BAFF-var als Biomarker für das Ansprechen auf eine B-depletive Behandlung bei systemischem Lupus erythematodes und rheumatoider Arthritis (PREDICT)

HINTERGRUND

Systemischer Lupus erythematodes (SLE) und rheumatoide Arthritis (RA) sind immunvermittelte Multisystemerkrankungen, die durch eine komplexe Pathogenese gekennzeichnet sind, bei der eine abnormale Aktivierung der humoralen Immunantwort mit Überproduktion von Autoantikörpern eine zentrale Rolle spielt.

B-Lymphozyten-Stimulator (BAFF) ist ein Zytokin- und Wirkstoffziel, das hauptsächlich von Monozyten und Neutrophilen produziert wird. Es ist essentiell für die Aktivierung, Differenzierung und das Überleben von B-Zellen. Es wurde gezeigt, dass eine Überexpression von BAFF mit einem schwerwiegenderen Muster von SLE assoziiert ist und mit einer häufigeren Positivität für Anti-Sm (OR 1,7; 95 % KI 1,3, 2,2), Anti-dsDNA mit hohem Titer (OR 1,5; 95 % KI 1,1, 2,2), niedrigeres C3 (OR 1,3; 95 % KI 1,0, 1,8), höhere Proteinurie (OR 1,8; 95 % KI 1,4, 2,4) und erhöhtes Schubrisiko (HR 1,86; 95 % KI 1,29, 2,68). In ähnlicher Weise wurden hohe BAFF-Spiegel im Blut und in der Synovialflüssigkeit von RA-Patienten beobachtet, und es wurde gezeigt, dass sie mit einer höheren Krankheitsaktivität bei RA korrelieren.

Belimumab und Rituximab sind die prototypischen Formen von B-Zell-gerichteten Therapien, die derzeit für SLE bzw. RA zugelassen sind.

Belimumab, ein vollständig humanisierter monoklonaler Antikörper gegen BAFF, ist das erste biologische Medikament, das für die Verwendung in Kombination mit Standard-Immunsuppressiva bei SLE zugelassen und zugelassen ist. Daten aus RCTs zeigten, dass eine höhere Krankheitsaktivität, Anti-dsDNA-Positivität, niedriges Komplement und Kortikosteroidbehandlung einen höheren Nutzen von Belimumab vorhersagen können. Allerdings erreichten etwa 40 % der Probanden keine angemessene Reaktion.

Rituximab (RTX) ist ein chimärer monoklonaler Antikörper, der selektiv den CD20-Rezeptor auf der Oberfläche von B-Lymphozyten hemmt. Die Anwendung von RTX, vorzugsweise in Kombination mit Methotrexat, ist bei Patienten mit RA indiziert, die auf eine Behandlung mit herkömmlichen Immunsuppressiva nicht ansprechen. Obwohl eine größere Wirksamkeit bei Patienten mit Positivität für Autoantikörper (z. Rheumafaktor und anti-citrulliniertes Peptid), auch in diesem Fall sprechen etwa 30–40 % der Patienten unzureichend an.

Eine Variante des TNFSF13B-Gens, das für BAFF (BAFF-var) kodiert, besonders häufig auf Sardinien (Allelhäufigkeit 26,5 %) und zunehmend seltener in Süd- (5,7 % in Italien, 5,0 % in Spanien und Portugal) und Nordeuropa (1,8 % in Großbritannien und Schweden) wurde mit Autoimmunerkrankungen, einschließlich SLE und RA, in Verbindung gebracht. Die kausale Variante wurde als Insertions-Deletions-Variante identifiziert, was zu einem kürzeren Transkript führte, das der microRNA-Hemmung und einer erhöhten Produktion von löslichem BAFF entging, was wiederum die humorale Immunität hochregulierte. Insbesondere war BAFF-var mit einem erhöhten Gehalt an löslichem BAFF (Effektgröße 0,77 Standardabweichungen (SD); p = 8,47 x 10-150), IgG (0,31 SD, p = 1,68 x 10-12), IgA (0,31 Standardabweichung, p=7,64 x 10-9), IgM (0,31 SD, p=4,70 x 10-8) sowie eine erhöhte Anzahl an Gesamt-B-Zellen (0,18 SD, p=4,23 x 10-12) und mehrere Subtypen, einschließlich CD24+CD27+ (umfasst ungeschalteten und geschalteten Speicher ) (0,22 SD, P=2,94x10-10) als stark assoziiert. Darüber hinaus zeigten Transkriptomdaten, dass BAFF-var ein quantitativer Expressionsmerkmal-Lokus ist, der die TNFSF13B-Expression erhöht (P = 2,37 × 10 –13 ). Die erhöhten mRNA-Spiegel konnten jedoch nur 24–27 % der Wirkung auf das Protein erklären, was darauf hindeutet, dass wahrscheinlich auch ein Anstieg des Translationsspiegels beteiligt war. Diesbezüglich weisen die Daten darauf hin, dass BAFF-var die löslichen BAFF-Spiegel erhöht, indem es die Produktion eines kürzeren Transkripts begünstigt, das weniger durch Mikro-RNA wie miR-15a6 gehemmt wird.

Die Kenntnis des effektiven Einflusses von BAFF-var auf die durch BAFF-Hemmung induzierten immunologischen, molekularen und klinischen Modifikationen ist von entscheidender Bedeutung für die Perspektive einer personalisierten Medizin bei SLE- und RA-Patienten.

OBJEKTE

• Primäres Ziel: Erforschung der immunologischen Grundlagen einer potenziellen Rolle von BAFF-var als prognostischer Biomarker für das Ansprechen auf Belimumab oder Rituximab bei der Behandlung von SLE- bzw. RA-Patienten. Genauer gesagt zielt die Studie darauf ab, zu bewerten, ob der Zustand des BAFF-var-Trägers die arzneimittelbedingten Modifikationen von immunologischen und molekularen Variablen beeinflusst, wie z ) miRNA-15a (d) B-Zell-Subpopulationen.
• Sekundäre Ziele: Untersuchung der Wirkung von BAFF-var auf die klinische Ansprechrate auf Belimumab oder Rituximab, wie durch verschiedene Ergebnismessungen bewertet.

FORSCHUNGSDESIGN UND METHODIK

• Studiendesign: Das beantragte Projekt ist eine beobachtende Längsschnittstudie
• Population: Die Verteilung von BAFF-var und Änderungen an immunologischen, molekularen und klinischen Variablen nach Beginn der Behandlung mit dem Anti-BAFF-Mittel werden an einer realen monozentrischen sardischen Kohorte von SLE- und RA-Patienten analysiert. In dieser Hinsicht stellt die sardische Population aufgrund der höheren Häufigkeit von BAFF-var die am besten geeignete Population für diese Art von Analyse dar; tatsächlich wird bei 50–60 % der Patienten der Zustand eines BAFF-var-Trägers erwartet. Etwa 30 aufeinanderfolgende SLE- und 30 aufeinanderfolgende RA-Patente, die an die Abteilung für Rheumatologie der Abteilung für medizinische Wissenschaften und öffentliche Gesundheit der Universität und Universitätsklinik von Cagliari verwiesen werden, werden rekrutiert.
• Datenerhebung: Demographisch (z. B. Geschlecht, Alter bei Einschreibung, Erkrankungsalter und Diagnose), Klinik (z. kumulative und aktive Krankheitsmanifestationen, klinometrische Messungen), serologische (z. Autoantikörper, einschließlich Anti-dsDNA, C3 und C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) und therapeutische (z. B. vergangene und aktuelle Therapien) werden gesammelt.
• BAFF-Genotypisierung: Für die BAFF-Genotypisierung werden bei der Einschreibung Vollblutproben in EDTA gesammelt. Die gDNA wird durch das Aussalzverfahren gemäß Standardprotokoll extrahiert. Customs TaqMan Assay (Thermo Fisher Scientific), der speziell für die Genotypisierung der interessierenden BAFF-Varianten entwickelt wurde, wird mit allelspezifischer Echtzeit-PCR in allen Proben verwendet.
• B-Zell-Phänotypisierung: Mittels Durchflusszytometrie wird ein Profil der B-Zell-Subpopulationen bei den 30 eingeschlossenen SLE-Patienten erstellt. Die Anzahl der B-Zellen (CD45+CD19+), sowie die absolute und relative Anzahl der B-Übergänge (CD24+CD38+), Antikörper-sekretierenden (ASC, CD27+CD38+), B-Gedächtnis-geschalteten (CD27+IgD-), B-Gedächtnis Un-Switched (CD27+IgD+), B-naive (IgD+CD27-CD24-) und B-regulatorische (CD24+CD27+) Zellen werden mit dem Lyse-No-Wash-Protokoll unter Verwendung von BD TruCountTM (Becton Dickinson) bewertet.
• Lösliches BAFF: Es wird durch einen enzymgebundenen Immunadsorptionstest (ELISA) gemessen.
• Genexpressionsstudie: mRNA wird mit Trizol-Reagenz aus Vollblut extrahiert und die quantitative Analyse von mRNA-BAFF und miRNA-15a wird durch Real-Time-PCR unter Verwendung spezifischer TaqMan-Sonden nach reverser Transkription in cDNA durchgeführt.
• Statistische Analyse. Die statistische Analyse wird unter Verwendung der Statistiksoftware SPSS® durchgeführt. Der Vergleich der mittleren Werte von sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a und verschiedenen B-Zell-Phänotypen zwischen BAFF-var + - und BAFF-var – -Patienten wird bei jedem Besuch mit dem T-Student-Test oder dem Mann-Whitney-Test durchgeführt, falls angemessen. Der Vergleich der mittleren Differenz der sBAFF-, mRNA-BAFF-, miRNA-15a- und B-Zell-Subpopulationen zwischen BAFF-var + - und BAFF-var – -Patienten in den verschiedenen Besuchsintervallen wird mit dem T-Student-Test oder dem Mann-Whitney-Test durchgeführt , gegebenenfalls. Die Wirkung von BAFF-var auf die Modifikation der Werte der oben genannten immunologischen und molekularen Variablen wird weiter durch multiple Regression bewertet, einschließlich als unabhängige Variablen, Begleitbehandlungen und Grundlinien-Krankheitsmerkmale. Der exakte Fisher-Test und die logistische Regressionsanalyse werden durchgeführt, um die Ansprechrate bei BAFF-var + - und BAFF-var – -Patienten zu vergleichen, die anhand verschiedener Wirksamkeitsmaße bewertet wurde.