唾液は子供の口腔健康を監視するための新しい生体液となり得るか?

唾液診断は、唾液プロテオームや迅速な分析のためのコンパクトなポイントオブケア装置の開発など、いくつかの重要な開発を通じて進歩した新興分野です。 実際、同定される唾液マーカーの数は増えています。また、がん、心血管疾患、自己免疫疾患、ウイルス性疾患、細菌性疾患、ヒトの免疫不全と関連しているものもあります。 唾液は、特殊な機器を必要とせず、簡単、非侵襲的、迅速に採取できるため、頻繁に研究されています。 さらに、唾液という膨大な量の液体源は、体循環に見られる分子のほとんどではないにしても、多くを供給しており、診断にとって貴重な生体液体となる可能性があります。

口腔疾患および全身疾患に関連する数種類の炎症性バイオマーカーが唾液から検出されています。 サイトカインは、この文脈で最も研究されているバイオマーカーの 1 つです。 サイトカインは炎症性疾患、感染症、免疫疾患に関与しているため、歯周病や保菌などの局所的な口腔病変のマーカーとして機能する可能性があります。 実際、成人の場合、そのような疾患は、インターロイキン（IL）-1b、-6、-8、-10）、腫瘍壊死因子-α（TNF-α）、マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）などの唾液バイオマーカーによって検出できることが証拠によって示されています。 ）成人では-8および-9。 さらに、歯肉炎などの口腔病理の病因には、連鎖球菌、フソバクテリウム、放線菌、ベイロネラ、トレポネーマ、カプノサイトファーガ、エイケネラなどの細菌感染症が含まれるため、細菌量の測定に唾液を使用することもできます。

齲蝕は世界中で最も一般的な小児疾患の 1 つであり、歯の表面での多微生物の定着に関連しています。 ミュータンス群の連鎖球菌や乳酸桿菌などの酸産生菌と酸性菌の両方が、虫歯の主な病原体です。 乳酸菌とミュータンス菌は、ほとんどが唾液中に一緒に存在します。 唾液中の微生物の多様性は、虫歯が活動状態にあるときに増加することが示されています。 空洞化した虫歯病変のある小児では、サイトカイン IL-6 および IL-8 の濃度の変化が報告されています。

この研究の目的は、健康な子供の唾液の炎症性および微生物学的プロファイルを特徴付け、それらのレベルを虫歯および歯肉疾患の臨床診断と関連付けることでした。

材料と方法 研究対象集団 研究対象集団は、2008 年から 2016 年の間に生まれた（研究時の年齢 4 ～ 12 歳）100 人の参加者で構成されました。

臨床口腔検査

歯科検査は、歯科用ミラー、歯科用エクスプローラー、歯科用プローブを使用して 2 人の歯科学生によって行われ、以下のパラメータが含まれていました。

• 口腔衛生 - 前述のとおり、頬側表面のみのプラークインデックス (PI) によって測定されます 18。
• 歯周状態 - 前述のように、歯肉指数 (GI) によって測定されます。
• 永久歯列/乳歯列の DMFT/dmft インデックス (D=虫歯、M=欠損、F=充填、歯当たりの T) によって測定されるう蝕の状態。 すべての値が収集され、データ テーブルに記録されました。

唾液採取 唾液は静かな部屋で08:00から12:30まで採取されました。 子どもたちは口の中で唾液を集め、それを幅の広い試験管に3分間吐き出すように指示されました。 唾液は直ちに 4℃で保存され、さらに分析まで -80℃で保存されました。 データは紙の海図に収集され、コンピュータープログラムに転送されました。

細菌検査 DNA 抽出キット (Qiagen) を使用して唾液から細菌 DNA を抽出しました。 次に、全細菌に対する特異的プライマー、Strep を使用して DNA をテストしました。 定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を使用したミュータンス菌、ラクトバチルス菌、およびフソバクテリウム・ヌクレアタム。

唾液サイトカインの定量 ヒト TNF-α、IL-10、IL-8、および IL-6 の唾液レベルを、メーカーの指示に従って ELISA キットを使用して測定しました (R&D Systems、ミネアポリス、ミネソタ州、米国)。 唾液サンプルは分析のためにハダッサ・アイン・ケレム病院の歯周病検査室に移されました。 ELISA 法は、96 ウェル プレートに配置された炭酸サイトカイン特異的モノクローナル抗体によって機能します。 83μLの唾液を10mlの抗体捕捉PBSで希釈した後、活性溶液を抗体とともにウェルに置き、室温で一晩覆います。 続いて、μL 400で洗浄（緩衝液洗浄）し、このステップを3回繰り返します。 次に、300 希釈試薬 µL を室温で 1 時間加えてウェルをブロックし、上記のように再度洗浄します。 100 μL に希釈し、カバーをして室温で 2 時間インキュベートします。 次に、再度すすぎ、166 μL の濃度で 10 ml に検出抗体を加え、カバーをして 2 時間インキュベートします。 次に、ビオチン関連抗体、続いて HRP-ストレプトアビジン複合体、および基質として TMB を追加します。 反応は酸硫酸により停止され、650nm-OD490 を使用して定量されます。

統計分析 すべての実験は 3 回繰り返して実行されました。 データは、年齢、DMF、PI、GIに従って階層化されました。 歯の年齢に応じて 3 つの年齢グループが設定されました。乳歯列 - 0 ～ 6 歳。混合歯列 - 年齢 6 ～ 11 歳。永久歯列 - 11歳以上。 DMFT は 2 つ以上と 2 つ以上で階層化されました。 PI は 1 以下と 1 以上で階層化されました。 GI は、ゼロに等しいかゼロより大きいかによって階層化されました。 データは統計ソフトウェア パッケージ (SigmaStat、Jandel Scientific、サン ラファエル、カリフォルニア州、米国) を使用して分析されました。 一元配置反復測定分散分析 (RM ANOVA) を適用して、治療群間の差異の有意性を検定しました。 有意な結果が見つかった場合は、スチューデントの t 検定と多重検定のボンフェローニ補正を使用して、グループ間の差異の有意性を検定しました。 統計的有意性は p<0.05 に設定されました。