Valutazione dell'effetto della rutina e della vitamina C sullo stress ossidativo nei pazienti in emodialisi

Valutazione dell'effetto della rutina e della vitamina C sullo stress ossidativo nei pazienti in emodialisi

A Protocollo Presentato per Adempimento Parziale Laurea Magistrale in Scienze Farmaceutiche (Farmacia Clinica)

Di:

Samia Mohamed Omar

Sotto la supervisione di

Prof. Dr. Nagwa Ali Sabri Professore e capo del dipartimento di farmacia clinica Facoltà di farmacia Università di Ain Shams

Assoc. Prof. Tamer Wahid El Said Professore Associato di Nefrologia Facoltà di Medicina Università di Ain Shams

Dr. Radwa Maher Abd-el-Kader-el-Borolossy Docente di Farmacia Clinica Facoltà di Farmacia Università di Ain Shams

introduzione

La morbilità e la mortalità sono i problemi più importanti e attuali che incontrano gli scienziati medici nel mondo nei pazienti con malattie renali croniche. (Kazi et al, 2008) Lo stress ossidativo è associato al danno ossidativo a proteine, lipidi e DNA e svolge un ruolo importante nella progressione della malattia nei pazienti con malattia renale cronica, nello stress ossidativo, la produzione di specie reattive dell'ossigeno (ROS) supera l'antiossidante capacità, anche in emodialisi, lo stress ossidativo è aumentato a causa di trattamenti con membrane di dialisi a bassa compatibilità, che attivano neutrofili e monociti (cellule fagocitiche), e anche a causa di una diminuzione della capacità antiossidante in cui l'attività superossido dismutasi, glutatione perossidasi e perossiredossina2 enzimi è ridotto in aggiunta a bassi livelli di antiossidanti non enzimatici come le vitamine C, E e A. (Gwozdzinski K et al, 2021) Diverse comorbilità nei pazienti con ESRD sono correlate allo stress ossidativo caratterizzato da alti livelli di pro-ossidanti, come la dislipidemia , calcificazioni vascolari, ipertensione, diabete mellito(DM) e vecchiaia.(Mondaresi et al, 2015) Lo stato di malnutrizione e l'infiammazione cronica che accompagnano la dialisi innescano anche la produzione di specie reattive dell'ossigeno. (handelman et al, 2001) dopo ogni sessione di emodialisi viene indotto un aumento di 14 volte dei livelli di ROS. (Nguyen e altri, 1985; Chen et al., 1998; Yang e altri, 2006)

Il rene sintetizza gli enzimi antiossidanti, incluso il glutatione perossidasi e il suo fallimento porta a livelli ridotti di questi enzimi e di conseguenza i pro-ossidanti sono aumentati. (Kelly, Rothwell, 2020) L'ossidazione degli acidi grassi da parte dei radicali liberi è chiamata perossidazione lipidica ed è responsabile del danno tissutale. (Fatani et al, 2016) La malondialdeide generata dalla perossidazione lipidica è un agente nucleofilo che ha la capacità di attaccare e modificare le funzioni degli amminoacidi e della parte sulfidrilica delle proteine. (Slatter et al, 2000) Diversi studi hanno approvato che l'aumento del tasso di mortalità nei pazienti in emodialisi era associato allo stress ossidativo in relazione all'aumento dei livelli di MDA, prodotto finale dell'ossidazione degli acidi grassi insaturi. (Juretic et al, 2001) Gli antiossidanti sono antiossidanti endogeni prodotti dall'organismo (enzimatici e non enzimatici) e antiossidanti esogeni presenti negli alimenti e negli integratori. (Liakopoulos et al, 2019) Vitamine B, C, D ed E, coenzima Q10, L-carnitina, acido a-lipoico, curcumina, tè verde, flavonoidi, polifenoli, acidi grassi polinsaturi omega-3, statine, oligoelementi e N-acetile la cisteina è stata studiata come antiossidante esogeno per ridurre lo stress ossidativo nei pazienti in emodialisi. (Liakopoulos et al, 2019) Ridurre lo stress ossidativo nei pazienti in emodialisi utilizzando trattamenti antiossidanti può essere un approccio utile per salvare la vita, evitare la lotta per la morte e migliorare la loro qualità di vita19. (Navarro et al,2019) Molti studi clinici presenti nelle banche dati hanno confermato il miglioramento delle complicanze accompagnate dalla dialisi nei pazienti integrati con antiossidanti a base di erbe. (Asgharpour M, Alirezaei A , 2012) Ultimamente, sta aumentando l'attenzione verso l'effetto antiossidante della rutina.( Moretti E et al, 2012)

I flavonoidi sono stati recentemente riconosciuti dal gruppo scientifico come una classe unica di molecole terapeutiche a causa delle loro varie proprietà farmacologiche, la rutina, nota come vitamina p o rotoside, è stata scoperta per molti degli effetti farmacologici.( Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) La rutina è un flavonolo, presente nella passiflora, nel grano saraceno, nel tè e nella mela.( Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) La rutina chiamata rotoside, quercetin-3-rutinoside e sophorin è un glicoside flavonoide dell'agrume.( Kreft S, Knapp M, Kreft I, 1999) La rutina è un fitochimico con molte proprietà terapeutiche. (Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) Un antico detto una mela al giorno, toglie il medico di torno sembra essere giusto, poiché la rutina, che si trova nelle mele, ha molte attività biologiche. (Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) La rutina deve essere ampiamente studiata per dimostrare un profilo di sicurezza efficace nell'uomo per ottenere i suoi benefici come integratore terapeutico. (Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) È stato riscontrato che la rutina come trattamento produce un impatto considerevole sulla secrezione di citochine. (Gandhi GR et al, 2020) Le citochine sono secrete dalle cellule immunitarie e l'infiammazione durante le malattie a lungo termine provoca disfunzione d'organo mediata dalle citochine e danni ai tessuti, come nel diabete mellito, nel cancro e nell'artrite reumatoide. (Gautam R et al, 2006) Gli effetti immunomodulatori e antinfiammatori della rutina sulle malattie metaboliche croniche supportano l'idea che la rutina possa essere utilizzata nel trattamento di tali disturbi e delle loro complicanze. (Gandhi GR et al, 2020) La riduzione della glicemia e il miglioramento del profilo lipidico utilizzando la rutina, anche le attività di ALT, AST e LDL nel fegato, nel siero e nei cambiamenti cardiaci sono prevenute dalla rutina, si è scoperto che la rutina ha la capacità di riduce i livelli epatici e cardiaci di TG e migliora il livello di glicogeno. (Gandhi GR et al, 2020)

Sorprendentemente, la stabilità dell'ossidazione dell'aganista della rutina è risultata maggiore del suo aglicogeno, la quercetina. (Suzuki et al,2005) Rutina usata frequentemente in combinazione con la vitamina C perché è essenziale per l'assorbimento della vitamina C e come antiossidante. (Bus ze Wski et al, 1993) Il corpo umano non può sintetizzare i flavonoidi e la dieta può fornire rutina, e la rutina non è solo per il prolungamento della durata di conservazione dei prodotti, ma aumenta anche il valore nutrizionale dei prodotti. (Chua LS, 2013) Oltre alle tossine, l'emodialisi rimuove i nutrienti dal sangue, come l'acido ascorbico (AA) e anche i pazienti in emodialisi sono carenti di acido ascorbico a causa di restrizioni dietetiche e questo innesca lo stress ossidativo e l'infiammazione già indotta dall'uremia che termina con eventi cardiovascolari e mortalità. (Chaghouri P et al, 2021) ROS ridotto da AA, in particolare radicale anione superossido, e a sua volta ossidato dall'acido ascorbico. (Bendich A et al, 1986) L'acido AA reagisce in modo competitivo con i ROS, eliminandoli prima che ossidino i componenti cellulari e l'AA viene ossidato, proteggendo le membrane lipidiche, le proteine ​​e il DNA dai danni. (Berratta M et al, 2020) Nei leucociti le concentrazioni di acido ascorbico raggiungono il 50-100- in più rispetto al plasma. (Berratta M et al, 2020) Non sono stati condotti studi sull'effetto della rutina come antiossidante sullo stress ossidativo nei pazienti in emodialisi.

Per quanto riguarda l'efficacia antiossidante e antinfiammatoria dell'AA, è essenziale vedere l'effetto della vitamina C sui pazienti in emodialisi. (Chaghouri P et al, 2021) Basandosi sull'effetto antiossidante e antinfiammatorio di entrambi, la rutina e la vitamina C confermati da una varietà di studi in vitro e in vivo, la rutina e la vitamina C sono state selezionate per essere studiate nei pazienti in emodialisi.

Scopo dello studio Lo scopo di questo studio è valutare l'effetto della rutina e della vitamina C su marcatori selezionati di stress ossidativo e infiammatorio.

Paziente e metodo

1. Progetto:

   Sarà condotto uno studio clinico prospettico, interventistico, in aperto, randomizzato controllato su pazienti adulti con ESRD in emodialisi regolare.

2. Impostazioni:

Lo studio sarà condotto presso l'unità di nefrologia e dialisi dell'ospedale universitario di Ain Shams

Verranno reclutati un totale di 105 pazienti e divisi in 3 gruppi: - Gruppo 1: (gruppo Ruta C) 35 pazienti assumeranno una dose di 2 compresse di rutina 60 mg in combinazione con vitamina C 160 mg tre volte al giorno per 4 mesi in aggiunta alla loro terapia standard.

Gruppo 2: (gruppo vitamina C) 35 pazienti assumeranno una dose di 500 mg di vitamina C due volte al giorno per 4 mesi in aggiunta alla loro terapia standard.

Gruppo 3: gruppo di controllo, 35 pazienti assumeranno solo la terapia standard.

Caratteristiche al basale: i seguenti dati saranno raccolti da tutti i pazienti al basale

1. Età, sesso, peso, durata dell'ESRD e comorbidità dell'emodialisi.
2. Durata dialisi, azotemia, Cr (mg/d L), albumina (mg/d L), Hb (g m%), test di funzionalità renale, test di funzionalità epatica, livello di glucosio nel sangue, TG, livello di colesterolo totale, LDL-C, HLD -C.

Parametri di monitoraggio:

1. I pazienti saranno monitorati per gli effetti collaterali.
2. il campione di sangue verrà prelevato al basale e alla fine dello studio da tutti i gruppi quindi i sieri saranno centrifugati a 3000 rpm, per 10 minuti a 4°C, e poi mantenuti congelati a -80 C per la valutazione biochimica plasma malondialdeide, Proteina C-reattiva, GSH-PX, TNF-α e ESR. Questa analisi sarà eseguita mediante tecnica di analisi dell'immunosorbente legato all'enzima (ELISA)

Considerazione etica:

• Lo studio sarà eseguito secondo la Dichiarazione di Helsinki.
• Approvazione del Comitato Etico della Ricerca della Facoltà di Farmacia - Università Ain-Shams - Comitato Etico della Ricerca della Facoltà di Farmacia Comitato di Revisione Istituzionale.
• Un consenso informato verrà prelevato da tutti i pazienti prima dell'arruolamento nello studio senza alcun obbligo per i pazienti di ritirarsi dallo studio se lo desiderano.

Analisi statistica:

Le analisi statistiche saranno effettuate utilizzando il software SPSS (Statistical Package for the Social Sciences). Le variabili continue saranno rappresentate come media + deviazione standard (DS) o come mediana + intervallo interquartile (IQR). I test statistici saranno scelti in base al fatto che i dati risultanti saranno parametrici o non parametrici. I valori P inferiori a 0,05 sono considerati statisticamente significativi e i valori P inferiori a 0,001 sono considerati altamente significativi.

Calcolo della dimensione del campione:

La dimensione del campione è stata calcolata da GPower v.3.1.9.4 1. Secondo Connelly (2008), la letteratura suggerisce che un campione di studio pilota dovrebbe essere il 10% del campione 3 gruppi di uguali dimensioni e un alfa di 0,05, la dimensione del campione sarebbe di 966 partecipanti. Per il nostro studio pilota, la dimensione del campione richiesta sarebbe di 97 partecipanti. Per tenere conto degli abbandoni e delle proiezioni per lo studio sui genitori più grandi 2.

Pertanto, per uno studio su vasta scala, prevedendo una piccola dimensione dell'effetto di 0,10, per raggiungere una potenza dell'80% per rifiutare l'ipotesi nulla, con l'uguaglianza delle dimensioni del gruppo, abbiamo deciso di reclutare un totale di 105 partecipanti, equamente divisi tra i 3 gruppi (35 partecipanti in ogni gruppo).

Test F - ANOVA: effetti fissi, omnibus, unidirezionale Analisi: a priori: calcolo della dimensione del campione richiesta Input: dimensione dell'effetto f = 0,10 α err prob = 0,05 Potenza (1-β err prob) = 0,80 Numero di gruppi = 3 Output : Parametro di non centralità λ = 9,6900000 Critico F = 3,0050418 Numeratore df = 2 Denominatore df = 966 Dimensione totale del campione = 969 Potenza effettiva = 0,8011010