血液透析患者の酸化ストレスに対するルチンとビタミンCの効果の評価

血液透析患者の酸化ストレスに対するルチンとビタミンCの効果の評価

薬学修士号（臨床薬学）の一部履行のために提出されたプロトコル

に：

サミア・モハメド・オマル

監督下

Prof. Dr. Nagwa Ali Sabri アイン・シャムス大学薬学部教授兼臨床薬学部長

准教授 テイマー・ワヒド・エル・サイド教授 アイン・シャムス大学医学部腎臓内科准教授

Radwa Maher Abd-el-Kader-el-Borolossy 博士 アイン・シャムス大学薬学部臨床薬学部講師

序章

罹患率と死亡率は、慢性腎臓病患者に関して世界中の医学者が直面している現在最も重要な問題です。 (Kazi et al、2008) 酸化ストレスはタンパク質、脂質、DNA への酸化的損傷に関連しており、慢性腎臓病患者の病気の進行に重要な役割を果たしています。酸化ストレスでは、活性酸素種 (ROS) の産生が抗酸化物質を上回ります。血液透析においても、好中球と単球（食細胞）を活性化する適合性の低い透析膜処理により酸化ストレスが増加しました。また、スーパーオキシドジスムターゼ、グルタチオンペルオキシダーゼ、ペルオキシレドキシン 2 酵素の活性が低下する抗酸化能力の低下により、酸化ストレスが増加しました。 (Gwozdzinski K et al, 2021) ESRD 患者のいくつかの併存疾患は、脂質異常症などの高レベルの酸化促進物質を特徴とする酸化ストレスに関連しています。 、血管石灰化、高血圧、糖尿病(DM)、および老年。(モンダレーシ) et al、2015) 栄養失調状態、および透析に伴う慢性炎症も活性酸素種の生成を引き起こします。(handelman) et al、2001) 各血液透析セッション後に ROS レベルの 14 倍の増加が誘発されます。(Nguyen) 他、1985年。チェン他、1998年。ヤン他、2006)

腎臓はグルタチオンペルオキシダーゼを含む抗酸化酵素を合成しますが、その障害によりこれらの酵素のレベルが低下し、その結果、酸化促進物質が増加します。(Kelly, Rothwell、2020) フリーラジカルによる脂肪酸の酸化は脂質過酸化と呼ばれ、組織損傷の原因となります。(Fatani et al、2016) 脂質の過酸化から生成されるマロンジアルデヒドは求核剤であり、アミノ酸およびタンパク質のスルフヒドリル部分を攻撃してその機能を変化させる能力があります。(Slatter et al, 2000) いくつかの研究では、血液透析患者の死亡率の上昇は、不飽和脂肪酸酸化の最終生成物である MDA レベルの増加に関連した酸化ストレスと関連していることが承認されています。(Juretic) et al、2001) 抗酸化物質は、体内で生成される内因性抗酸化物質 (酵素的および非酵素的) と、食品やサプリメントに含まれる外因性抗酸化物質です。(Liakopoulos) et al、2019) ビタミンB、C、D、E、コエンザイムQ10、L-カルニチン、α-リポ酸、クルクミン、緑茶、フラボノイド、ポリフェノール、オメガ-3多価不飽和脂肪酸、スタチン、微量元素、N-アセチルシステインは、血液透析患者の酸化ストレスを軽減するための外因性抗酸化物質として研究されています。（リアコプロス） et al、2019) 抗酸化治療を使用して血液透析患者の酸化ストレスを軽減することは、命を救い、死闘を回避し、彼らの生活の質を向上させるために有用なアプローチとなる可能性があります。(Navarro) et al、2019) データベースに存在する多くの臨床研究では、ハーブ抗酸化物質を補給した患者において透析に伴う合併症の改善が確認されています。(Asgharpour) M, Alirezaei A , 2012) 最近、ルチンの抗酸化作用に対する注目が高まっています。 モレッティ E 他、2012)

フラボノイドは、そのさまざまな薬理学的特性により、最近科学グループによってユニークな種類の治療用分子として認識されており、ビタミン p またはロトシドとして知られるルチンは、多くの薬理学的効果が発見されています。 Ganeshpurkar A、Saluja AK、2017) ルチンは、トケイソウ、ソバ、お茶、リンゴに含まれるフラボノールです。( Ganeshpurkar A、Saluja AK、2017) ルチンはロトシド、ケルセチン-3-ルチノシドと呼ばれ、ソフォリンは柑橘類のフラボノイド配糖体です。 Kreft S、Knapp M、Kreft I、1999) ルチンは多くの治療特性を持つ植物化学物質です。 （Ganeshpurkar A、Saluja AK、2017） リンゴに含まれるルチンには多くの生物学的活性があるため、1 日 1 個のリンゴを食べれば医者いらずという古代のことわざは正しいようです。 （Ganeshpurkar A、Saluja AK、2017） ルチンは、治療用サプリメントとしての利点を得るために、ヒトにおける有効な安全性プロファイルを実証するために広範囲に研究される必要がある。 ( Ganeshpurkar A、Saluja AK、2017) 治療法としてのルチンは、サイトカインの分泌にかなりの影響を与えることが判明しました。 ( Gandhi GR et al、2020) サイトカインは免疫細胞によって分泌され、糖尿病、がん、関節リウマチなど、長期にわたる疾患中の炎症はサイトカイン媒介の臓器機能不全や組織損傷を引き起こします。 (Gautam R et al、2006) 慢性代謝性疾患に対するルチンの免疫調節効果および抗炎症効果は、ルチンがこれらの疾患およびその合併症の治療に使用できるという考えを裏付けています。 (Gandhi GR et al, 2020) ルチンの使用により血糖値が低下し、脂質プロファイルが改善され、肝臓、血清、心臓における ALT、AST、LDL の活性の変化もルチンによって防止され、ルチンには次のような能力があることが判明しました。肝臓および心臓のTGレベルを低下させ、グリコーゲンレベルを高めます。 (ガンジー GR 他、2020)

驚くべきことに、酸化に対するルチンの安定性は、そのアグリコーゲンであるケルセチンよりも優れていることが判明しました。 (Suzuki et al,2005) ルチンは、ビタミン C の吸収と抗酸化物質として不可欠であるため、ビタミン C と組み合わせてよく使用されます。 (Bus ze Wski et al、1993) 人間の体はフラボノイドを合成できませんが、食事によってルチンを供給できます。ルチンは製品の保存期間を延長するだけでなく、製品の栄養価も高めます。 （Chua LS、2013）毒素に加えて、血液透析ではアスコルビン酸（AA）などの栄養素が血液から除去され、また血液透析患者は食事制限によりアスコルビン酸が不足しており、これが酸化ストレスと、尿毒症によってすでに誘発されている炎症を引き起こします。心血管イベントと死亡率。(チャグウリ) P et al、2021) ROS は AA、特にスーパーオキシドアニオン ラジカルによって還元され、次にアスコルビン酸が酸化されます。 (Bendich A et al, 1986) AA 酸は ROS と競合的に反応し、細胞成分が酸化する前に ROS を除去し、AA は酸化されて脂質膜、タンパク質、DNA を損傷から保護します。 (Berratta M et al、2020) 白血球中のアスコルビン酸濃度は、血漿中よりも 50 ～ 100 倍高くなります。 (Berratta M et al、2020) 血液透析患者の酸化ストレスに対する抗酸化物質としてのルチンの効果について行われた研究はありません。

AAの抗酸化作用と抗炎症作用に関しては、血液透析患者に対するビタミンcの効果を確認することが不可欠です。 (Chaghouri P et al、2021) ルチンとビタミン C は、両方の抗酸化作用と抗炎症作用に基づいて、インビトロおよびインビボのさまざまな研究で確認されており、血液透析患者の研究対象として選択されています。

研究の目的 この研究の目的は、選択された酸化ストレスと炎症マーカーに対するルチンとビタミン C の効果を評価することです。

患者と方法

1. デザイン：

   定期的に血液透析を受けているESRDの成人患者を対象に、前向き介入的非盲検ランダム化対照臨床試験が実施される。

2. 設定：

この研究は、アイン・シャムス大学病院の腎臓科および透析ユニットで実施されます。

合計 105 人の患者が募集され、3 つのグループに分けられます。 - グループ 1: (ルタ C グループ) 35 人の患者は、ビタミン C 160 mg と組み合わせてルチン 60 mg 2 錠を 4 か月間、1 日 3 回摂取します。標準治療に加えて。

グループ 2: (ビタミン C グループ) 35 人の患者は、標準治療に加えて、1 日 2 回、500 mg のビタミン C を 4 か月間摂取します。

グループ 3: 対照グループ。35 人の患者は標準治療のみを受けます。

ベースラインの特性: 以下のデータがベースラインですべての患者から収集されます。

1. 年齢、性別、体重、ESRD の期間、および血液透析の併存疾患。
2. 透析時間、BUN、Cr(mg/dL)、アルブミン(mg/dL)、Hb(g・m%)、腎機能検査、肝機能検査、血糖値、TG、総コレステロール値、LDL-C、HLD -C.

モニタリングパラメータ:

1. 患者は副作用がないか監視されます。
2. ベースライン時と研究終了時にすべてのグループから血液サンプルを採取し、血清を3000 rpm、4℃で10分間遠心分離し、血漿マロンジアルデヒドの生化学的評価のために-80℃で冷凍保存します。 C反応性タンパク質、GSH-PX、TNF-α、ESR。 この分析は酵素結合免疫吸着検定法 (ELISA) によって実行されます。

倫理的配慮:

• 研究はヘルシンキ宣言に従って実施される。
• 薬学部研究倫理委員会 - アインシャムス大学 - 薬学部研究倫理委員会治験審査委員会の承認。
• 研究に参加する前にすべての患者からインフォームド・コンセントが得られますが、患者が希望する場合には研究から撤退する義務はありません。

統計分析：

統計分析は、SPSS ソフトウェア (社会科学のための統計パッケージ) を使用して行われます。 連続変数は、平均 + 標準偏差 (SD) または中央値 + 四分位範囲 (IQR) として表されます。 統計検定は、結果のデータがパラメトリックであるかノンパラメトリックであるかに基づいて選択されます。 0.05 未満の P 値は統計的に有意であるとみなされ、0.001 未満の P 値は非常に有意であるとみなされます。

サンプルサイズの計算:

サンプル サイズは GPower v.3.1.9.4 1 によって計算されました。 Connelly (2008) によると、文献では、パイロット研究のサンプルは、サンプルの 10% である 3 つの等しいサイズのグループ、アルファが 0.05 である必要があり、サンプルサイズは 966 人の参加者となることが示唆されています。 私たちのパイロット研究では、必要なサンプルサイズは 97 人の参加者になります。 脱落者を考慮し、大規模な親研究に投影するため 2.

したがって、本格的な研究では、効果量が 0.10 と小さく、帰無仮説の棄却力が 80% に達することを期待し、グループサイズが等しい場合、合計 105 人の参加者を募集し、参加者を均等に分割することにしました。 3グループ（各グループ35名参加）。

F 検定 - ANOVA: 固定効果、オムニバス、一元配置 分析: アプリオリ: 必要なサンプル サイズを計算 入力: 効果サイズ f = 0.10 α err prob = 0.05 検出力 (1-β err prob) = 0.80 グループ数 = 3 出力: 非心パラメータ λ = 9.6900000 臨界 F = 3.0050418 分子 df = 2 分母 df = 966 合計サンプル サイズ = 969 実際の検出力 = 0.8011010