BAFF-var als een biomarker van respons op B-depletieve behandeling bij systemische lupus erythematosus en reumatoïde artritis (PREDICT)

ACHTERGROND

Systemische lupus erythematosus (SLE) en reumatoïde artritis (RA) zijn multisysteem-immuungemedieerde ziekten die worden gekenmerkt door een complexe pathogenese, waarbij een abnormale activering van de humorale immuunrespons, met overproductie van auto-antilichamen, een cruciale rol blijkt te spelen.

B-lymfocytenstimulator (BAFF) is een cytokine- en medicijndoelwit dat voornamelijk wordt geproduceerd door monocyten en neutrofielen. Het is essentieel voor activering, differentiatie en overleving van B-cellen. Er werd aangetoond dat overexpressie van BAFF verband houdt met een ernstiger patroon van SLE en correleert met frequentere positiviteit voor anti-Sm (OR 1,7; 95% BI 1,3, 2,2), hoge titer anti-dsDNA (OR 1,5; 95% BI 1,1, 2,2), lagere C3 (OR 1,3; 95% BI 1,0, 1,8), hogere proteïnurie (OR 1,8; 95% BI 1,4, 2,4) en verhoogd risico op opvlamming (HR 1,86; 95% BI 1,29, 2,68). Evenzo zijn hoge niveaus van BAFF waargenomen in het bloed en synoviaal vocht van RA-patiënten en er werd aangetoond dat ze correleren met een hogere ziekteactiviteit bij RA.

Belimumab en rituximab zijn de prototypische vorm van op B-cellen gerichte therapieën die momenteel zijn goedgekeurd voor respectievelijk SLE en RA.

Belimumab, een volledig gehumaniseerd monoklonaal antilichaam gericht tegen BAFF, is het eerste biologische geneesmiddel dat is goedgekeurd en goedgekeurd voor gebruik in combinatie met standaard immunosuppressiva bij SLE. Gegevens van RCT's toonden aan dat hogere ziekteactiviteit, anti-dsDNA-positiviteit, laag complement en behandeling met corticosteroïden een groter voordeel van belimumab kunnen voorspellen. Ongeveer 40% van de proefpersonen bereikte echter geen adequate respons.

Rituximab (RTX) is een chimeer monoklonaal antilichaam dat selectief de CD20-receptor op het oppervlak van B-lymfocyten remt. Het gebruik van RTX, bij voorkeur in combinatie met methotrexaat, is geïndiceerd bij patiënten met RA die niet reageren op behandeling met traditionele immunosuppressiva. Hoewel een grotere werkzaamheid werd geregistreerd bij patiënten met positiviteit voor auto-antilichamen (bijv. reumafactor en anti-gecitrullineerd peptide), ook in dit geval reageert ongeveer 30-40% van de patiënten onvoldoende.

Een variant van het TNFSF13B-gen dat codeert voor BAFF (BAFF-var), vooral veel voorkomend op Sardinië (allelfrequentie, 26,5%) en steeds minder vaak voorkomend in het zuiden (5,7% in Italië, 5,0% in Spanje en Portugal) en Noord-Europa (1,8% in het VK en Zweden), werd in verband gebracht met auto-immuunziekten, waaronder SLE en RA. De causale variant werd geïdentificeerd als een insertie-deletievariant, wat een korter transcript opleverde dat ontsnapte aan microRNA-remming en verhoogde productie van oplosbaar BAFF, dat op zijn beurt de humorale immuniteit verhoogde. In het bijzonder werd BAFF-var geassocieerd met een verhoogd niveau van oplosbaar BAFF (effectgrootte 0,77 standaarddeviaties (SD); P= 8,47 x10-150), IgG (0,31 SD, p=1,68x10-12), IgA (0,31 SD, p=7,64x10-9), IgM (0,31 SD, p=4,70x10-8), evenals een groter aantal totale B-cellen (0,18 SD, P=4,23x10-12) en verschillende subtypen, waaronder de CD24+CD27+ (bestaande uit niet-geschakeld en geschakeld geheugen ) (0,22 SD, P=2,94x10-10) als de sterk geassocieerde. Verder toonden transcriptoomgegevens BAFF-var aan als een expressie-kwantitatieve eigenschap-locus die TNFSF13B-expressie verhoogt (P = 2,37 × 10-13). De verhoogde mRNA-niveaus konden echter slechts 24-27% van het effect op eiwit verklaren, wat aangeeft dat er waarschijnlijk ook een toename in translatieniveau bij betrokken was. In dit opzicht geven gegevens aan dat BAFF-var de oplosbare BAFF-niveaus verhoogt door de productie van een korter transcript te bevorderen dat minder wordt geremd door microRNA, zoals miR-15a6.

Het kennen van de effectieve invloed van BAFF-var in de immunologische, moleculaire en klinische modificaties veroorzaakt door BAFF-remming is van cruciaal belang in het vooruitzicht van een gepersonaliseerde geneeskunde bij SLE- en RA-patiënten.

OBJECTEN

• Primaire doelstelling: het onderzoeken van de immunologische basis van een mogelijke rol van BAFF-var als een prognostische biomarker voor respons op belimumab of rituximab bij de behandeling van respectievelijk SLE- en RA-patiënten. Meer in detail heeft de studie tot doel te evalueren of de toestand van de BAFF-var-drager de geneesmiddelgerelateerde modificaties van immunologische en moleculaire variabelen beïnvloedt, zoals: (a) oplosbaar BAFF (BAFF's) cytokine, (b) mRNA-BAFF (c ) miRNA-15a (d) B-cel subpopulaties.
• Secundaire doelstellingen: het onderzoeken van het effect van BAFF-var op de klinische respons op belimumab of rituximab, zoals beoordeeld aan de hand van verschillende uitkomstmaten.

ONDERZOEKSONTWERP EN METHODOLOGIE

• Studieopzet: Het voorgestelde project is een observationele longitudinale studie
• Populatie: Distributie van BAFF-var en wijzigingen op immunologische, moleculaire en klinische variabelen, na het starten van de behandeling met een anti-BAFF-middel, zullen worden geanalyseerd op een real-life monocentrisch Sardijns cohort van SLE- en RA-patiënten. In dit opzicht vertegenwoordigt de Sardiniër de meest geschikte populatie voor dit soort analyses vanwege de hogere frequentie van BAFF-var; inderdaad wordt de toestand van BAFF-var-drager verwacht bij 50-60% van de patiënten. Er zullen ongeveer 30 opeenvolgende SLE- en 30 opeenvolgende RA-patenten worden aangeworven die worden verwezen naar de afdeling Reumatologie van de afdeling Medische Wetenschappen en Volksgezondheid van de universiteit en de universiteitskliniek van Cagliari.
• Gegevensverzameling: Demografisch (bijv. geslacht, leeftijd bij inschrijving, aanvangsleeftijd en diagnose), klinisch (bijv. cumulatieve en actieve ziekteverschijnselen, klinimetrische metingen), serologisch (bijv. auto-antilichamen, waaronder anti-dsDNA, C3 en C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) en therapeutische (bijv. eerdere en huidige therapieën) zullen worden verzameld.
• BAFF-genotypering: Voor BAFF-genotypering worden volbloedmonsters verzameld in EDTA bij de inschrijving. Het gDNA wordt geëxtraheerd door middel van de uitzoutmethode volgens het standaardprotocol. Customs TaqMan-assay (Thermo Fisher Scientific) die speciaal is ontworpen om de BAFF-varianten van interesse te genotyperen, zal worden gebruikt met allelspecifieke real-time PCR in alle monsters.
• B-cel fenotypering: Flowcytometrie zal worden gebruikt om B-cel subpopulaties te profileren in de 30 ingeschreven SLE-patiënten. Het aantal B-cellen (CD45+CD19+), evenals het absolute en relatieve aantal B-overgangscellen (CD24+CD38+), antilichaamafscheiding (ASC, CD27+CD38+), B-geheugengeschakeld (CD27+IgD-), B-geheugen niet-geschakelde (CD27+IgD+), B-naïeve (IgD+CD27-CD24-) en B-regulerende (CD24+CD27+) cellen zullen worden beoordeeld volgens het Lyse-No-Wash-protocol met behulp van BD TruCountTM (Becton Dickinson).
• Oplosbaar BAFF: het wordt gemeten met een enzymgekoppelde immunosorbenttest (ELISA)
• Genexpressiestudie: mRNA zal worden geëxtraheerd uit volbloed door Trizol Reagent en de kwantitatieve analyse van mRNA-BAFF en miRNA-15a zal worden uitgevoerd door middel van real-time PCR met behulp van specifieke TaqMan-probes, na reverse transcriptie in cDNA.
• Statistische analyse. Statistische analyse wordt uitgevoerd met behulp van de SPSS® statistische software. Vergelijking van gemiddelde niveaus van sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a en verschillende B-cel fenotypes tussen BAFF-var + en BAFF-var - patiënten bij elk bezoek zal worden uitgevoerd door middel van T-Student-test of Mann Whitney-test, indien van toepassing. Vergelijking van het gemiddelde verschil in niveaus van sBAFF-, mRNA-BAFF-, miRNA-15a- en B-cel-subpopulaties tussen BAFF-var + en BAFF-var - patiënten bij de verschillende bezoekintervallen zal worden uitgevoerd door middel van de T- Student-test of de Mann Whitney-test , indien gepast. Het effect van BAFF-var op modificatie van de niveaus van de immunologische en moleculaire variabelen hierboven zal verder worden beoordeeld door middel van meervoudige regressie, inclusief als onafhankelijke variabelen, gelijktijdige behandelingen en baseline ziektekenmerken. Fisher's exact test en logistische regressieanalyse zullen worden uitgevoerd om het responspercentage te vergelijken, zoals beoordeeld door verschillende werkzaamheidsmetingen, bij BAFF-var + en BAFF-var - patiënten.