Оценка влияния рутина и витамина С на окислительный стресс у пациентов, находящихся на гемодиализе

Оценка влияния рутина и витамина С на окислительный стресс у пациентов, находящихся на гемодиализе

Представлен протокол о частичном присвоении степени магистра фармацевтических наук (клиническая фармация)

К:

Самия Мохамед Омар

Под наблюдением

Проф. д-р Нагва Али Сабри Профессор и заведующий кафедрой клинической фармации Фармацевтического факультета Университета Айн-Шамс

доц. Проф. Тамер Вахид Эль Саид Адъюнкт-профессор нефрологического факультета медицинского факультета Университета Айн-Шамс

Доктор Радва Махер Абд-эль-Кадер-эль-Боролосси Преподаватель клинической фармации Факультет фармации Университет Айн-Шамс

Введение

Заболеваемость и смертность являются наиболее важными актуальными проблемами, с которыми сталкиваются ученые-медики во всем мире у пациентов с хронической болезнью почек. (Kazi et al, 2008) Окислительный стресс связан с окислительным повреждением белков, липидов и ДНК и играет важную роль в прогрессировании заболевания у пациентов с хроническим заболеванием почек, при окислительном стрессе производство активных форм кислорода (АФК) превышает антиоксидантное. способность, также при гемодиализе, окислительный стресс увеличивается из-за низкосовместимых диализных мембранных обработок, которые активируют нейтрофилы и моноциты (фагоцитарные клетки), а также из-за снижения антиоксидантной способности, при которой активность ферментов супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы и пероксиредоксина2 снижается в дополнение к низким уровням неферментативных антиоксидантов, таких как витамины C, E и A. (Gwozdzinski K et al, 2021) Некоторые сопутствующие заболевания у пациентов с терминальной почечной недостаточностью связаны с окислительным стрессом, характеризующимся высоким уровнем прооксидантов, таких как дислипидемия. кальцификация сосудов, артериальная гипертензия, сахарный диабет (СД) и пожилой возраст (Mondaresi et al, 2015) Недоедание и хроническое воспаление, сопровождающее диализ, также запускают выработку активных форм кислорода (Handelman et al, 2001) 14-кратное увеличение уровня АФК индуцируется после каждого сеанса гемодиализа (Нгуен и др., 1985; Чен и др., 1998 г.; Ян и др., 2006 г.)

Почка синтезирует антиоксидантные ферменты, в том числе глутатионпероксидазу, и ее недостаточность приводит к снижению уровня этих ферментов и, как следствие, повышению уровня прооксидантов (Kelly, Rothwell, 2020) Окисление жирных кислот свободными радикалами называется перекисным окислением липидов и вызывает повреждение тканей (Фатани). et al, 2016) Малоновый диальдегид, образующийся в результате перекисного окисления липидов, представляет собой нуклеофильный агент, обладающий способностью атаковать и изменять функции аминокислот и сульфгидрильной части белков (Слаттер). et al, 2000) Несколько исследований подтвердили, что повышенный уровень смертности у пациентов, находящихся на гемодиализе, был связан с окислительным стрессом в связи с повышенным уровнем МДА, конечного продукта окисления ненасыщенных жирных кислот (Juretic). et al, 2001) Антиоксиданты — это эндогенные антиоксиданты, вырабатываемые организмом (ферментативные и неферментативные), и экзогенные антиоксиданты, присутствующие в пищевых продуктах и ​​пищевых добавках (Лиакопулос). et al, 2019) Витамины B, C, D и E, коэнзим Q10, L-карнитин, альфа-липоевая кислота, куркумин, зеленый чай, флавоноиды, полифенолы, полиненасыщенные жирные кислоты омега-3, статины, микроэлементы и N-ацетил. цистеин изучали в качестве экзогенных антиоксидантов для снижения окислительного стресса у пациентов, находящихся на гемодиализе (Лиакопулос). et al, 2019) Уменьшение оксидативного стресса у пациентов, находящихся на гемодиализе, с помощью антиоксидантной терапии может быть полезным подходом для спасения жизни, предотвращения смертельной борьбы и улучшения качества их жизни19. (Navarro et al,2019) Многие клинические исследования, представленные в базах данных, подтвердили уменьшение осложнений, сопровождающих диализ у пациентов, получавших растительные антиоксиданты (Asgharpour M, Alirezaei A, 2012) В последнее время все больше внимания уделяется антиоксидантному действию рутина.( Моретти Э. и др., 2012 г.)

Флавоноиды недавно были признаны научной группой уникальным классом терапевтических молекул из-за их различных фармакологических свойств, рутин, известный как витамин Р или ротозид, был обнаружен для многих фармакологических эффектов. Ганешпуркар А., Салуджа А.К., 2017 г.) Рутин представляет собой флавонол, содержащийся в пассифлоре, гречке, чае и яблоках.( Ганешпуркар А., Салуджа А.К., 2017) Рутин называется ротозидом, кверцетин-3-рутинозидом, а софорин — гликозидом флавоноидов ацитрусовых.( Крефт С., Кнапп М., Крефт И., 1999) Рутин — это фитохимическое вещество, обладающее многими терапевтическими свойствами. (Ганешпуркар А., Салуйя А.К., 2017) Древняя поговорка «Яблоко в день не пускает врача» кажется верной, поскольку рутин, содержащийся в яблоках, обладает многими биологическими активностями. (Ганешпуркар А., Салуджа А.К., 2017) Рутин необходимо тщательно изучить, чтобы продемонстрировать эффективный профиль безопасности для человека, чтобы получить его преимущества в качестве терапевтической добавки. (Ганешпуркар А., Салуджа А.К., 2017) Было обнаружено, что рутин в качестве лечения оказывает значительное влияние на секрецию цитокинов. (Gandhi GR et al, 2020) Цитокины секретируются иммунными клетками, и воспаление при длительных заболеваниях вызывает опосредованную цитокинами дисфункцию органов и повреждение тканей, например, при сахарном диабете, раке, ревматоидном артрите. (Gautam R et al, 2006). Иммуномодулирующее и противовоспалительное действие рутина на хронические метаболические заболевания подтверждает идею о том, что рутин можно использовать для лечения таких нарушений и их осложнений. (Gandhi GR et al, 2020) С помощью рутина снижается уровень глюкозы в крови и улучшается липидный профиль, рутин также предотвращает изменения активности АЛТ, АСТ и ЛПНП в печени, сыворотке и сердце, было обнаружено, что рутин обладает способностью снижает печеночный и сердечный уровни ТГ и повышает уровень гликогена. (Ганди Г.Р. и др., 2020 г.)

Удивительно, но стабильность окисления аганиста рутина оказалась выше, чем его агликогена, кверцетина. (Suzuki et al, 2005) Рутин часто используется в сочетании с витамином С, потому что он необходим для усвоения витамина С и в качестве антиоксиданта. (Bus ze Wski et al, 1993) Человеческий организм не может синтезировать флавоноиды, и диета может поставлять рутин, а рутин не только продлевает срок годности продуктов, но и повышает их пищевую ценность. (Чуа Л.С., 2013) В дополнение к токсинам, гемодиализ удаляет из крови питательные вещества, такие как аскорбиновая кислота (АК), а также пациенты, находящиеся на гемодиализе, испытывают дефицит аскорбиновой кислоты из-за диетических ограничений, и это вызывает окислительный стресс и воспаление, уже вызванное уремией, заканчивающееся сердечно-сосудистые события и смертность (Чагури P et al, 2021) АФК восстанавливаются АК, особенно супероксидным анион-радикалом, и, в свою очередь, окисляется аскорбиновой кислотой. (Bendich A et al, 1986) Кислота АК конкурентно реагирует с АФК, очищая их до того, как они окисляют компоненты клетки, а АК окисляется, защищая липидные мембраны, белки и ДНК от повреждения. (Berratta M et al, 2020) Концентрация аскорбиновой кислоты в лейкоцитах достигает в 50-100 раз выше, чем в плазме. (Berratta M et al, 2020) Исследования о влиянии рутина как антиоксиданта на окислительный стресс у пациентов, находящихся на гемодиализе, не проводились.

Что касается антиоксидантной и противовоспалительной эффективности АК, важно увидеть влияние витамина С на пациентов, находящихся на гемодиализе. (Chaghouri P et al, 2021) Опираясь на антиоксидантный и противовоспалительный эффект рутина и витамина С, подтвержденный различными исследованиями in vitro и in vivo, рутин и витамин С выбраны для изучения у пациентов, находящихся на гемодиализе.

Цель исследования Целью данного исследования является оценка влияния рутина и витамина С на отдельные маркеры окислительного стресса и воспаления.

Пациент и методы

1. Дизайн:

   Проспективное, интервенционное, открытое, рандомизированное контролируемое клиническое исследование будет проведено на взрослых пациентах с тХПН, находящихся на регулярном гемодиализе.

2. Настройки:

Исследование будет проводиться в отделении нефрологии и диализа университетской больницы Айн-Шамс.

Всего будет набрано 105 пациентов, которые будут разделены на 3 группы: - Группа 1: (группа Рута С) 35 пациентов будут принимать по 2 таблетки рутина по 60 мг в сочетании с витамином С по 160 мг три раза в день в течение 4 месяцев в течение 4 месяцев. в дополнение к их стандартной терапии.

Группа 2: (группа витамина С) 35 пациентов будут принимать дозу 500 мг витамина С два раза в день в течение 4 месяцев в дополнение к стандартной терапии.

Группа 3: контрольная группа, 35 пациентов будут получать только стандартную терапию.

Исходные характеристики: Следующие данные будут собраны у всех пациентов на исходном уровне.

1. Возраст, пол, масса тела, продолжительность терминальной почечной недостаточности и сопутствующие заболевания гемодиализа.
2. Продолжительность диализа, АМК, Cr (мг/дл), альбумин (мг/дл), Hb (г·м%), почечная функциональная проба, печеночная проба, уровень глюкозы в крови, ТГ, уровень общего холестерина, ЛПНП-Х, ГЛД -С.

Параметры мониторинга:

1. Пациенты будут находиться под наблюдением на предмет побочных эффектов.
2. образец крови будет взят на исходном уровне и в конце исследования из всех групп, затем сыворотка будет центрифугирована при 3000 об/мин, в течение 10 минут при 4°C, а затем выдержана в замороженном состоянии при -80°C для биохимической оценки малонового диальдегида плазмы, С-реактивный белок, GSH-PX, TNF-α и СОЭ. Этот анализ будет проводиться методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Соблюдение этики:

• Исследование будет проводиться в соответствии с Хельсинкской декларацией.
• Утверждение комитета по этике исследований фармацевтического факультета - университет Айн-Шамс - комитет по этике исследований факультета фармации институциональный наблюдательный совет.
• Перед включением в исследование у всех пациентов будет получено информированное согласие без каких-либо обязательств по выходу пациентов из исследования, если они того пожелают.

Статистический анализ:

Статистический анализ будет проводиться с использованием программного обеспечения SPSS (Статистический пакет для социальных наук). Непрерывные переменные будут представлены как среднее + стандартное отклонение (SD) или как медиана + межквартильный размах (IQR). Статистические тесты будут выбраны на основе того, будут ли результирующие данные параметрическими или непараметрическими. Значения P ниже 0,05 считаются статистически значимыми, а значения P ниже 0,001 считаются высокозначимыми.

Расчет размера выборки:

Размер выборки рассчитывался программой GPower v.3.1.9.4 1. Согласно Connelly (2008), литература предполагает, что выборка пилотного исследования должна составлять 10% от выборки 3 группы одинакового размера и альфа 0,05, размер выборки должен составлять 966 участников. Для нашего пилотного исследования требуемый размер выборки составит 97 участников. Для учета отсева и прогнозов для более крупного родительского исследования 2.

Таким образом, для полномасштабного исследования, ожидая, что небольшой размер эффекта 0,10 достигнет мощности 80%, чтобы отвергнуть нулевую гипотезу, при равенстве размеров групп, мы решили набрать в общей сложности 105 участников, поровну распределенных среди участников. 3 группы (по 35 участников в каждой).

F-тесты - ANOVA: Фиксированные эффекты, омнибус, односторонний Анализ: Априорный расчет: Расчет требуемого размера выборки Входные данные: Размер эффекта f = 0,10 Вероятность ошибки α = 0,05 Мощность (вероятность ошибки 1-β) = 0,80 Количество групп = 3 Выходные данные : Параметр нецентральности λ = 9,6900000 Критическая F = 3,0050418 Числитель df = 2 Знаменатель df = 966 Общий объем выборки = 969 Фактическая мощность = 0,8011010