Diabetes mellitus og mikroRNA som risikofaktorer for mild kognitiv svikt: virkningen av livsstilsendringer

Den nåværende studien ble gjennomført i perioden februar 2016 til juni 2019 i to trinn.

1. Første trinn (grunnlinjevurdering): Det var en tverrsnittsstudie utført på 163 pasienter med type 2 diabetes mellitus (T2DM) som gikk på poliklinikker ved Flyktninghjelpen. Pasientene var 65 menn og 98 kvinner; i alderen 40 til 65 år. Alle pasientene var lesekyndige og var i stand til å fullføre testene av kognitiv funksjon. Eksklusjonskriteriene var T2DM-pasienter med hodetraume, hjerneslag, forbigående iskemisk angrep, hjernesvulst, epilepsi, psykiatrisk sykdom, hjerte- eller leversvikt og syns- eller hørselsvansker. Godkjenning av Flyktninghjelpens etiske komité ble oppnådd med registreringsnummer 15131. Deltakerne signerte et skriftlig informert samtykke før de ble inkludert i studien.

1.1 Det ble gjennomført et ansikt til ansikt-intervju med alle deltakerne for å samle inn data om demografi, sykehistorie og kognitiv funksjon. Data inkluderte alder, kjønn, utdanningsnivå og tobakksrøyking. Detaljert medisinsk historie med diabetes ble tatt fra pasienter, inkludert alder for diagnose av diabetes, hyppighet av hypoglykemiske angrep, type behandling (insulin eller oralt hypoglykemisk legemiddel), historie med hypertensjon, dyslipidemi eller andre sykdommer og medisiner tatt. Enhver klage som tyder på tilstedeværelse av sensorisk perifer nevropati som prikking, brennende smerte eller nummenhet i hender og føtter ble registrert. Alle studerte deltakere ble utsatt for grundig klinisk undersøkelse, systolisk og diastolisk blodtrykk og antropometrisk vurdering (vekt- og høydemålinger).

1.2 Vurdering av kognitiv funksjon med dens domener ble utført ved å bruke Adenbrookes Cognitive Examination III (ACE III) test som vurderer fem kognitive domener: oppmerksomhet, hukommelse, verbal flyt, språk og visuospatiale evner. Det er den mest pålitelige og validerte arabiske formen kognitive skalaen og fritt tilgjengelig for bruk. Objektiv mild kognitiv svikt (MCI) ble vurdert hvis ACE III-skåren er mindre enn 88. Trail Making Test (TMT) ble også brukt. TMT er et av de mest brukte instrumentene i nevropsykologisk vurdering som en indikator på hastigheten på kognitiv prosessering og eksekutiv funksjon. Den vurderer oppmerksomhet, konsentrasjon, psykomotorisk hastighet, kognitiv skifting og kompleks sekvenseringsfunksjon ved å måle tiden som kreves for å koble sammen en serie med sekvensielt nummererte og bokstaverte sirkler. Testen består av to deler (A og B). Den direkte poengsummen til hver del er representert ved tidspunktet for fullføring av oppgavene. Kortere tid indikerer bedre kognitiv funksjon.

1.3 Hamilton Rating Scale for Depression (HRSD) ble brukt, det er en av de mest brukte skalaene som objektivt vurderer alvorlighetsgraden av depresjon. Skalaen inkluderer 17 elementer, hver av dem scores på en 3 eller 5 poengskala, med den endelige poengsummen som indikerer alvorlighetsgraden av pasientens depresjon. Klassifiseringen av depresjonsnivå ble utført avhengig av National Institute for Health & Clinical Excellence of the United Kingdom (UK) (0-7 = Normal, 8-13 = Mild depresjon, 14-18 = Moderat depresjon, 19-22 = Alvorlig depresjon og ≥ 23 = Svært alvorlig depresjon).

1.4 Vurdering av helserelatert livskvalitet (HRQOL) ble utført ved hjelp av spørreskjemaet Short Form-36 (SF-36). Spørreskjemaet inneholder 36 elementer som omfatter åtte domener for helsestatus som er fysisk funksjon (PF), rolle fysisk (RP), kroppslig smerte (BP), generell helseoppfatning GH), vitalitet (VT), sosial funksjon (SF), rolle emosjonell. (RE) og psykisk helse (MH). Poengsummen for hvert domene er fra 0 til 100, med en poengsum på '100' som den beste helsevurderingen. Den arabiske versjonen av spørreskjemaet ble brukt.

1.5 Vurdering av T2DM-pasienters livsstil. Pasientene fikk et utformet spørreskjema for å vurdere livsstilen deres angående ernæringsvaner, fysiske, sosiale og mentale aktiviteter og meningen om den beste måten å motivere dem til å endre livsstil.

1.6 Baseline Laboratorieanalyse. Fem ml blodprøve ble tatt ut under fullstendig aseptisk teknikk fra hver deltaker, etter å ha fastet i minst 10 timer ved begynnelsen av studien. Den ble delt inn i tørre vanlige og lavendel-etylendiamintetra-eddiksyre (EDTA) vakuumrør. Nivået av glykert hemoglobin (HbA1c) og totalt kolesterol i blodet ble vurdert ved hjelp av Olympus-au-400 kjemi auto-analysator. Malondialdehyd (MDA) konsentrasjoner i serum ble bestemt ved bruk av ELISA-sett basert på den konkurrerende bindingsenzym-immunoanalyseteknikken. Erytrocytter ble undersøkt for den enzymatiske antioksidantaktiviteten til katalase, glutationperoksidase (GPx) og glutationreduktase (GR).

1.7 For miRNAs ekspresjonsanalyse: Blod ble trukket inn i spesielle RNA-konserveringsrør; invertert 8-10 ganger, og deretter lagret frosset ved -80°C for videre RNA-ekstraksjon. RNA-isolering og estimering av RNA-kvalitet ble brukt før karakteriseringen av miRNA-ekspresjon startet. Bare 1-10 nanogram renset totalt RNA eller tilsvarende var nok til å pålitelig kvantifisere miRNAene av interesse. Konsentrasjonene av miRNA som ble valgt i denne studien ble bestemt av enkeltmål TaqMan miRNA kvantitative sanntids (qRT) Polymerase Chain Reaction (PCR) assay (Applied Biosystems) i plasmaprøvene i henhold til produsentens instruksjoner. En to-trinns protokoll ble brukt som bare krever revers transkripsjon med en miRNA-spesifikk primer, etterfulgt av sanntids PCR med TaqMan-prober. TaqMan MicroRNA-analysene er en målspesifikk stamløkkestruktur omvendt transkripsjonsprimer. Stilkløkken oppnår to mål: 1) spesifisitet for kun det modne miRNA-målet, og 2) dannelse av en revers transkriptase (RT)-primer/moden miRNA-kimer, som utvider 5'-enden av miRNA. RT-reaksjoner som inneholder RNA-prøver, looped-primere, 1 X buffer, revers transkriptase og RNase-hemmer vil bli inkubert i 30 minutter hver, ved 16 °C og ved 42 °C. Det resulterende lengre RT-amplikonet presenterer en mal som er tilgjengelig for standard sanntids-PCR, ved bruk av TaqMan-analyser. Deretter ble sanntids PCR utført på Quant Studio 12 K Flex sanntids PCR Instrument.

Andre trinn (intervensjonsforsøk): Dette trinnet var en intervensjonsstudie for helseopplæring og livsstilsendring. Det ble utført for å implementere livsstilsmodifikasjonsprogrammet på T2DM-pasienter.

2.1 Utforming av to helsepedagogiske hefter Etter å ha identifisert T2DM-deltakernes behov, utformet forskerteamet to helsepedagogiske hefter. Det første heftet med tittelen "Diabetes mellitus og hvordan kontrollere komplikasjoner". Heftet inneholder informasjon om T2DM-sykdom og hvordan den påvirker ulike kroppssystemer som fører til diabetes mellitus (DM)-komplikasjoner. Den inkluderer også informasjon om normalt og unormalt nivå av fastende blodsukker og glykert hemoglobin (HbA1c). Den demonstrerer hvordan man kontrollerer og forebygger DM-komplikasjoner, legger vekt på sunn ernæring og telling av karbohydrater, fysiske aktiviteter, streng overholdelse av medisinsk diett og unngår stress. Det andre heftet med tittelen "Mild kognitiv svikt og hvordan forebygge" inneholder informasjon om definisjon av kognitiv funksjon, MCI og Alzheimer og dets forhold til T2DM og risikofaktorer for kognitiv svikt og hvordan man kan kontrollere og forbedre kognitiv funksjon.

2.2 Implementering av pasientopplæringsprogram: Bare 144 deltakere takket ja til invitasjonen til å delta på øktene for helseopplæring (HE). Det faktiske antallet som deltok var bare 121. Årsakene til ikke-deltakelse inkluderer: mangel på interesse og de nektet å engasjere seg i livsstilsprogrammet.

2.2.1 Ansikt til ansikt og gruppediskusjon HE-sesjoner for å oppmuntre til endring av livsstil: Alle de studerte pasientene ble invitert til å delta på HE-sesjonene. Syv økter ble holdt på Flyktninghjelpen over en periode på nesten 2 måneder som forklarte de to utformede heftene. HE-forelesninger ble presentert av folkehelseteamet og en diabetikerekspert som delte i gruppediskusjonen for å forklare og svare på spørsmålene knyttet til behandling av T2DM. HE-programmet ble gitt for å kontrollere DM, informasjon om matvarer som er viktige for hjernens helse og forskjellige intellektuelle spill for å forbedre deres kognisjon.

2.2.2 Formidling av undervisningsmateriell De utarbeidede heftene ble delt ut til alle fremmøtte. Deltakerne ble informert om viktigheten av disse to heftene for å forbedre deres vitenskapelige informasjon om T2DM og MCI.

2.2.3 Revurdering av laboratorieanalyse. Tre ml blodprøve ble tatt ut under fullstendig aseptisk teknikk fra hver deltaker, etter å ha fastet i minst 10 timer ved helseopplæringen. Den hadde som mål å vurdere FBG, HbA1c og totalt kolesterol i blodet rett før intervensjonen og ble revurdert tre måneder under intervensjonen for å være et insentiv for pasientene som en overvåking av fremgangen de oppnådde på grunn av livsstilsendringer. Hver deltaker ble bedt om å motta laboratorieresultatene personlig fra forskerteamet. Dette gjorde det mulig å diskutere tolkningen av resultatene hans og dermed oppmuntre eller gi ham nødvendige råd for å opprettholde hans tilslutning til livsstilsmodifiseringsprogrammet.

2.2.4 Klinisk oppfølging og behandling ble utført av spesialist i endokrinologi og nevrologi avhengig av laboratorieresultater og pasientens etterlevelse.

2.2.5 Individualisert medisinsk ernæringsprogram: Hver deltaker ble bedt om å fullføre en 3-dagers matdagbok. Disse ble diskutert med hver deltaker individuelt gjennom et ansikt-til-ansikt-intervju for å gi råd og overbevise dem om å endre kostholdsvanene sine. Hver pasient ble lært hvordan han kan regulere kostholdet sitt avhengig av resultatet av laboratorieanalyse og karbohydrattelling.

2.2.6 Individuelle oppfølgingsordninger hver annen uke ble også distribuert som en veiledning for den målrettede sunne atferden som måtte endres, noe som gjorde det mulig å overvåke deres oppnådde fremgang. I løpet av en periode på 6 måneder ble deltakerne fulgt opp via mobiltelefon, ved hjelp av designet ark, for å vurdere pasientenes etterlevelse og etterlevelse av livsstilsmodifiseringsprogrammet.

2.2.7 WhatsApp-telefonapplikasjonsgruppe: Deltakerne var velkommen til å kontakte forskerteamet når de hadde spørsmål angående livsstils- eller behandlingsendringer. Gjennom denne gruppen ble 12 lydmeldinger tatt opp og distribuert. Disse meldingene oppsummerte innholdet i heftet, for å være en lett tilgjengelig måte for pasientene å hjelpe dem med å følge helseopplæringen. Tips til sunne vaner samt øvelser for mentale aktiviteter ble også lastet opp til denne gruppen.

2.3.8 Endelig revurdering av klinisk status og laboratorieprofil. Seks måneder etter rekruttering ble det gjennomført et ansikt-til-ansikt-intervju med de 98 deltakerne som fortsatte til slutten av studien. De oppfylte et siste ark for å vurdere deres samsvar med programmet. ACE III-testen og TMT med de to delene A- og B-testene ble revurdert med klinisk, vekt- og blodtrykksrevurdering for å evaluere effekten av livsstilsmodifiseringsprogrammet på kognitiv funksjon. Livskvalitet og depresjon ble revurdert ved hjelp av henholdsvis SF-36 og HRDS spørreskjemaer. Laboratorieanalyse for nivå av HbA1c, lipidprofil, oksidant og antioksidant ble revurdert etter intervensjonen.