Сахарный диабет и микроРНК как факторы риска легких когнитивных нарушений: влияние модификации образа жизни

Настоящее исследование проводилось в период с февраля 2016 года по июнь 2019 года в два этапа.

1. Первый этап (базовая оценка): это было перекрестное исследование, проведенное на 163 пациентах с сахарным диабетом 2 типа (СД2), посещающих амбулаторные клиники НРЦ. Больными были 65 мужчин и 98 женщин; в возрасте от 40 до 65 лет. Все больные были грамотны и могли выполнять тесты когнитивных функций. Критериями исключения были больные СД2 с травмой головы, инсультом, транзиторной ишемической атакой, опухолью головного мозга, эпилепсией, психическими заболеваниями, сердечной или печеночной недостаточностью, нарушением зрения или слуха. Получено одобрение этического комитета NRC с регистрационным номером 15131. Перед включением в исследование участники подписали письменное информированное согласие.

1.1 Со всеми участниками было проведено личное интервью для сбора данных о демографии, истории болезни и когнитивных функциях. Данные включали возраст, пол, уровень образования и курение табака. У пациентов был собран подробный анамнез СД, включая возраст установления диагноза СД, частоту приступов гипогликемии, тип лечения (инсулин или пероральный гипогликемический препарат), историю артериальной гипертензии, дислипидемии или других заболеваний и принимаемых лекарств. Были зарегистрированы любые жалобы, указывающие на наличие сенсорной периферической невропатии, такие как покалывание, жгучая боль или онемение в руках и ногах. Все исследуемые участники были подвергнуты тщательному клиническому обследованию, систолическому и диастолическому артериальному давлению и антропометрической оценке (измерения веса и роста).

1.2 Оценка когнитивной функции с ее областями проводилась с использованием теста Аденбрука «Когнитивный экзамен III» (ACE III), который оценивает пять когнитивных областей: внимание, память, беглость речи, язык и зрительно-пространственные способности. Это самая надежная и проверенная когнитивная шкала арабской формы, которую можно свободно применять. Объективное легкое когнитивное нарушение (MCI) рассматривалось, если оценка по шкале ACE III была менее 88. Также использовался тест создания следов (TMT). TMT является одним из наиболее широко используемых инструментов в нейропсихологической оценке как индикатор скорости когнитивной обработки и исполнительного функционирования. Он оценивает внимание, концентрацию, скорость психомоторики, когнитивное переключение и функцию сложной последовательности, измеряя время, необходимое для соединения серии последовательно пронумерованных и буквенных кругов. Тест состоит из двух частей (А и Б). Прямая оценка каждой части представлена ​​временем выполнения заданий. Более короткое время указывает на лучшую когнитивную функцию.

1.3 Использовалась шкала оценки депрессии Гамильтона (HRSD), которая является одной из наиболее широко используемых шкал, объективно оценивающих тяжесть депрессии. Шкала включает 17 пунктов, каждый из которых оценивается по 3- или 5-балльной шкале, при этом окончательная оценка указывает на тяжесть депрессии пациента. Классификация уровня депрессии проводилась в зависимости от Национального института здоровья и клинического совершенства Соединенного Королевства (Великобритания) (0–7 = нормальная, 8–13 = легкая депрессия, 14–18 = умеренная депрессия, 19–22 = Тяжелая депрессия и ≥ 23 = очень тяжелая депрессия).

1.4 Оценка качества жизни, связанного со здоровьем (HRQOL), проводилась с использованием опросника Short Form-36 (SF-36). Анкета содержит 36 пунктов, включающих восемь доменов состояния здоровья: физическое функционирование (PF), ролевое физическое (RP), телесная боль (BP), общее восприятие здоровья GH), жизнеспособность (VT), социальное функционирование (SF), ролевое эмоциональное состояние. (RE) и психическое здоровье (MH). Оценка каждого домена составляет от 0 до 100, при этом оценка «100» является лучшей оценкой здоровья. Использовалась арабская версия анкеты.

1.5. Оценка образа жизни больных СД2. Пациентам была предоставлена ​​разработанная анкета для оценки их образа жизни в отношении пищевых привычек, физической, социальной и умственной активности, а также мнение о том, как лучше всего мотивировать их на изменение своего образа жизни.

1.6 Базовый лабораторный анализ. Образец крови объемом 5 мл был взят в условиях полной асептики у каждого участника после голодания в течение не менее 10 часов в начале исследования. Он был разделен на вакуумные пробирки с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА) сухой простой и бледно-лиловой. Уровень гликированного гемоглобина (HbA1c) и общего холестерина в крови определяли с помощью химического автоанализатора Olympus-au-400. Концентрацию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке определяли с использованием набора ELISA, основанного на методе иммуноферментного анализа с конкурентным связыванием. Эритроциты исследовали на ферментативную антиоксидантную активность каталазы, глутатионпероксидазы (ГПх) и глутатионредуктазы (ГР).

1.7 Для анализа экспрессии микроРНК: Кровь отбирали в специальные пробирки для сохранения РНК; переворачивали 8-10 раз, а затем хранили в замороженном виде при -80°С для дальнейшего выделения РНК. Выделение РНК и оценку качества РНК использовали до начала характеристики экспрессии микроРНК. Всего 1-10 нанограммов очищенной тотальной РНК или ее эквивалента было достаточно для надежного количественного определения интересующих микроРНК. Концентрации микроРНК, выбранных в этом исследовании, определяли с помощью количественного анализа полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени (qRT) TaqMan miRNA с одной мишенью (Applied Biosystems) в образцах плазмы в соответствии с инструкциями производителя. Был применен двухэтапный протокол, который требует только обратной транскрипции со специфичным для микроРНК праймером с последующей ПЦР в реальном времени с зондами TaqMan. TaqMan MicroRNA Assays представляет собой специфический праймер для обратной транскрипции со структурой «стебель-петля». Стебель-петля выполняет две цели: 1) специфичность только в отношении зрелой мишени miRNA и 2) образование праймера/зрелой miRNA-химеры Reverse Transcriptase (RT), удлиняющего 5'-конец miRNA. Реакции RT, содержащие образцы РНК, петлевые праймеры, 1 X буфер, обратную транскриптазу и ингибитор РНКазы, инкубируют в течение 30 минут каждый при 16°C и 42°C. Полученный более длинный ампликон RT представляет собой матрицу, пригодную для стандартной ПЦР в реальном времени с использованием анализов TaqMan. Затем проводили ПЦР в реальном времени на приборе Quant Studio 12 K Flex для ПЦР в реальном времени.

Второй этап (интервенционное испытание). Этот этап представлял собой интервенционное исследование по санитарному просвещению и изменению образа жизни. Проведено «Внедрение программы модификации образа жизни у больных СД2».

2.1 Разработка двух буклетов по санитарному просвещению После определения потребностей участников с СД2 исследовательская группа разработала два буклета по санитарному просвещению. Первая брошюра под названием «Сахарный диабет и как контролировать его осложнения». Буклет включает информацию о заболевании СД2 и о том, как он влияет на различные системы организма, приводя к осложнениям сахарного диабета (СД). Он также включает информацию о нормальном и аномальном уровне глюкозы в крови натощак и гликированного гемоглобина (HbA1c). Демонстрирует, как контролировать и предотвращать осложнения СД, акцентируя внимание на здоровом питании и подсчете углеводов, физических нагрузках, строгом соблюдении режима лечения и избегании стрессов. Второй буклет под названием «Легкие когнитивные нарушения и способы их предотвращения» включает информацию об определении когнитивной функции, MCI и болезни Альцгеймера и ее связи с СД2 и факторами риска когнитивных нарушений, а также о том, как контролировать и улучшать когнитивные функции.

2.2 Реализация программы обучения пациентов: только 144 участника приняли приглашение посетить занятия по санитарному просвещению (ОЗ). На самом деле присутствовало всего 121 человек. Причины неучастия включают: отсутствие интереса и отказ от участия в программе образа жизни.

2.2.1 Личные и групповые обсуждения Сеансы ПЭ для поощрения изменения образа жизни: Все исследуемые пациенты были приглашены на сеансы ПЭ. В течение почти 2 месяцев в NRC было проведено семь сессий, на которых объяснялись два разработанных буклета. Лекции HE были представлены командой общественного здравоохранения и экспертом по диабету, которые приняли участие в групповой дискуссии, чтобы объяснить и ответить на вопросы, связанные с ведением СД2. Программа HE была предоставлена ​​для контроля DM, информации о продуктах, важных для здоровья мозга, и различных интеллектуальных игр для улучшения их познания.

2.2.2 Распространение учебных материалов Подготовленные буклеты были розданы всем присутствующим. Участники были проинформированы о важности этих двух буклетов для улучшения их научной информации о СД2 и ЛКН.

2.2.3 Переоценка лабораторного анализа. Три мл образца крови были взяты в полной асептической технике у каждого участника после голодания в течение не менее 10 часов во время санитарного просвещения. Он был направлен на оценку FBG, HbA1c и общего холестерина в крови непосредственно перед вмешательством и был повторно оценен через три месяца во время вмешательства, чтобы побудить пациентов отслеживать прогресс, которого они достигли благодаря модификации образа жизни. Каждому участнику было предложено лично получить свои лабораторные результаты от исследовательской группы. Это позволило обсудить интерпретацию его результатов и, таким образом, вновь поощрить или дать ему любой необходимый совет, чтобы сохранить его приверженность программе модификации образа жизни.

2.2.4 Клиническое наблюдение и ведение осуществляли специалисты в области эндокринологии и неврологии в зависимости от результатов лабораторных исследований и соблюдения пациентом режима лечения.

2.2.5 Индивидуальная программа лечебного питания. Каждому участнику было предложено заполнить 3-дневный пищевой дневник. Они были обсуждены с каждым участником индивидуально в ходе личного интервью, чтобы посоветовать и убедить их изменить свои диетические привычки. Каждого пациента учили, как он может регулировать свое питание в зависимости от результата лабораторного анализа и количества углеводов.

2.2.6 Индивидуальная двухнедельная схема последующего наблюдения также была распространена в качестве руководства по целевому здоровому поведению, которое необходимо изменить, что позволило осуществлять самоконтроль достигнутого прогресса. В течение 6 месяцев за участниками наблюдали по мобильному телефону, используя разработанную таблицу, для оценки соблюдения пациентами программы модификации образа жизни.

2.2.7 Группа приложений для телефона WhatsApp: участников приглашали связываться с исследовательской группой всякий раз, когда у них возникали какие-либо вопросы относительно образа жизни или модификации лечения. Через эту группу было записано и распространено 12 аудиосообщений. Эти сообщения резюмировали содержание буклета, чтобы пациенты могли легко получить доступ к санитарному просвещению. В эту группу также загружались советы по здоровым привычкам, а также упражнения для умственной деятельности.

2.3.8 Окончательная повторная оценка клинического состояния и лабораторного профиля. Через шесть месяцев после набора было проведено личное интервью с 98 участниками, которое продолжалось до конца исследования. Они заполнили заключительный лист, чтобы оценить их соответствие программе. Тест ACE III и TMT с его двумя частями A и B были повторно оценены с повторной оценкой клинической картины, массы тела и артериального давления, чтобы оценить влияние программы модификации образа жизни на когнитивные функции. Качество жизни и депрессия оценивались с использованием опросников SF-36 и HRDS соответственно. Лабораторный анализ на уровень HbA1c, липидный профиль, оксиданты и антиоксиданты были повторно оценены после вмешательства.