全身性エリテマトーデスおよび関節リウマチにおけるB枯渇治療に対する反応のバイオマーカーとしてのBAFF-var (PREDICT)

バックグラウンド

全身性エリテマトーデス (SLE) および関節リウマチ (RA) は、自己抗体の過剰産生を伴う体液性免疫応答の異常な活性化が極めて重要な役割を果たしている複雑な病因を特徴とする多系統免疫介在性疾患です。

B リンパ球刺激因子 (BAFF) は、主に単球と好中球によって産生されるサイトカインおよび薬物標的です。 B細胞の活性化、分化、生存に不可欠です。 BAFF の過剰発現は、SLE のより深刻なパターンと関連し、抗 Sm (OR 1.7; 95% CI 1.3、2.2)、高力価抗 dsDNA (OR 1.5; 95% CI 1.1、 2.2)、低い C3 (OR 1.3; 95% CI 1.0, 1.8)、より高いタンパク尿 (OR 1.8; 95% CI 1.4, 2.4)、および再発リスクの増加 (HR 1.86; 95% CI 1.29, 2.68)。 同様に、高レベルのBAFFがRA患者の血液および滑液で観察されており、RAのより高い疾患活動性と相関することが実証されています。

ベリムマブとリツキシマブは、それぞれ SLE と RA に対して現在承認されている B 細胞標的療法の原型です。

BAFF に対する完全ヒト化モノクローナル抗体であるベリムマブは、SLE における標準的な免疫抑制剤との併用が認可され、承認された最初の生物製剤です。 RCT からのデータは、より高い疾患活動性、抗 dsDNA 陽性、低補体およびコルチコステロイド治療がベリムマブのより高い利益を予測できることを示しました。 しかし、被験者の約 40% は十分な反応を示しませんでした。

リツキシマブ (RTX) は、B リンパ球の表面にある CD20 受容体を選択的に阻害するキメラモノクローナル抗体です。 RTX の使用は、好ましくはメトトレキサートと組み合わせて、従来の免疫抑制剤による治療に反応しない RA 患者に適応となります。 自己抗体が陽性の患者ではより大きな有効性が記録されましたが（例： リウマチ因子および抗シトルリン化ペプチド)、この場合も約 30 ～ 40% の患者が不十分な反応を示します。

BAFF (BAFF-var) をコードする TNFSF13B 遺伝子のバリアントで、特にサルデーニャ (対立遺伝子頻度、26.5%) で一般的であり、南部 (イタリアで 5.7%、スペインとポルトガルで 5.0%) および北ヨーロッパ (1.8%) では次第に一般的ではなくなります。英国とスウェーデンでは)、SLE や RA などの自己免疫疾患と関連していました。 原因となる変異体は、挿入-欠失変異体として同定され、マイクロRNA阻害を回避し、可溶性BAFFの産生を増加させ、体液性免疫をアップレギュレートする短い転写産物を生成しました。 特に、BAFF-var は、可溶性 BAFF (効果量 0.77 標準偏差 (SD); P= 8.47 x10-150)、IgG (0.31 SD、p=1.68x10-12)、 IgA (0.31 SD、p=7.64x10-9)、 IgM (0.31 SD、p=4.70x10-8)、総 B 細胞数の増加 (0.18 SD、P=4.23x10-12)、および CD24+CD27+ (非スイッチメモリとスイッチメモリを含む) を含むいくつかのサブタイプ) (0.22 SD、P=2.94x​​10-10) を強く関連付けます。 さらに、トランスクリプトーム データは、BAFF-var が TNFSF13B 発現を増加させる発現量的形質遺伝子座であることを示しました (P = 2.37×10-13)。 ただし、mRNA レベルの上昇は、タンパク質に対する影響の 24 ～ 27% しか説明できず、翻訳レベルの上昇もおそらく関与していることを示しています。 これに関して、データは、BAFF-var が、miR-15a6 などのマイクロ RNA による阻害の少ない短い転写産物の産生を促進することにより、可溶性 BAFF レベルを上昇させることを示しています。

ＢＡＦＦ阻害によって誘導される免疫学的、分子的および臨床的修飾におけるＢＡＦＦ−ｖａｒの有効な影響を知ることは、ＳＬＥおよびＲＡ患者における個別化医療の見通しにおいて極めて重要である。

目的

• 主な目的: それぞれ SLE および RA 患者の治療におけるベリムマブまたはリツキシマブに対する応答の予後バイオマーカーとしての BAFF-var の潜在的な役割の免疫学的基盤を調査すること。 より詳細には、この研究の目的は、BAFF-var キャリアの状態が、(a) 可溶性 BAFF (BAFFs) サイトカイン、(b) mRNA-BAFF (c ) miRNA-15a (d) B細胞亜集団。
• 副次的な目的: さまざまなアウトカム指標によって評価されるように、ベリムマブまたはリツキシマブに対する臨床反応率に対する BAFF-var の効果を調べること。

研究デザインと方法論

• 研究デザイン：提案されたプロジェクトは観察的縦断研究です
• 人口：抗BAFF剤による治療を開始した後のBAFF-varの分布と、免疫学的、分子的、および臨床的変数の変更は、SLEおよびRA患者の実際の単一中心のサルデーニャコホートで分析されます。 この点で、サルデーニャ人は、BAFF-var の頻度が高いため、この種の分析に最も適した集団を表しています。実際、患者の 50 ～ 60% で BAFF-var キャリアの状態が予想されます。 約 30 の連続した SLE および 30 の連続した RA の特許が、カリアリの大学および大学クリニックの医科学および公衆衛生部門のリウマチ科に紹介されます。
• データ収集: 人口統計 (例: 性別、登録時年齢、発症年齢および診断）、臨床（例： 累積的および活動的な疾患の徴候、臨床測定）、血清学的（例： 抗ｄｓＤＮＡ、Ｃ３およびＣ４、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＲＦ、ＡＣＰＡを含む自己抗体および治療（例えば、過去および現在の治療）が収集される。
• BAFF ジェノタイピング: BAFF ジェノタイピングでは、登録時に全血サンプルを EDTA で採取します。 gDNA は、標準プロトコルに従って塩析法によって抽出されます。 目的のBAFFバリアントの遺伝子型を特定するために特別に設計されたCustoms TaqManアッセイ(Thermo Fisher Scientific)を、すべてのサンプルで対立遺伝子特異的リアルタイムPCRで使用します。
• B細胞表現型：フローサイトメトリーを使用して、登録された30人のSLE患者のB細胞亜集団をプロファイリングします。 B 細胞 (CD45+CD19+) の数、B トランジショナル (CD24+CD38+)、抗体分泌 (ASC、CD27+CD38+)、B メモリー スイッチ (CD27+IgD-)、B メモリーの絶対数と相対数スイッチされていない (CD27+IgD+)、B ナイーブ (IgD+CD27-CD24-) および B 調節 (CD24+CD27+) 細胞は、BD TruCountTM (Becton Dickinson) を使用した Lyse-No-Wash プロトコルによって評価されます。
• 可溶性BAFF：酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）によって測定されます
• 遺伝子発現研究：mRNA は Trizol Reagent によって全血から抽出され、mRNA-BAFF および miRNA-15a の定量分析は、cDNA の逆転写後、特定の TaqMan プローブを使用したリアルタイム PCR によって実行されます。
• 統計分析。 SPSS®統計ソフトウェアを使用して統計分析を行います。 sBAFF、mRNA-BAFF、miRNA-15a、および BAFF-var + と BAFF-var - 患者間の sBAFF、mRNA-BAFF、miRNA-15a、および異なる B 細胞表現型の平均レベルの比較は、必要に応じて、T-スチューデント検定またはマンホイットニー検定によって行われます。 sBAFF、mRNA-BAFF、miRNA-15a、および B 細胞亜集団のレベルの平均差の比較は、BAFF-var + と BAFF-var - 異なる来院間隔での患者が、T-Student 検定または Mann Whitney 検定によって実行されます。 、適切な場合。 上記の免疫学的変数および分子変数のレベルの変更に対するBAFF-varの効果は、独立変数、併用治療、およびベースライン疾患の特徴として、重回帰によってさらに評価されます。 ＢＡＦＦ−ｖａｒ ＋およびＢＡＦＦ−ｖａｒ−患者において、フィッシャーの直接確率検定およびロジスティック回帰分析を実施して、異なる有効性尺度によって評価される応答率を比較する。