Diabetes mellitus ja mikroRNA lievän kognitiivisen heikentymisen riskitekijöinä: elämäntyylimuutosten vaikutus

Tämä tutkimus tehtiin helmikuun 2016 ja kesäkuun 2019 välisenä aikana kahdessa vaiheessa.

1. Ensimmäinen vaihe (perusarvio): Se oli poikkileikkaustutkimus, joka suoritettiin 163:lle tyypin 2 diabetes mellitus (T2DM) -potilaalle, jotka käyvät NRC:n poliklinikoilla. Potilaita oli 65 miestä ja 98 naista; iässä 40-65 vuotta. Kaikki potilaat olivat lukutaitoisia ja pystyivät suorittamaan kognitiivisten toimintojen testit. Poissulkemiskriteerit olivat T2DM-potilaat, joilla on ollut päävamma, aivohalvaus, ohimenevä iskeeminen kohtaus, aivokasvain, epilepsia, psykiatrinen sairaus, sydämen tai maksan vajaatoiminta ja näkö- tai kuulovamma. NRC:n eettisen komitean hyväksyntä saatiin rekisterinumerolla 15131. Osallistujat allekirjoittivat kirjallisen tietoisen suostumuksen ennen tutkimukseen osallistumista.

1.1 Kaikkien osallistujien kanssa suoritettiin haastattelu, jossa kerättiin tietoja väestötiedoista, sairaushistoriasta ja kognitiivisista toiminnoista. Tiedot sisälsivät iän, sukupuolen, koulutustason ja tupakoinnin. Potilailta otettiin diabeteksen yksityiskohtainen sairaushistoria, mukaan lukien diabeteksen diagnoosin ikä, hypoglykeemisten kohtausten esiintymistiheys, hoitotyyppi (insuliini tai suun kautta otettava hypoglykeeminen lääke), verenpainetauti, dyslipidemia tai muut sairaudet ja käytetyt lääkkeet. Kaikki valitukset, jotka viittaavat sensoriseen perifeeriseen neuropatiaan, kuten pistely, polttava kipu tai tunnottomuus käsissä ja jaloissa, kirjattiin. Kaikille tutkituille osallistujille tehtiin perusteellinen kliininen tutkimus, systolinen ja diastolinen verenpaine sekä antropometrinen arviointi (paino- ja pituusmittaukset).

1.2 Kognitiivisen toiminnan ja sen alueiden arviointi suoritettiin Adenbrooken Cognitive Examination III (ACE III) -testillä, joka arvioi viittä kognitiivista aluetta: tarkkaavaisuus, muisti, verbaalinen sujuvuus, kieli ja visuospatiaaliset kyvyt. Se on luotettavin ja validoiduin arabiankielinen kognitiivinen asteikko ja vapaasti käytettävissä. Objektiivista lievää kognitiivista vajaatoimintaa (MCI) otettiin huomioon, jos ACE III -pistemäärä on alle 88. Myös Trail Making Test (TMT) käytettiin. TMT on yksi yleisimmin käytetyistä instrumenteista neuropsykologisessa arvioinnissa kognitiivisen prosessoinnin ja toimeenpanon toiminnan nopeuden indikaattorina. Se arvioi tarkkaavaisuutta, keskittymistä, psykomotorista nopeutta, kognitiivista siirtymistä ja monimutkaista sekvensointitoimintoa mittaamalla aikaa, joka tarvitaan sarjan numeroitujen ja kirjaimilla merkittyjen ympyröiden yhdistämiseen. Testi koostuu kahdesta osasta (A ja B). Kunkin osan suoria pistemääriä edustaa tehtävien suorittamisaika. Lyhyempi aika osoittaa parempaa kognitiivista toimintaa.

Käytettiin 1.3 Hamilton Rating Scale for Depression (HRSD) -asteikkoa, joka on yksi laajimmin käytetyistä asteikoista, jotka arvioivat objektiivisesti masennuksen vakavuutta. Asteikko sisältää 17 kohtaa, joista jokainen pisteytetään 3 tai 5 pisteen asteikolla, ja lopullinen pistemäärä kertoo potilaan masennuksen vakavuuden. Masennustason luokitus tehtiin Yhdistyneen kuningaskunnan National Institute for Health & Clinical Excellence -instituutin (UK) mukaan (0-7 = normaali, 8-13 = lievä masennus, 14-18 = kohtalainen masennus, 19-22 = Vaikea masennus ja ≥ 23 = erittäin vaikea masennus).

1.4 Terveyteen liittyvän elämänlaadun (HRQOL) arviointi suoritettiin Short Form-36 (SF-36) -kyselylomakkeella. Kyselylomake sisältää 36 kohtaa, jotka käsittävät kahdeksan terveydentilan osa-aluetta, jotka ovat fyysinen toiminta (PF), fyysinen rooli (RP), kehon kipu (BP), yleinen terveyskäsitys GH, elinvoima (VT), sosiaalinen toiminta (SF), rooli emotionaalinen. (RE) ja mielenterveys (MH). Kunkin verkkotunnuksen pisteet ovat 0–100, ja pistemäärä 100 on paras terveysluokitus. Kyselystä käytettiin arabiankielistä versiota.

1.5 T2DM-potilaiden elämäntapojen arviointi. Potilaat saivat suunnitellun kyselylomakkeen, jossa arvioitiin heidän elämäntyyliään ravintotottumusten, fyysisten, sosiaalisten ja henkisten toimintojen suhteen sekä mielipide siitä, mikä on paras tapa motivoida heitä elämäntapamuutokseen.

1.6 Lähtötilanne Laboratorioanalyysi. Jokaiselta osallistujalta otettiin viisi ml verinäytettä täydellisessä aseptisessa tekniikassa vähintään 10 tunnin paaston jälkeen tutkimuksen alussa. Se jaettiin kuiviin tavallisiin ja laventelietyleenidiamiinitetraetikkahappo (EDTA) -vacutainer-putkiin. Glykoituneen hemoglobiinin (HbA1c) taso ja veren kokonaiskolesteroli määritettiin käyttämällä Olympus-au-400 kemiallista auto-analysaattoria. Malondialdehydin (MDA) pitoisuudet seerumissa määritettiin käyttämällä ELISA-kittiä, joka perustui kilpailevan sitoutumisentsyymin immunomääritystekniikkaan. Punasoluista tutkittiin katalaasin, glutationiperoksidaasin (GPx) ja glutationireduktaasin (GR) entsymaattinen antioksidanttiaktiivisuus.

1.7 MiRNA:iden ilmentymisanalyysiä varten: verta otettiin erityisiin RNA:n säilytysputkiin; käännettiin ylösalaisin 8-10 kertaa ja säilytettiin sitten pakastettuna -80 °C:ssa RNA:n lisäuuttoa varten. RNA:n eristämistä ja RNA:n laadun arviointia käytettiin ennen miRNA:n ilmentymisen karakterisoinnin aloittamista. Vain 1-10 nanogrammaa puhdistettua kokonais-RNA:ta tai vastaavaa riitti mittaamaan luotettavasti kiinnostavat miRNA:t. Tässä tutkimuksessa valittujen miRNA:iden pitoisuudet määritettiin yhden kohteen TaqMan-miRNA:n kvantitatiivisella reaaliaikaisella (qRT) polymeraasiketjureaktiomenetelmällä (PCR) plasmanäytteistä valmistajan ohjeiden mukaisesti. Käytettiin kaksivaiheista protokollaa, joka vaatii vain käänteistranskription miRNA-spesifisellä alukkeella, mitä seurasi reaaliaikainen PCR TaqMan-koettimilla. TaqMan MicroRNA Assays on kohdespesifinen kantasilmukkarakenteen käänteistranskriptioaluke. Varsisilmukka saavuttaa kaksi tavoitetta: 1) spesifisyys vain kypsälle miRNA-kohteelle ja 2) käänteistranskriptaasi (RT) -alukkeen/kypsän miRNA-kimeeran muodostuminen, joka laajentaa miRNA:n 5'-päätä. RT-reaktioita, jotka sisältävät RNA-näytteitä, silmukka-alukkeita, 1 X puskuria, käänteiskopioijaentsyymiä ja RNaasi-inhibiittoria, inkuboidaan kutakin 30 minuuttia 16 °C:ssa ja 42 °C:ssa. Tuloksena oleva pidempi RT-amplikoni esittelee templaatin, joka soveltuu tavalliseen reaaliaikaiseen PCR:ään käyttämällä TaqMan-määrityksiä. Sitten suoritettiin reaaliaikainen PCR Quant Studio 12 K Flex Real-Time PCR Instrumentilla.

Toinen vaihe (interventiokoe): Tämä vaihe oli interventiotutkimus terveyskasvatusta ja elämäntapojen muuttamista varten. Se suoritettiin elämäntavan muutosohjelman toteuttamiseksi T2DM-potilailla.

2.1 Kahden terveyskasvatusvihkon suunnittelu Kun T2DM-osallistujien tarpeet oli tunnistettu, tutkimusryhmä suunnitteli kaksi terveyskasvatuksen kirjasta. Ensimmäinen kirjanen nimeltä "Diabetes mellitus ja sen komplikaatioiden hallinta". Kirjanen sisältää tietoa T2DM-taudista ja siitä, miten se vaikuttaa eri kehon järjestelmiin, mikä johtaa diabeteksen (DM) komplikaatioihin. Se sisältää myös tietoja normaalista ja epänormaalista paastoveren glukoosipitoisuudesta ja glykoituneesta hemoglobiinista (HbA1c). Se osoittaa, kuinka hallita ja ehkäistä DM-komplikaatioita, painottaen terveellistä ravintoa ja hiilihydraattien laskemista, fyysistä toimintaa, tiukkaa lääketieteellisen hoito-ohjelman noudattamista ja stressin välttämistä. Toinen kirjanen, jonka otsikko on "Lievä kognitiivinen vajaatoiminta ja kuinka ehkäistä", sisältää tietoa kognitiivisten toimintojen määrittelystä, MCI:stä ja Alzheimerista ja sen suhteesta T2DM:ään ja kognitiivisten heikentymien riskitekijöihin sekä kognitiivisten toimintojen hallitsemiseen ja parantamiseen.

2.2 Potilaskoulutusohjelman toteutus: Vain 144 osallistujaa hyväksyi kutsun terveyskasvatustilaisuuksiin. Todellinen osallistujamäärä oli vain 121. Syitä osallistumatta jättämiseen ovat: kiinnostuksen puute ja he kieltäytyivät sitoutumasta elämäntapaohjelmaan.

2.2.1 Kasvotusten ja ryhmäkeskustelu HE-istunnot elämäntyylimuutosten kannustamiseksi: Kaikki tutkitut potilaat kutsuttiin osallistumaan HE-istuntoihin. NRC:ssä pidettiin seitsemän istuntoa lähes 2 kuukauden aikana, joissa selitettiin kaksi suunniteltua kirjasta. HE-luennot pitivät kansanterveystiimi ja diabeetikko, joka osallistui ryhmäkeskusteluun selittääkseen ja vastatakseen T2DM:n hoitoon liittyviin kysymyksiin. HE-ohjelmaa tarjottiin DM:n hallintaan, tietoa aivojen terveydelle tärkeistä elintarvikkeista ja erilaisia ​​älyllisiä pelejä kognition parantamiseksi.

2.2.2 Oppimateriaalin levittäminen Valmistetut kirjaset jaettiin kaikille osallistujille. Osallistujille kerrottiin näiden kahden kirjasen merkityksestä T2DM:ää ja MCI:tä koskevien tieteellisten tietojensa parantamisessa.

2.2.3 Laboratorioanalyysin uudelleenarviointi. Jokaiselta osallistujalta otettiin 3 ml verinäytettä täysin aseptisella tekniikalla vähintään 10 tunnin paaston jälkeen terveysopetuksen aikana. Sen tarkoituksena oli arvioida FBG-, HbA1c- ja veren kokonaiskolesteroliarvot juuri ennen interventiota, ja ne arvioitiin uudelleen kolmen kuukauden aikana interventiossa kannustimena potilaille elämäntapamuutosten edistymisen seurannassa. Jokaista osallistujaa pyydettiin vastaanottamaan laboratoriotuloksensa henkilökohtaisesti tutkimusryhmältä. Tämä antoi mahdollisuuden keskustella hänen tulosten tulkinnasta ja siten rohkaista uudelleen tai antaa hänelle tarvittavia neuvoja säilyttääkseen elämäntapamuutosohjelman noudattamisen.

2.2.4 Kliinisen seurannan ja hoidon suoritti endokrinologian ja neurologian erikoislääkäri laboratoriotulosten ja potilaan hoitomyöntyvyyden mukaan.

2.2.5 Yksilöllinen lääketieteellinen ravitsemusohjelma: Jokaista osallistujaa pyydettiin täyttämään 3 päivän ruokapäiväkirja. Niistä keskusteltiin jokaisen osallistujan kanssa henkilökohtaisesti kasvokkain haastattelussa, jotta heitä neuvottiin ja vakuutettiin muuttamaan ruokailutottumuksiaan. Jokaiselle potilaalle opetettiin, kuinka hän voi säädellä ruokavaliotaan laboratorioanalyysin ja hiilihydraattien määrän perusteella.

2.2.6 Yksilöllinen kahden viikon seurantaohjelma jaettiin myös oppaana kohdistetuille terveellisille käyttäytymismalleille, joita oli muutettava, mikä mahdollisti niiden saavutetun edistymisen itseseurannan. Kuuden kuukauden ajan osallistujia seurattiin matkapuhelimella suunniteltujen arkkien avulla potilaiden hoitomyöntyvyyden ja elämäntavan muutosohjelman noudattamisen arvioimiseksi.

2.2.7 WhatsApp-puhelinsovellusryhmä: Osallistujat olivat tervetulleita ottamaan yhteyttä tutkimusryhmään aina, kun heillä oli kysyttävää elämäntavoista tai hoidon muutoksista. Tämän ryhmän kautta äänitettiin ja jaettiin 12 ääniviestiä. Näissä viesteissä tiivistettiin vihkon sisältö, jotta potilaat voivat helposti saada apua terveyskasvatuksen seuraamiseen. Tähän ryhmään ladattiin myös vinkkejä terveellisiin tapoihin sekä harjoituksia henkiseen toimintaan.

2.3.8 Kliinisen tilan ja laboratorioprofiilin lopullinen uudelleenarviointi. Kuusi kuukautta rekrytoinnin jälkeen suoritettiin kasvokkain haastattelu 98 osallistujan kanssa, jotka jatkoivat tutkimuksen loppuun asti. He täyttivät viimeisen arkin arvioidakseen ohjelman noudattamista. ACE III -testi ja TMT kahdella A- ja B-osaisella testeillä arvioitiin uudelleen kliinisillä, paino- ja verenpainearvioinneilla, jotta voidaan arvioida elämäntapamuutosohjelman vaikutusta kognitiivisiin toimintoihin. Elämänlaatua ja masennusta arvioitiin uudelleen käyttämällä SF-36- ja HRDS-kyselylomakkeita. Laboratorioanalyysit HbA1c-tason, lipidiprofiilin, hapettimen ja antioksidantin suhteen arvioitiin uudelleen toimenpiteen jälkeen.