BAFF-var systeemisen lupus erythematosuksen ja nivelreuman hoitovasteen biomarkkerina (PREDICT)

TAUSTA

Systeeminen lupus erythematosus (SLE) ja nivelreuma (RA) ovat monisysteeminen immuunivälitteinen sairaus, jolle on tunnusomaista monimutkainen patogeneesi, jossa humoraalisen immuunivasteen epänormaalilla aktivaatiolla ja autovasta-aineiden ylituotannolla on osoitettu olevan keskeinen rooli.

B-lymfosyyttistimulaattori (BAFF) on sytokiini- ja lääkekohde, jota ensisijaisesti tuottavat monosyytit ja neutrofiilit. Se on välttämätön B-solujen aktivaatiolle, erilaistumiselle ja eloonjäämiselle. BAFF:n yli-ilmentymisen osoitettiin liittyvän vakavampaan SLE-malliin ja korreloivan yleisempään anti-Sm-positiivisuuteen (OR 1,7; 95 % CI 1,3, 2,2), korkean titterin anti-dsDNA:lle (OR 1,5; 95 % CI 1,1, 2,2), pienempi C3 (OR 1,3; 95 % CI 1,0, 1,8), korkeampi proteinuria (OR 1,8; 95 % CI 1,4, 2,4) ja lisääntynyt pahenemisriski (HR 1,86; 95 % CI 1,29, 2,68). Vastaavasti korkeita BAFF-tasoja on havaittu RA-potilaiden veressä ja nivelnesteessä, ja niiden on osoitettu korreloivan korkeamman taudin aktiivisuuden kanssa RA:ssa.

Belimumabi ja rituksimabi ovat tällä hetkellä SLE:n ja nivelreuman hoitoon hyväksyttyjen B-soluihin kohdistettujen hoitojen prototyyppisiä muotoja.

Belimumabi, täysin humanisoitu monoklonaalinen vasta-aine BAFF:a vastaan, on ensimmäinen biologinen lääke, joka on lisensoitu ja hyväksytty käytettäväksi yhdessä standardien immunosuppressanttien kanssa SLE:ssä. RCT-tutkimukset osoittivat, että korkeampi sairausaktiivisuus, anti-dsDNA-positiivisuus, alhainen komplementti- ja kortikosteroidihoito voivat ennustaa suuremman hyödyn belimumabista. Noin 40 % koehenkilöistä ei kuitenkaan saavuttanut riittävää vastetta.

Rituksimabi (RTX) on kimeerinen monoklonaalinen vasta-aine, joka estää selektiivisesti CD20-reseptoria B-lymfosyyttien pinnalla. RTX:n käyttö, mieluiten yhdistelmänä metotreksaatin kanssa, on tarkoitettu nivelreumapotilaille, jotka eivät reagoi perinteisten immunosuppressanttien hoitoon. Vaikka suurempi teho havaittiin potilailla, jotka olivat positiivisia autovasta-aineille (esim. reumatekijä ja anti-sitrullinoitu peptidi), myös tässä tapauksessa noin 30-40 % potilaista ei reagoi riittävästi.

BAFF:a (BAFF-var) koodaava TNFSF13B-geenin variantti, joka on erityisen yleinen Sardiniassa (alleelitaajuus, 26,5 %) ja asteittain vähemmän yleinen etelässä (5,7 % Italiassa, 5,0 % Espanjassa ja Portugalissa) ja Pohjois-Euroopassa (1,8 %) Yhdistyneessä kuningaskunnassa ja Ruotsissa), liittyi autoimmuunisairauksiin, mukaan lukien SLE ja RA. Syy-variantti tunnistettiin insertio-deleetiovariantiksi, mikä tuotti lyhyemmän transkriptin, joka välttyi mikroRNA-inhibitiolta ja lisäsi liukoisen BAFF:n tuotantoa, mikä puolestaan ​​nosti humoraalista immuniteettia. Erityisesti BAFF-var liittyi lisääntyneeseen liukoisen BAFF:n tasoon (vaikutuskoko 0,77 standardipoikkeamaa (SD); P = 8,47 x 10-150), IgG (0,31 SD, p = 1,68 x 10-12), IgA (0,31 SD, p = 7,64 x 10-9), IgM (0,31 SD, p = 4,70 x 10-8), sekä lisääntynyt B-solujen kokonaismäärä (0,18 SD, P = 4,23 x 10-12) ja useita alatyyppejä, mukaan lukien CD24+CD27+ (sisältää kytkemättömän ja kytketyn muistin ) (0,22 SD, P = 2,94 x 10-10) vahvasti liittyvänä. Lisäksi transkriptiotiedot osoittivat BAFF-varin ilmentymisen kvantitatiivisena piirteenä, joka lisää TNFSF13B:n ilmentymistä (P = 2,37 × 10-13). Kohonneet mRNA-tasot saattoivat kuitenkin selittää vain 24-27 % vaikutuksesta proteiiniin, mikä osoittaa, että myös translaatiotason nousu oli todennäköisesti mukana. Tässä suhteessa tiedot osoittavat, että BAFF-var nostaa liukoisen BAFF:n tasoja suosimalla lyhyemmän transkriptin tuotantoa, jota mikroRNA vähemmän inhiboi, kuten miR-15a6.

BAFF-varin tehokkaan vaikutuksen tunteminen BAFF-estämisen aiheuttamiin immunologisiin, molekyyli- ja kliinisiin modifikaatioihin on ratkaisevan tärkeää SLE- ja RA-potilaiden yksilöllisen lääkkeen tulevaisuudennäkymien kannalta.

TAVOITTEET

• Ensisijainen tavoite: Tutkia immunologisia perusteita BAFF-varin mahdolliselle roolille belimumabi- tai rituksimabivasteen prognostisena biomarkkerina hoidettaessa SLE- ja nivelreumapotilaita. Yksityiskohtaisemmin tutkimuksessa pyritään arvioimaan, vaikuttaako BAFF-variantin kantajan tila lääkkeeseen liittyviin immunologisten ja molekyylimuuttujien muunnelmiin, kuten: (a) liukoinen BAFF (BAFF) sytokiini, (b) mRNA-BAFF (c) ) miRNA-15a (d) B-solualapopulaatiot.
• Toissijaiset tavoitteet: Selvittää BAFF-var:n vaikutusta kliiniseen vasteen belimumabi- tai rituksimabihoitoon eri mittareilla arvioituna.

TUTKIMUKSEN SUUNNITTELU JA MENETELMÄT

• Tutkimuksen suunnittelu: Ehdotettu hanke on havainnollinen pitkittäistutkimus
• Populaatio: BAFF-muuttujien jakauma ja immunologisten, molekyylien ja kliinisten muuttujien muutokset analysoidaan BAFF-vasta-ainehoidon aloittamisen jälkeen SLE- ja RA-potilaiden todellisessa yksikeskisessä Sardinian kohortissa. Tässä suhteessa Sardinian edustaa sopivinta populaatiota tämän tyyppiseen analyysiin, koska BAFF-var on korkeampi; todellakin BAFF-var-kanttajan tila odotetaan 50-60 %:lla potilaista. Rekrytoidaan noin 30 peräkkäistä SLE- ja 30 peräkkäistä RA-patenttia, jotka on lähetetty Cagliarin yliopiston lääketieteen ja kansanterveyden laitoksen reumatologian yksikköön ja yliopistolliseen klinikkaan.
• Tiedonkeruu: Demografiset tiedot (esim. sukupuoli, ikä ilmoittautumishetkellä, alkamisikä ja diagnoosi), kliininen (esim. kumulatiiviset ja aktiiviset sairauden ilmenemismuodot, klinimetriset mittaukset), serologiset (esim. autovasta-aineet, mukaan lukien anti-dsDNA, C3 ja C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) ja terapeuttiset (esim. menneet ja nykyiset hoidot) kerätään.
• BAFF-genotyypitys: BAFF-genotyypitystä varten kokoverinäytteet kerätään EDTA:ssa ilmoittautumisen yhteydessä. gDNA uutetaan suolausmenetelmällä standardiprotokollan mukaisesti. Customs TaqMan -määritystä (Thermo Fisher Scientific), joka on erityisesti suunniteltu kiinnostavien BAFF-varianttien genotyyppiin, käytetään alleelispesifisen reaaliaikaisen PCR:n kanssa kaikissa näytteissä.
• B-solufenotyypitys: Virtaussytometriaa käytetään B-solualapopulaatioiden profilointiin 30:llä SLE-potilaalla. B-solujen lukumäärä (CD45+CD19+), sekä B-siirtymävaiheen (CD24+CD38+), vasta-aineita erittävän (ASC, CD27+CD38+), B-muistin (CD27+IgD-), B-muistin absoluuttinen ja suhteellinen lukumäärä kytkemättömät (CD27+IgD+), B-naiivit (IgD+CD27-CD24-) ja B-säätelysolut (CD24+CD27+) arvioidaan Lyse-No-Wash-protokollalla käyttämällä BD TruCountTM:a (Becton Dickinson).
• Liukoinen BAFF: se mitataan entsyymi-immunosorbenttimäärityksellä (ELISA)
• Geeniekspressiotutkimus: mRNA uutetaan kokoverestä Trizol Reagentilla ja mRNA-BAFF:n ja miRNA-15a:n kvantitatiivinen analyysi suoritetaan Real-Time PCR:llä käyttämällä spesifisiä TaqMan-koettimia käänteistranskription jälkeen cDNA:ssa.
• Tilastollinen analyysi. Tilastollinen analyysi suoritetaan SPSS®-tilastoohjelmistolla. SBAFF-, mRNA-BAFF-, miRNA-15a- ja eri B-solufenotyyppien keskimääräisten tasojen vertailu BAFF-var +- ja BAFF-var -potilaiden välillä kullakin käynnillä suoritetaan T-Student-testillä tai Mann Whitney-testillä, jos mahdollista. BAFF-var + ja BAFF-var -potilaiden sBAFF-, mRNA-BAFF-, miRNA-15a- ja B-solualapopulaatioiden tasojen keskimääräisen eron vertailu eri käyntiväleillä suoritetaan T-Student-testillä tai Mann Whitney -testillä. , jos soveliasta. BAFF-var:n vaikutusta yllä olevien immunologisten ja molekyylimuuttujien tasojen modifikaatioon arvioidaan edelleen moninkertaisella regressiolla, mukaan lukien riippumattomina muuttujina, samanaikaiset hoidot ja sairauden perusominaisuudet. Fisherin tarkka testi ja logistinen regressioanalyysi suoritetaan verratakseen vasteprosenttia, joka on arvioitu eri tehokkuusmittauksilla BAFF-var + ja BAFF-var - potilailla.