Может ли слюна стать новой биожидкостью для контроля состояния полости рта у детей?

Диагностика слюны — это новая область, которая претерпела ряд важных изменений, включая протеом слюны и разработку компактных устройств для экспресс-анализа. Действительно, было идентифицировано все большее количество слюнных маркеров; а некоторые были связаны с раком, сердечно-сосудистыми заболеваниями, аутоиммунными заболеваниями, вирусными и бактериальными заболеваниями и иммунодефицитом человека. Слюну часто изучают благодаря легкому, неинвазивному и быстрому сбору, не требующему специального оборудования. Более того, огромный источник жидкости — слюна — обеспечивает многие, если не большинство молекул, обнаруженных в большом круге кровообращения, что делает ее потенциально ценной биологической жидкостью для диагностики.

В слюне обнаружено несколько типов воспалительных биомаркеров, связанных с заболеваниями полости рта, а также с системными заболеваниями. Цитокины являются одними из наиболее изученных биомаркеров в этом контексте. В связи с их участием в воспалительных, инфекционных и иммунологических заболеваниях цитокины могут служить маркерами местных оральных патологий, таких как пародонтоз и носительство. Действительно, данные показывают, что у взрослых такое заболевание можно обнаружить с помощью биомаркеров слюны, таких как интерлейкины (IL)-1b, -6, -8 и -10), фактор некроза опухоли-α (TNF-α) и матриксные металлопротеиназы (MMP). )-8 и -9 у взрослых. Кроме того, поскольку некоторые этиологии патологии полости рта, такие как гингивит, включают бактериальные инфекции, такие как Streptococcus, Fusobacterium, Actinomyces, Veillonella, Treponema, Capnocytophaga и Eikenella, слюна также может использоваться для измерения бактериальной нагрузки.

Кариес зубов является одним из наиболее распространенных детских заболеваний во всем мире и связан с полимикробной колонизацией поверхности зубов. Как ацидогенные, так и ацидурические бактерии, такие как группа Mutans Streptococci и Lactobacilli, являются основными этиологическими агентами кариеса зубов. Lactobacilli и S. Mutans чаще всего встречаются вместе в слюне. Показано, что разнообразие микробов в слюне увеличивается при активном статусе кариеса. У детей с кавитированными кариозными поражениями сообщалось об изменении концентрации цитокинов ИЛ-6 и ИЛ-8.

Цель этого исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать воспалительный и микробиологический профиль слюны здоровых детей и связать эти уровни с клиническим диагнозом кариеса и заболеваний десен.

Материалы и методы. Исследуемая популяция. Исследуемую популяцию составили 100 человек, родившихся в 2008-2016 гг. (возраст 4-12 лет на момент исследования).

Клинический осмотр полости рта

Стоматологические осмотры проводились двумя студентами-стоматологами с использованием стоматологического зеркала, стоматологического зонда и стоматологического зонда и включали следующие параметры:

• Гигиена полости рта - измеряется индексом зубного налета (PI), как описано ранее,18 только на щечных поверхностях.
• Состояние пародонта - измеряется по десневому индексу (GI), как описано ранее.
• Состояние кариеса измеряется индексом DMFT/dmft (D = кариес, M = отсутствие, F = пломба; T на зуб) в постоянном/молочном прикусе. Все значения были собраны и записаны в таблицу данных.

Сбор слюны Слюну собирали в тихой комнате между 08:00 и 12:30. Детей просили набрать слюну в рот и сплюнуть ее в широкую пробирку в течение 3 мин. Слюну немедленно хранили при 4°С и далее хранили при -80°С до анализа. Данные записывались на бумажные карты, которые переносились в компьютерную программу.

Тестирование бактерий Бактериальную ДНК экстрагировали из слюны с использованием набора для выделения ДНК (Qiagen). Затем ДНК тестировали с использованием специфических праймеров для всех бактерий: Strep. Mutans, Lactobacillus и Fusobacterium nucleatum с использованием количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени.

Количественное определение цитокинов в слюне Уровни человеческого TNF-α, IL-10, IL-8 и IL-6 в слюне измеряли с использованием наборов ELISA в соответствии с инструкциями производителя (R&D systems, Миннеаполис, Миннесота, США). Образцы слюны были переданы в пародонтологическую лабораторию больницы «Хадасса Эйн Керем» для анализа. Метод ELISA работает с цитокин-карбонат-специфическим моноклональным антителом, помещенным в 96-луночный планшет. После разбавления 83 мкл слюны до 10 мл PBS захвата антител активный раствор помещают с антителом в лунку и оставляют на ночь при комнатной температуре. Впоследствии мы промываем мкл 400 (буферная промывка) и повторяем этот шаг три раза. Затем мы блокируем лунки, добавляя 300 мкл реагента для разбавления на один час при комнатной температуре, и снова промываем, как описано выше. Разбавляем до 100 мкл, накрываем и инкубируем 2 часа при комнатной температуре. Затем снова промывают и добавляют детектирующие антитела в концентрации 166 мкл к 10 мл, накрывают крышкой и инкубируют в течение 2 часов. Затем мы добавляем родственное биотину антитело, затем конъюгат HRP-стрептавидин и ТМБ в качестве субстрата. Реакцию останавливают серной кислотой и определяют количественно с использованием 650 нм-OD490.

Статистический анализ Все эксперименты были выполнены в трех повторностях. Данные были стратифицированы в соответствии с возрастом, DMF, PI и GI. По зубному возрасту были выделены три возрастные группы: молочные зубы - возраст 0-6 лет; смешанный прикус - возраст 6-11 лет; и постоянных зубов - старше 11 лет. DMFT был стратифицирован по ≤2 и >2. PI был стратифицирован по ≤1 и >1. ГИ был стратифицирован как равный нулю и выше нуля. Данные анализировали с использованием пакета статистического программного обеспечения (SigmaStat, Jandel Scientific, Сан-Рафаэль, Калифорния, США). Однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями (RM ANOVA) применяли для проверки значимости различий между обработанными группами. Когда были обнаружены значимые результаты, межгрупповые различия были проверены на значимость с использованием t-критерия Стьюдента и поправки Бонферрони для множественного тестирования. Статистическая значимость была установлена ​​на уровне p<0,05.