La salive peut-elle être le nouveau biofluide pour surveiller la santé bucco-dentaire des enfants ?

Le diagnostic salivaire est un domaine émergent qui a progressé grâce à plusieurs développements importants, notamment le protéome salivaire et le développement de dispositifs compacts au point de service pour une analyse rapide. En effet, un nombre croissant de marqueurs salivaires ont été identifiés ; et certains ont été associés au cancer, aux maladies cardiovasculaires, aux maladies auto-immunes, aux maladies virales et bactériennes et à l'immunodéficience humaine. La salive est fréquemment étudiée en raison de la collecte facile, non invasive et rapidement obtenue, sans avoir besoin d'équipement spécialisé. De plus, la prodigieuse source fluide de la salive fournit un grand nombre, sinon la plupart, des molécules présentes dans la circulation systémique, ce qui en fait un biofluide potentiellement précieux pour les diagnostics.

Plusieurs types de biomarqueurs inflammatoires associés aux maladies bucco-dentaires, ainsi qu'aux maladies systémiques, ont été détectés dans la salive. Les cytokines sont parmi les biomarqueurs les plus étudiés dans ce contexte. Du fait de leur implication dans les maladies inflammatoires, infectieuses et immunologiques, les cytokines peuvent servir de marqueurs de pathologies buccales locales telles que les maladies parodontales et les caries. En effet, chez les adultes, les preuves montrent que cette maladie peut être détectée par des biomarqueurs salivaires tels que les interleukines (IL)-1b, -6, -8 et -10), le facteur de nécrose tumorale-α (TNF-α) et les métalloprotéinases matricielles (MMP )-8 et -9 chez l'adulte. De plus, comme certaines étiologies de pathologie buccale telles que la gingivite comprennent des infections bactériennes telles que Streptococcus, Fusobacterium, Actinomyces, Veillonella, Treponema, Capnocytophaga et Eikenella, la salive peut également être utilisée pour mesurer la charge bactérienne.

La carie dentaire est l'une des maladies infantiles les plus courantes dans le monde et est associée à une colonisation polymicrobienne sur les surfaces dentaires. Les bactéries acidogènes et aciduriques, telles que le groupe Mutans des streptocoques et des lactobacilles, sont les principaux agents étiologiques des caries dentaires. Les lactobacilles et S. Mutans se trouvent principalement ensemble dans la salive. Il a été démontré que la diversité des microbes dans la salive augmente dans l'état actif de la carie. Chez les enfants présentant des lésions carieuses cavitaires, des concentrations modifiées des cytokines IL-6 et IL-8 ont été signalées.

L'objectif de cette étude était de caractériser le profil inflammatoire et microbiologique de la salive d'enfants sains, et d'associer ces niveaux au diagnostic clinique des caries et des maladies gingivales.

Matériels et méthodes Population étudiée La population étudiée comprenait 100 participants, nés entre 2008 et 2016 (âgés de 4 à 12 ans au moment de l'étude).

Examen oral clinique

Les examens dentaires ont été effectués par deux étudiants en médecine dentaire à l'aide d'un miroir dentaire, d'un explorateur dentaire et d'une sonde dentaire, et comprenaient les paramètres suivants :

• Hygiène buccale - mesurée par l'indice de plaque (PI), comme décrit précédemment,18 uniquement sur les surfaces buccales.
• État parodontal - mesuré par l'indice gingival (IG), comme décrit précédemment
• Statut carieux mesuré par l'indice DMFT/dmft (D=carie, M=manquant, F=obturation ; T par dent) en dentition permanente/primaire . Toutes les valeurs ont été recueillies et enregistrées dans un tableau de données.

Collecte de salive La salive a été recueillie dans une pièce calme entre 08h00 et 12h30. On a demandé aux enfants de recueillir la salive dans leur bouche et de la cracher dans un tube à essai large pendant 3 min. La salive a été immédiatement stockée à 4°C et ensuite conservée à -80°C jusqu'à l'analyse. Les données ont été recueillies sur des cartes papier, qui ont été transférées vers un programme informatique.

Analyse des bactéries L'ADN bactérien a été extrait de la salive à l'aide du kit d'extraction d'ADN (Qiagen). L'ADN a ensuite été testé à l'aide d'amorces spécifiques aux bactéries totales : Strep. Mutans, Lactobacillus et Fusobacterium nucleatum utilisant la réaction quantitative en chaîne par polymérase en temps réel.

Quantification des cytokines salivaires Les niveaux salivaires de TNF-α, IL-10, IL-8 et IL-6 humains ont été mesurés à l'aide de kits ELISA conformément aux instructions du fabricant (R&D systems, Minneapolis, MN, US). Les échantillons de salive ont été transférés au laboratoire de parodontie de l'hôpital Hadassah Ein Kerem pour analyse. La méthode ELISA fonctionne par un anticorps monoclonal spécifique du carbonate de cytokine placé dans une plaque de 96 puits. Après dilution de µL 83 de salive dans 10 ml de PBS de capture d'anticorps, la solution active est placée avec l'anticorps dans le puits, et recouverte pendant une nuit à température ambiante. Par la suite, nous lavons avec µL 400 (lavage tampon) et répétons cette étape trois fois. Nous bloquons ensuite les puits en ajoutant du réactif diluant µL 300 pendant une heure à température ambiante, et lavons à nouveau comme décrit ci-dessus. Nous diluons à 100 µL, couvrons et incubons pendant 2 heures à température ambiante. Nous rinçons ensuite à nouveau et ajoutons un anticorps de détection à une concentration de 166 µL à 10 ml, couvrons et incubons pendant 2 heures. Ensuite, nous ajoutons un anticorps lié à la biotine, suivi d'un conjugué HRP-streptavidine et de TMB comme substrat. La réaction est arrêtée par l'acide sulfurique et quantifiée à l'aide de 650nm-OD490.

Analyse statistique Toutes les expériences ont été réalisées en triple. Les données ont été stratifiées selon l'âge, le DMF, le PI et le GI. Trois groupes d'âge ont été définis en fonction de l'âge dentaire : dentition primaire - âges 0-6 ans ; dentition mixte - 6-11 ans; et dentition permanente - à partir de 11 ans. DMFT a été stratifié par ≤2 et >2. L'IP a été stratifié par ≤1 et >1. L'IG a été stratifié par égal à zéro par rapport au-dessus de zéro. Les données ont été analysées à l'aide d'un progiciel statistique (SigmaStat, Jandel Scientific, San Rafael, CA, USA). Une analyse de variance à mesure répétée unidirectionnelle (RM ANOVA) a été appliquée pour tester la signification des différences entre les groupes traités. Lorsque des résultats significatifs ont été trouvés, les différences intergroupes ont été testées pour leur signification à l'aide du test t de Student et de la correction de Bonferroni pour les tests multiples. La signification statistique a été fixée à p<0,05.