Diabète sucré et microARN comme facteurs de risque de troubles cognitifs légers : impact de la modification du style de vie

La présente étude a été réalisée durant la période de février 2016 à juin 2019 en deux étapes.

1. Première étape (évaluation de base) : Il s'agissait d'une étude transversale menée auprès de 163 patients atteints de diabète sucré de type 2 (DT2) fréquentant les cliniques externes du CNRC. Les patients étaient 65 hommes et 98 femmes ; âgés de 40 à 65 ans. Tous les patients étaient alphabétisés et ont pu passer les tests de la fonction cognitive. Les critères d'exclusion étaient les patients atteints de DT2 ayant des antécédents de traumatisme crânien, d'accident vasculaire cérébral, d'accident ischémique transitoire, de tumeur cérébrale, d'épilepsie, de maladie psychiatrique, d'insuffisance cardiaque ou hépatique et de déficience visuelle ou auditive. L'approbation du comité d'éthique du CNRC a été obtenue avec le numéro d'enregistrement 15131. Les participants ont signé un consentement éclairé écrit avant d'être inclus dans l'étude.

1.1 Un entretien en face à face a été réalisé avec tous les participants pour collecter des données sur la démographie, les antécédents médicaux et la fonction cognitive. Les données comprenaient l'âge, le sexe, le niveau d'éducation et le tabagisme. Les antécédents médicaux détaillés du diabète ont été relevés auprès des patients, y compris l'âge du diagnostic de diabète, la fréquence des crises d'hypoglycémie, le type de traitement (insuline ou hypoglycémiant oral), les antécédents d'hypertension, de dyslipidémie ou d'autres maladies et les médicaments pris. Toute plainte évoquant la présence d'une neuropathie périphérique sensorielle telle que des picotements, une sensation de brûlure ou un engourdissement des mains et des pieds a été enregistrée. Tous les participants à l'étude ont été soumis à un examen clinique approfondi, à une pression artérielle systolique et diastolique et à une évaluation anthropométrique (mesures du poids et de la taille).

1.2 L'évaluation de la fonction cognitive avec ses domaines a été réalisée à l'aide du test Adenbrooke's Cognitive Examination III (ACE III) qui évalue cinq domaines cognitifs : l'attention, la mémoire, la fluidité verbale, le langage et les capacités visuospatiales. Il s'agit de l'échelle cognitive de forme arabe la plus fiable et la plus validée et disponible gratuitement pour être appliquée. Un trouble cognitif léger objectif (MCI) a été pris en compte si le score ACE III est inférieur à 88. Le Trail Making Test (TMT) a également été utilisé. Le TMT est l'un des instruments les plus largement utilisés dans l'évaluation neuropsychologique comme indicateur de la vitesse du traitement cognitif et du fonctionnement exécutif. Il évalue l'attention, la concentration, la vitesse psychomotrice, le changement cognitif et la fonction de séquençage complexe en mesurant le temps nécessaire pour connecter une série de cercles numérotés et alphabétiques séquentiels. Le test se compose de deux parties (A et B). Le score direct de chaque partie est représenté par le temps d'achèvement des tâches. Un temps plus court indique une meilleure fonction cognitive.

1.3 L'échelle d'évaluation de la dépression de Hamilton (HRSD) a été utilisée, c'est l'une des échelles les plus largement utilisées pour évaluer objectivement la gravité de la dépression. L'échelle comprend 17 items, chacun étant noté sur une échelle de 3 ou 5 points, le score final indiquant la sévérité de la dépression du patient. La classification du niveau de dépression a été réalisée selon le National Institute for Health & Clinical Excellence du Royaume-Uni (UK) (0-7 = Normal, 8-13 = Dépression légère, 14-18 = Dépression modérée, 19-22 = Dépression sévère et ≥ 23 = Dépression très sévère).

1.4 L'évaluation de la qualité de vie liée à la santé (HRQOL) a été réalisée à l'aide du questionnaire Short Form-36 (SF-36). Le questionnaire contient 36 items comprenant huit domaines d'état de santé qui sont le fonctionnement physique (PF), le rôle physique (RP), la douleur corporelle (BP), la perception générale de la santé GH), la vitalité (VT), le fonctionnement social (SF), le rôle émotionnel (RE) et santé mentale (MH). Le score de chaque domaine est de 0 à 100, avec un score de « 100 » comme la meilleure note de santé. La version arabe du questionnaire a été utilisée.

1.5 Évaluation du mode de vie des patients atteints de DT2. Les patients ont reçu un questionnaire conçu pour évaluer leur style de vie concernant les habitudes alimentaires, les activités physiques, sociales et mentales et l'opinion sur la meilleure façon de les motiver à changer leur mode de vie.

1.6 Analyse de base en laboratoire. Un échantillon de sang de cinq ml a été prélevé sous une technique aseptique complète de chaque participant, après avoir jeûné pendant au moins 10 heures au début de l'étude. Il a été divisé en tubes sous vide d'acide éthylène diamine tétra acétique (EDTA) secs et lavande. Le niveau d'hémoglobine glyquée (HbA1c) et le cholestérol sanguin total ont été évalués à l'aide de l'auto-analyseur chimique Olympus-au-400. Les concentrations de malondialdéhyde (MDA) dans le sérum ont été déterminées à l'aide d'un kit ELISA basé sur la technique de dosage immunoenzymatique par liaison compétitive. Les érythrocytes ont été examinés pour l'activité antioxydante enzymatique de la catalase, de la glutathion peroxydase (GPx) et de la glutathion réductase (GR).

1.7 Pour l'analyse de l'expression des miARN : le sang a été prélevé dans des tubes de conservation d'ARN spéciaux ; inversé 8 à 10 fois, puis stocké congelé à -80°C pour une extraction supplémentaire de l'ARN. L'isolement de l'ARN et l'estimation de la qualité de l'ARN ont été utilisés avant de commencer la caractérisation de l'expression des miARN. Seuls 1 à 10 nanogrammes d'ARN total purifié ou équivalent suffisaient pour quantifier de manière fiable les miARN d'intérêt. Les concentrations de miARN sélectionnées dans cette étude ont été déterminées par le test quantitatif de réaction en chaîne par polymérase (PCR) en temps réel (qRT) de miARN TaqMan (Applied Biosystems) dans les échantillons de plasma conformément aux instructions du fabricant. Un protocole en deux étapes a été appliqué qui ne nécessite qu'une transcription inverse avec une amorce spécifique au miARN, suivie d'une PCR en temps réel avec des sondes TaqMan. Le TaqMan MicroRNA Assays est une amorce de transcription inverse à structure tige-boucle spécifique à la cible. La tige-boucle atteint deux objectifs : 1) spécificité pour la seule cible miARN mature et 2) formation d'une amorce de transcriptase inverse (RT)/miARN-chimère mature, prolongeant l'extrémité 5' du miARN. Les réactions RT contenant des échantillons d'ARN, des amorces en boucle, un tampon 1 X, une transcriptase inverse et un inhibiteur de RNase seront incubées pendant 30 min chacune, à 16 °C et à 42 °C. L'amplicon RT plus long qui en résulte présente un modèle se prêtant à la PCR en temps réel standard, en utilisant des tests TaqMan. Ensuite, la PCR en temps réel a été réalisée sur l'instrument de PCR en temps réel Quant Studio 12 K Flex.

Deuxième étape (essai interventionnel) : Cette étape était une étude interventionnelle pour l'éducation à la santé et la modification du style de vie. Il a été réalisé pour mettre en œuvre le programme de modification du style de vie sur les patients atteints de DT2.

2.1 Conception de deux livrets d'éducation à la santé Après avoir identifié les besoins des participants au DT2, l'équipe de recherche a conçu deux livrets d'éducation à la santé. Le premier livret intitulé "Le diabète sucré et comment contrôler ses complications". Le livret comprend des informations sur le DT2 et sur la manière dont il affecte différents systèmes corporels entraînant des complications du diabète sucré (DM). Il comprend également des informations sur le niveau normal et anormal de la glycémie à jeun et de l'hémoglobine glyquée (HbA1c). Il montre comment contrôler et prévenir les complications du diabète, en mettant l'accent sur une alimentation saine et le comptage des glucides, les activités physiques, le strict respect du régime médical et la prévention du stress. Le deuxième livret intitulé « Déficience cognitive légère et comment prévenir » comprend des informations sur la définition de la fonction cognitive, le MCI et la maladie d'Alzheimer et sa relation avec le DT2 et les facteurs de risque de déficience cognitive et comment contrôler et améliorer la fonction cognitive.

2.2 Mise en œuvre du programme d'éducation des patients : Seuls 144 participants ont accepté l'invitation à assister aux séances d'éducation à la santé (ES). Le nombre réel de participants n'était que de 121. Les raisons de la non-participation comprennent : le manque d'intérêt et le refus de s'engager dans le programme de style de vie.

2.2.1 Face à face et discussion de groupe Séances d'EH pour encourager la modification du mode de vie : Tous les patients étudiés ont été invités à assister aux séances d'EH. Sept sessions ont eu lieu au NRC sur une période de près de 2 mois expliquant les deux livrets conçus. Les conférences de l'ES ont été présentées par l'équipe de santé publique et un expert en diabète qui ont participé à la discussion de groupe pour expliquer et répondre aux questions liées à la prise en charge du DT2. Le programme HE a été fourni pour contrôler le DM, des informations sur les aliments importants pour la santé du cerveau et différents jeux intellectuels pour améliorer leur cognition.

2.2.2 Diffusion du matériel pédagogique Les livrets préparés ont été distribués à tous les participants. Les participants ont été informés de l'importance de ces deux livrets pour améliorer leur information scientifique sur le DT2 et le MCI.

2.2.3 Réévaluation des analyses de laboratoire. Trois ml d'échantillon de sang ont été prélevés sous technique d'asepsie complète de chaque participant, après un jeûne d'au moins 10 heures au moment de l'éducation sanitaire. Il visait à évaluer le FBG, l'HbA1c et le cholestérol sanguin total juste avant l'intervention et a été réévalué trois mois au cours de l'intervention pour inciter les patients à suivre les progrès qu'ils ont obtenus en raison de la modification du mode de vie. Chaque participant a été invité à recevoir personnellement ses résultats de laboratoire de la part de l'équipe de recherche. Cela a permis de discuter de l'interprétation de ses résultats et ainsi de le ré-encourager ou de lui donner tout conseil nécessaire pour maintenir son adhésion au programme de modification du mode de vie.

2.2.4 Le suivi clinique et la prise en charge étaient assurés par un spécialiste en endocrinologie et en neurologie en fonction des résultats de laboratoire et de l'observance du patient.

2.2.5 Programme de nutrition médicale individualisé : Chaque participant a été invité à remplir un journal alimentaire de 3 jours. Celles-ci ont été discutées avec chaque participant individuellement à travers un entretien en face-à-face afin de les conseiller et de les convaincre de changer leurs habitudes alimentaires. Chaque patient a appris comment il peut réguler son alimentation en fonction du résultat de l'analyse en laboratoire et du nombre de glucides.

2.2.6 Un programme de suivi bihebdomadaire individualisé a également été distribué comme guide pour les comportements sains ciblés à modifier, ce qui a permis l'auto-surveillance des progrès réalisés. Sur une période de 6 mois, les participants ont été suivis par téléphone mobile, à l'aide d'une feuille conçue, pour évaluer la conformité et l'adhésion des patients au programme de modification du style de vie.

2.2.7 Groupe d'application téléphonique WhatsApp : les participants ont été invités à contacter l'équipe de recherche chaque fois qu'ils avaient des questions concernant le style de vie ou les modifications de traitement. Grâce à ce groupe, 12 messages audio ont été enregistrés et distribués. Ces messages résumaient le contenu du livret, pour être un moyen facilement accessible pour les patients pour les aider à suivre l'éducation à la santé. Des conseils pour des habitudes saines ainsi que des exercices pour les activités mentales ont également été téléchargés dans ce groupe.

2.3.8 Réévaluation finale de l'état clinique et du profil de laboratoire. Six mois après le recrutement, un entretien en face à face a été réalisé avec les 98 participants qui se sont poursuivis jusqu'à la fin de l'étude. Ils ont rempli une fiche finale pour évaluer leur conformité au programme. Le test ACE III et le TMT avec ses deux parties A et B ont été réévalués avec une réévaluation clinique, du poids et de la pression artérielle pour évaluer l'impact du programme de modification du mode de vie sur la fonction cognitive. La qualité de vie et la dépression ont été réévaluées à l'aide des questionnaires SF-36 et HRDS respectivement. Les analyses de laboratoire pour le niveau d'HbA1c, le profil lipidique, l'oxydant et l'antioxydant ont été réévalués après l'intervention.