paso fue un estudio de intervención para la educación sanitaria y la modificación del estilo de vida. Se llevó a cabo para Implementar el programa de modificación del estilo de vida en pacientes con DM2.

2.1 Diseño de dos folletos educativos para la salud Después de identificar las necesidades de los participantes con DM2, el equipo de investigación diseñó dos folletos educativos para la salud. El primer cuadernillo titulado "Diabetes mellitus y cómo controlar sus complicaciones". El folleto incluye información sobre la enfermedad T2DM y cómo afecta a los diferentes sistemas del cuerpo que conducen a complicaciones de la Diabetes Mellitus (DM). También incluye información sobre el nivel normal y anormal de glucosa en sangre en ayunas y hemoglobina glicosilada (HbA1c). Demuestra cómo controlar y prevenir las complicaciones de la DM, enfatizando en la nutrición saludable y el conteo de carbohidratos, actividades físicas, adherencia estricta al régimen médico y evitar el estrés. El segundo cuadernillo titulado "Deterioro cognitivo leve y cómo prevenirlo" incluye información sobre la definición de función cognitiva, DCL y Alzheimer y su relación con la DM2 y los factores de riesgo de deterioro cognitivo y cómo controlar y mejorar la función cognitiva.

2.2 Implementación del programa de educación del paciente: Solo 144 participantes aceptaron la invitación para asistir a las sesiones de educación para la salud (ES). El número real de asistentes fue solo 121. Las razones para la no participación incluyen: falta de interés y se negaron a comprometerse con el programa de estilo de vida.

2.2.1 Sesiones de HE de discusión presencial y grupal para fomentar la modificación del estilo de vida: Todos los pacientes estudiados fueron invitados a asistir a las sesiones de HE. Se llevaron a cabo siete sesiones en NRC durante un período de casi 2 meses explicando los dos folletos diseñados. Las conferencias HE fueron presentadas por el equipo de salud pública y un experto en diabetes que participó en la discusión grupal para explicar y responder las preguntas relacionadas con el manejo de la DM2. Se brindó programa HE para el control de la DM, información sobre alimentos importantes para la salud cerebral y diferentes juegos intelectuales para mejorar su cognición.

2.2.2 Difusión de Materiales Educativos Los cuadernillos elaborados fueron distribuidos a todos los asistentes. Se informó a los participantes sobre la importancia de estos dos folletos para mejorar su información científica sobre T2DM y MCI.

2.2.3 Reevaluación de análisis de laboratorio. Se extrajeron 3 ml de muestra de sangre bajo técnica de asepsia completa a cada participante, previo ayuno de al menos 10 horas en el momento de la educación sanitaria. Su objetivo era evaluar FBG, HbA1c y colesterol total en sangre justo antes de la intervención y se reevaluaron tres meses durante la intervención para ser un incentivo para los pacientes como un seguimiento del progreso que lograron debido a la modificación del estilo de vida. A cada participante se le pidió que recibiera sus resultados de laboratorio personalmente del equipo de investigación. Esto permitió discutir la interpretación de sus resultados y así volver a alentarlo o darle los consejos necesarios para mantener su adherencia al programa de modificación del estilo de vida.

2.2.4 El seguimiento y manejo clínico fue realizado por especialistas en endocrinología y neurología dependiendo de los resultados de laboratorio y cumplimiento del paciente.

2.2.5 Programa de Nutrición Médica Individualizada: A cada participante se le pidió que completara un diario de alimentación de 3 días. Estos se discutieron con cada participante individualmente a través de una entrevista cara a cara con el fin de asesorarlos y convencerlos de cambiar sus hábitos alimenticios. A cada paciente se le enseñó cómo puede regular su dieta según el resultado de los análisis de laboratorio y el recuento de carbohidratos.

2.2.6 También se distribuyó un esquema de seguimiento quincenal individualizado como una guía para el cambio de conductas saludables objetivo que permitiera el autocontrol de su progreso alcanzado. Durante un período de 6 meses, los participantes fueron seguidos a través del teléfono móvil, utilizando una hoja diseñada, para evaluar el cumplimiento y la adherencia de los pacientes al programa de modificación del estilo de vida.

2.2.7 Grupo de aplicación de teléfono de WhatsApp: Se invitó a los participantes a contactar al equipo de investigación cada vez que tuvieran alguna consulta sobre el estilo de vida o las modificaciones del tratamiento. A través de este grupo, se grabaron y distribuyeron 12 mensajes de audio. Estos mensajes resumieron el contenido del folleto, para ser una forma de fácil acceso para los pacientes para ayudarlos a seguir la educación para la salud. A este grupo también se subieron consejos para hábitos saludables así como ejercicios para actividades mentales.

2.3.8 Reevaluación final del estado clínico y perfil de laboratorio. Seis meses después del reclutamiento, se realizó una entrevista cara a cara con los 98 participantes que continuó hasta el final del estudio. Ellos completaron una hoja final para evaluar su cumplimiento con el programa. La prueba ACE III y TMT con sus dos partes A y B se reevaluaron con reevaluación clínica, de peso y de presión arterial para evaluar el impacto del programa de modificación del estilo de vida en la función cognitiva. La calidad de vida y la depresión se reevaluaron mediante los cuestionarios SF-36 y HRDS, respectivamente. Los análisis de laboratorio para el nivel de HbA1c, perfil lipídico, oxidante y antioxidante se reevaluaron después de la intervención.