BAFF-var como um biomarcador de resposta ao tratamento depletivo de B no lúpus eritematoso sistêmico e na artrite reumatoide (PREDICT)

FUNDO

O lúpus eritematoso sistêmico (LES) e a artrite reumatóide (AR) são doenças imunomediadas multissistêmicas caracterizadas por uma patogênese complexa, onde uma ativação anormal da resposta imune humoral, com superprodução de autoanticorpos, demonstrou ter um papel fundamental.

O estimulador de linfócitos B (BAFF) é uma citocina e alvo de droga que é produzida principalmente por monócitos e neutrófilos. É essencial para a ativação, diferenciação e sobrevivência das células B. A superexpressão de BAFF demonstrou estar associada a um padrão mais grave de LES e correlacionar-se com positividade mais frequente para anti-Sm (OR 1,7; 95% CI 1,3, 2,2), título alto de anti-dsDNA (OR 1,5; 95% CI 1,1, 2,2), menor C3 (OR 1,3; 95% CI 1,0, 1,8), proteinúria mais alta (OR 1,8; 95% CI 1,4, 2,4) e risco aumentado de surto (HR 1,86; 95% CI 1,29, 2,68). Da mesma forma, altos níveis de BAFF foram observados no sangue e no líquido sinovial de pacientes com AR e demonstraram estar correlacionados com maior atividade da doença na AR.

Belimumabe e rituximabe são a forma prototípica de terapias direcionadas às células B atualmente aprovadas para LES e AR, respectivamente.

Belimumab, um anticorpo monoclonal totalmente humanizado dirigido contra BAFF, é o primeiro medicamento biológico licenciado e aprovado para uso em combinação com imunossupressores padrão no LES. Dados de RCTs demonstraram que maior atividade da doença, positividade anti-dsDNA, baixo complemento e tratamento com corticosteróides podem prever um maior benefício para o belimumabe. No entanto, cerca de 40% dos indivíduos não obtiveram uma resposta adequada.

O rituximabe (RTX) é um anticorpo monoclonal quimérico que inibe seletivamente o receptor CD20 na superfície dos linfócitos B. O uso de RTX, preferencialmente em combinação com metotrexato, está indicado em pacientes com AR não responsivos ao tratamento com imunossupressores tradicionais. Embora maior eficácia tenha sido registrada em pacientes com positividade para autoanticorpos (p. fator reumatóide e peptídeo anti-citrulinado), também neste caso, cerca de 30-40% dos pacientes respondem inadequadamente.

Uma variante do gene TNFSF13B que codifica BAFF (BAFF-var), especialmente comum na Sardenha (frequência alélica, 26,5%) e progressivamente menos comum no sul (5,7% na Itália, 5,0% na Espanha e Portugal) e norte da Europa (1,8% no Reino Unido e na Suécia), foi associada a doenças autoimunes, incluindo LES e AR. A variante causal foi identificada como uma variante de deleção de inserção, produzindo um transcrito mais curto que escapou da inibição do microRNA e aumentou a produção de BAFF solúvel, que por sua vez aumentou a imunidade humoral. Em particular, BAFF-var foi associado ao aumento do nível de BAFF solúvel (tamanho do efeito 0,77 desvios padrão (SD); P= 8,47 x10-150), IgG (0,31 SD, p=1,68x10-12), IgA (0,31 SD, p=7,64x10-9), IgM (0,31 SD, p=4,70x10-8), bem como número aumentado de células B totais (0,18 SD, P=4,23x10-12) e vários subtipos, incluindo o CD24+CD27+ (compreendendo memória não comutada e comutada ) (0,22 DP, P=2,94x10-10) como fortemente associado. Além disso, os dados do transcriptoma demonstraram BAFF-var como um locus de traço quantitativo de expressão que aumenta a expressão de TNFSF13B (P = 2,37 × 10-13). No entanto, os níveis elevados de mRNA poderiam explicar apenas 24-27% do efeito na proteína, indicando que um aumento no nível de tradução provavelmente também estava envolvido. Nesse sentido, dados indicam que o BAFF-var eleva os níveis de BAFF solúvel ao favorecer a produção de um transcrito mais curto e menos inibido pelo microRNA, como o miR-15a6.

Conhecer a influência efetiva do BAFF-var nas modificações imunológicas, moleculares e clínicas induzidas pela inibição do BAFF tem uma importância crucial na perspectiva de uma medicina personalizada em pacientes com LES e AR.

OBJETIVOS

• Objetivo primário: Explorar a base imunológica de um papel potencial de BAFF-var como um biomarcador prognóstico para resposta a belimumabe ou rituximabe no tratamento de pacientes com LES e AR, respectivamente. Mais detalhadamente, o estudo visa avaliar se a condição de portador de BAFF-var influencia as modificações relacionadas à droga de variáveis ​​imunológicas e moleculares, tais como: (a) citocina BAFF solúvel (BAFFs), (b) mRNA-BAFF (c ) miRNA-15a (d) Subpopulações de células B.
• Objetivos secundários: Explorar o efeito de BAFF-var na taxa de resposta clínica ao belimumabe ou rituximabe, conforme avaliado por diferentes medidas de desfecho.

PROJETO DE PESQUISA E METODOLOGIA

• Desenho do estudo: O projeto proposto é um estudo observacional longitudinal
• População: A distribuição de BAFF-var e as modificações nas variáveis ​​imunológicas, moleculares e clínicas, após o início do tratamento com agente anti-BAFF, serão analisadas em uma coorte monocêntrica da vida real da Sardenha de pacientes com LES e AR. A este respeito, a Sardenha representa a população mais adequada para este tipo de análise devido à maior frequência de BAFF-var; de fato, a condição de portador BAFF-var é esperada em 50-60% dos pacientes. Serão recrutados cerca de 30 patentes consecutivas de LES e 30 patentes consecutivas de AR encaminhadas à Unidade de Reumatologia do Departamento de Ciências Médicas e Saúde Pública da Universidade e Clínica Universitária de Cagliari.
• Coleta de dados: Demográfico (por exemplo, sexo, idade de inscrição, idade de início e diagnóstico), clínica (p. manifestações cumulativas e ativas da doença, medidas clinimétricas), serológicas (p. autoanticorpos, incluindo anti-dsDNA, C3 e C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) e terapêuticos (por exemplo, terapias passadas e atuais) serão coletados.
• Genotipagem BAFF: Para genotipagem BAFF, amostras de sangue total serão coletadas em EDTA no momento da inscrição. O gDNA será extraído pelo método salting-out de acordo com o protocolo padrão. O ensaio Customs TaqMan (Thermo Fisher Scientific) projetado especificamente para genotipar as variantes BAFF de interesse será usado com PCR em tempo real específico para alelos em todas as amostras.
• Fenotipagem de células B: A citometria de fluxo será usada para traçar o perfil das subpopulações de células B nos 30 pacientes com LES inscritos. O número de células B (CD45+CD19+), bem como o número absoluto e relativo de transicionais B (CD24+CD38+), secreção de anticorpos (ASC, CD27+CD38+), memória B comutada (CD27+IgD-), memória B Células não comutadas (CD27+IgD+), B virgens (IgD+CD27-CD24-) e B reguladoras (CD24+CD27+) serão avaliadas pelo protocolo Lyse-No-Wash usando BD TruCountTM (Becton Dickinson).
• BAFF solúvel: será medido por ensaio imunoenzimático (ELISA)
• Estudo da expressão gênica: mRNA será extraído do sangue total pelo Trizol Reagent e a análise quantitativa do mRNA-BAFF e miRNA-15a será realizada por Real-Time PCR utilizando sondas TaqMan específicas, após transcrição reversa em cDNA.
• Análise estatística. A análise estatística será realizada por meio do software estatístico SPSS®. A comparação dos níveis médios de sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a e diferentes fenótipos de células B entre pacientes BAFF-var + e BAFF-var - em cada visita será realizada pelo teste T-Student ou teste Mann Whitney, se apropriado. A comparação da diferença média dos níveis de sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a e subpopulações de células B entre pacientes BAFF-var + e BAFF-var - nos diferentes intervalos de visitas será realizada pelo teste T-Student ou teste Mann Whitney , se apropriado. O efeito de BAFF-var na modificação dos níveis das variáveis ​​imunológicas e moleculares acima será ainda avaliado por regressão múltipla, incluindo como variáveis ​​independentes, tratamentos concomitantes e características basais da doença. O teste exato de Fisher e a análise de regressão logística serão realizados para comparar a taxa de resposta, avaliada por diferentes medidas de eficácia, em pacientes BAFF-var + e BAFF-var -.