Avaliação do Efeito da Rutina e da Vitamina C sobre o Estresse Oxidativo em Pacientes em Hemodiálise

Avaliação do Efeito da Rutina e da Vitamina C sobre o Estresse Oxidativo em Pacientes em Hemodiálise

Protocolo Submetido para Realização Parcial do Mestrado em Ciências Farmacêuticas (Farmácia Clínica)

Por:

Samia mohamed omar

Sob supervisão de

Prof. Dr. Nagwa Ali Sabri Professor e chefe do departamento de farmácia clínica Faculdade de farmácia Ain shams university

Associação Prof. Tamer Wahid El Said Professor Associado de Nefrologia Faculdade de Medicina Ain Shams University

Dr. Radwa Maher Abd-el-Kader-el-Borolossy Professor de Farmácia Clínica Faculdade de Farmácia Ain Shams University

Introdução

Morbidade e mortalidade são os problemas importantes mais atuais encontrados pelos cientistas médicos no mundo em pacientes com doença renal crônica. (Kazi et al, 2008) O estresse oxidativo está associado ao dano oxidativo a proteínas, lipídios e DNA e está desempenhando um papel importante na progressão da doença em pacientes com doença renal crônica, no estresse oxidativo, a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) excede o antioxidante capacidade, também na hemodiálise, o estresse oxidativo aumentou devido aos tratamentos de membrana de diálise de baixa compatibilidade, que ativa neutrófilos e monócitos (células fagocíticas), e também devido a uma diminuição da capacidade antioxidante em que a atividade superóxido dismutase, glutationa peroxidase e enzimas peroxiredoxina2 é reduzido, além de baixos níveis de antioxidantes não enzimáticos, como vitaminas C, E e A. (Gwozdzinski K et al, 2021) Várias comorbidades em pacientes com ESRD estão relacionadas ao estresse oxidativo caracterizado por altos níveis de pró-oxidantes, como dislipidemia , calcificação vascular, hipertensão, diabetes mellitus (DM) e velhice. (Mondaresi et al, 2015) O estado de desnutrição e a inflamação crônica que acompanham a diálise também desencadeiam a produção de espécies reativas de oxigênio. (handelman et al, 2001) um aumento de 14 vezes nos níveis de ROS é induzido após cada sessão de hemodiálise. (Nguyen e outros, 1985; Chen e outros, 1998; Yang e outros, 2006)

O rim sintetiza as enzimas antioxidantes, incluindo a glutationa peroxidases e sua falha leva à redução dos níveis dessas enzimas e como consequência o aumento dos pró-oxidantes. (Kelly, Rothwell, 2020) A oxidação dos ácidos graxos pelos radicais livres é chamada de peroxidação lipídica e é responsável pelo dano tecidual. (Fatani et al, 2016) O malondialdeído gerado a partir da peroxidação lipídica é um agente nucleofílico que tem a capacidade de atacar e alterar as funções dos aminoácidos e da porção sulfidrila das proteínas. (Slatter et al, 2000) Vários estudos aprovaram que o aumento da taxa de mortalidade em pacientes em hemodiálise estava associado ao estresse oxidativo em relação ao aumento dos níveis de MDA, produto final da oxidação de ácidos graxos insaturados. (Juretic et al, 2001) Antioxidantes são antioxidantes endógenos produzidos pelo organismo (enzimáticos e não enzimáticos) e antioxidantes exógenos presentes em alimentos e suplementos.(Liakopoulos et al, 2019) Vitaminas B, C, D e E, coenzima Q10, L-carnitina, ácido a-lipóico, curcumina, chá verde, flavonoides, polifenóis, ácidos graxos poliinsaturados ômega-3, estatinas, oligoelementos e N-acetil cisteína foram estudados como antioxidantes exógenos para reduzir o estresse oxidativo em pacientes em hemodiálise. (Liakopoulos et al, 2019) Reduzir o estresse oxidativo em pacientes em hemodiálise usando tratamentos antioxidantes pode ser uma abordagem útil para salvar vidas, evitar a luta contra a morte e melhorar sua qualidade de vida19.(Navarro et al,2019) Muitos estudos clínicos presentes em bancos de dados confirmaram a melhora das complicações acompanhadas da diálise em pacientes suplementados com antioxidantes fitoterápicos. (Asgharpour M, Alirezaei A , 2012) Ultimamente, a atenção está aumentando para o efeito antioxidante da rutina.( Moretti E et al, 2012)

Os flavonóides foram recentemente reconhecidos pelo grupo científico como uma classe única de moléculas terapêuticas devido às suas várias propriedades farmacológicas, a rutina, conhecida como vitamina p ou rotosídeo, foi descoberta para muitos dos efeitos farmacológicos.( Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) A rutina é um flavonol, encontrado na flor de maracujá, trigo sarraceno, chá e maçã.( Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) Rutina chamada rotosídeo, quercetina-3-rutinosídeo e soforina é glicosídeo flavonoide ácido.( Kreft S, Knapp M, Kreft I, 1999) A rutina é um fitoquímico com muitas propriedades terapêuticas. (Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) Um antigo ditado uma maçã por dia mantém o médico longe parece estar certo, pois a rutina, encontrada nas maçãs, tem muitas atividades biológicas. (Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) A rutina precisa ser estudada extensivamente para demonstrar um perfil de segurança eficaz em humanos para obter seus benefícios como suplemento terapêutico. (Ganeshpurkar A, Saluja AK, 2017) Verificou-se que a rutina como tratamento produz um impacto considerável na secreção de citocinas. (Gandhi GR et al, 2020) As citocinas são secretadas por células imunes e a inflamação durante doenças de longo prazo causa disfunção de órgãos mediada por citocinas e danos aos tecidos, como diabetes mellitus, câncer e artrite reumatoide. (Gautam R et al, 2006) Os efeitos imunomoduladores e antiinflamatórios da rutina em doenças metabólicas crônicas sustentam a ideia de que a rutina pode ser usada no tratamento desses distúrbios e suas complicações. (Gandhi GR et al, 2020) A glicose no sangue reduziu e o perfil lipídico melhorou com o uso de rutina, também as atividades de ALT, AST e LDL no fígado, soro e alterações cardíacas são evitadas pela rutina, descobriu-se que a rutina tem a capacidade de reduz os níveis hepáticos e cardíacos de TG e aumenta o nível de glicogênio. (Gandhi GR et al, 2020) See More

Surpreendentemente, verificou-se que a estabilidade da oxidação do aganista da rutina é maior do que seu aglicógeno, a quercetina. (Suzuki et al,2005) A rutina é frequentemente utilizada em combinação com a vitamina C porque é essencial para a absorção da vitamina C e como anti-oxidante. (Bus ze Wski et al, 1993) O corpo humano não pode sintetizar flavonóides e a dieta pode fornecer rutina, e a rutina não serve apenas para prolongar a vida útil dos produtos, mas também aumenta o valor nutricional dos produtos. (Chua LS, 2013) Além das toxinas, a hemodiálise remove nutrientes do sangue, como o ácido ascórbico (AA) e também os pacientes em hemodiálise são deficientes em ácido ascórbico devido a restrições alimentares e isso desencadeia o estresse oxidativo e a inflamação já induzida pela uremia terminando com eventos cardiovasculares e mortalidade. (Chaghouri P et al, 2021) ROS reduzidos por AA, particularmente radical ânion superóxido, e por sua vez oxidado por ácido ascórbico. (Bendich A et al, 1986) O ácido AA reage competitivamente com ROS, eliminando-os antes de oxidarem os componentes celulares, e o AA é oxidado, protegendo membranas lipídicas, proteínas e DNA de danos. (Berratta M et al, 2020) Nos leucócitos, as concentrações de ácido ascórbico atingem 50 a 100 vezes mais do que no plasma. (Berratta M et al, 2020) Não há estudos realizados sobre o efeito da rutina como antioxidante no estresse oxidativo em pacientes em hemodiálise.

Em relação à eficiência antioxidante e anti-inflamatória do AA, é essencial observar o efeito da vitamina C em pacientes em hemodiálise. (Chaghouri P et al, 2021) Baseando-se no efeito antioxidante e anti-inflamatório de ambos, a rutina e a vitamina c, confirmadas por uma variedade de estudos in vitro e in vivo, são selecionadas para serem estudadas em pacientes em hemodiálise.

Objetivo do estudo O objetivo deste estudo é avaliar o efeito da rutina e da vitamina C sobre o estresse oxidativo selecionado e marcadores inflamatórios.

Paciente e métodos

1. Projeto:

   Será conduzido um ensaio clínico prospectivo, intervencional, aberto, randomizado e controlado em pacientes adultos com doença renal terminal em hemodiálise regular.

2. Configurações:

O estudo será realizado na unidade de nefrologia e diálise do hospital universitário ain shams

Um total de 105 pacientes serão recrutados e divididos em 3 grupos: - Grupo 1: (grupo Ruta C) 35 pacientes tomarão uma dose de 2 comprimidos de rutina 60 mg em combinação com vitamina C 160 mg três vezes ao dia por 4 meses em além de sua terapia padrão.

Grupo 2: (Grupo Vitamina C) 35 pacientes tomarão uma dose de 500 mg de vitamina C duas vezes ao dia durante 4 meses, além de sua terapia padrão.

Grupo 3: Grupo controle, 35 pacientes receberão apenas a terapia padrão.

Características da linha de base: Os seguintes dados serão coletados de todos os pacientes na linha de base

1. Idade, sexo, peso, duração da doença renal terminal e comorbidades hemodialíticas.
2. Duração da diálise, BUN, Cr (mg/d L), Albumina (mg/d L), Hb (g m%), teste de função renal, teste de função hepática, nível de glicose no sangue, TG, nível de colesterol total, LDL-C, HLD -C.

Parâmetros de monitoramento:

1. Os pacientes serão monitorados quanto a efeitos colaterais.
2. amostra de sangue será retirada no início e no final do estudo de todos os grupos, então os soros serão centrifugados a 3000 rpm, por 10 minutos a 4°c, e então mantidos congelados a -80 C para a avaliação bioquímica malondialdeído plasmático, Proteína C-Reativa, GSH-PX, TNF-α e ESR. Esta análise será realizada pela técnica de ensaio imunoenzimático (ELISA)

Consideração ética:

• O estudo será realizado de acordo com a Declaração de Helsinque.
• Aprovação do comitê de ética em pesquisa da faculdade de farmácia - universidade de Ain-Shams - comitê de ética em pesquisa da faculdade de farmácia conselho de revisão institucional.
• Um consentimento informado será obtido de todos os pacientes antes da inscrição no estudo, sem qualquer obrigatoriedade de os pacientes se retirarem do estudo se assim o desejarem.

Análise estatística:

As análises estatísticas serão realizadas no software SPSS (Statistical Package for the Social Sciences). Variáveis ​​contínuas serão representadas como média + desvio padrão (DP) ou como mediana + intervalo interquartílico (IQR). Os testes estatísticos serão escolhidos com base nos dados resultantes serão paramétricos ou não paramétricos. Valores de P menores que 0,05 são considerados estatisticamente significativos e valores de P menores que 0,001 são considerados altamente significativos.

Cálculo do tamanho da amostra:

O tamanho da amostra foi calculado por GPower v.3.1.9.4 1. Segundo Connelly (2008), a literatura sugere que uma amostra de estudo piloto deveria ser de 10% da amostra 3 grupos de tamanho igual e um alfa de 0,05, o tamanho da amostra seria de 966 participantes. Para nosso estudo piloto, o tamanho amostral necessário seria de 97 participantes. Levar em conta as desistências e projetar para o estudo maior dos pais 2.

Portanto, para um estudo em escala real, esperando um tamanho de efeito pequeno de 0,10, para atingir um poder de 80% para rejeitar a hipótese nula, com igualdade de tamanhos de grupo, decidimos recrutar um total de 105 participantes, igualmente divididos entre os 3 grupos (35 participantes em cada grupo).

Testes F - ANOVA: Efeitos fixos, omnibus, análise unidirecional: A priori: Calcular o tamanho da amostra necessário Entrada: Tamanho do efeito f = 0,10 α err prob = 0,05 Potência (1-β err prob) = 0,80 Número de grupos = 3 Saída : Parâmetro de não centralidade λ = 9,6900000 Crítico F = 3,0050418 Numerador df = 2 Denominador df = 966 Tamanho total da amostra = 969 Potência real = 0,8011010