BAFF-var en tant que biomarqueur de la réponse au traitement B-déplétif dans le lupus érythémateux disséminé et la polyarthrite rhumatoïde (PREDICT)

CONTEXTE

Le lupus érythémateux disséminé (LES) et la polyarthrite rhumatoïde (PR) sont des maladies à médiation immunitaire multisystémique caractérisées par une pathogenèse complexe, où une activation anormale de la réponse immunitaire humorale, avec une surproduction d'auto-anticorps, s'est avérée avoir un rôle central.

Le stimulateur des lymphocytes B (BAFF) est une cible de cytokines et de médicaments qui est principalement produite par les monocytes et les neutrophiles. Il est essentiel pour l'activation, la différenciation et la survie des lymphocytes B. Il a été démontré que la surexpression de BAFF était associée à un schéma plus sévère de LES et corrélée à une positivité plus fréquente pour l'anti-Sm (OR 1,7 ; IC à 95 % 1,3, 2,2), un titre élevé d'anti-dsDNA (OR 1,5 ; IC à 95 % 1,1, 2,2), un C3 inférieur (OR 1,3 ; IC à 95 % 1,0, 1,8), une protéinurie plus élevée (OR 1,8 ; IC à 95 % 1,4, 2,4) et un risque accru de poussée (HR 1,86 ; IC à 95 % 1,29, 2,68). De même, des niveaux élevés de BAFF ont été observés dans le sang et le liquide synovial des patients atteints de PR et il a été démontré qu'ils étaient en corrélation avec une activité plus élevée de la maladie dans la PR.

Le belimumab et le rituximab sont la forme prototypique des thérapies ciblées sur les lymphocytes B actuellement approuvées pour le LES et la PR, respectivement.

Le belimumab, un anticorps monoclonal entièrement humanisé dirigé contre le BAFF, est le premier médicament biologique autorisé et approuvé pour une utilisation en association avec des immunosuppresseurs standard dans le LES. Les données des ECR ont démontré qu'une activité plus élevée de la maladie, une positivité anti-ADNdb, un faible complément et un traitement aux corticostéroïdes peuvent prédire un bénéfice plus élevé du belimumab. Cependant, environ 40% des sujets n'ont pas obtenu une réponse adéquate.

Le rituximab (RTX) est un anticorps monoclonal chimérique qui inhibe sélectivement le récepteur CD20 à la surface des lymphocytes B. L'utilisation du RTX, de préférence en association avec le méthotrexate, est indiquée chez les patients atteints de PR qui ne répondent pas au traitement par les immunosuppresseurs traditionnels. Bien qu'une plus grande efficacité ait été enregistrée chez les patients positifs pour les auto-anticorps (par ex. facteur rhumatoïde et peptide anti-citrulliné), également dans ce cas, environ 30 à 40 % des patients ne répondent pas de manière adéquate.

Une variante du gène TNFSF13B codant pour BAFF (BAFF-var), particulièrement fréquente en Sardaigne (fréquence allélique, 26,5 %) et progressivement moins fréquente dans le sud (5,7 % en Italie, 5,0 % en Espagne et au Portugal) et le nord de l'Europe (1,8 % au Royaume-Uni et en Suède), était associée à des maladies auto-immunes, dont le LES et la PR. La variante causale a été identifiée comme une variante d'insertion-délétion, produisant un transcrit plus court qui a échappé à l'inhibition du microARN et augmenté la production de BAFF soluble, qui à son tour a régulé à la hausse l'immunité humorale. En particulier, BAFF-var était associé à un niveau accru de BAFF soluble (taille d'effet 0,77 écarts-types (SD) ; P = 8,47 x10-150), IgG (0,31 SD, p = 1,68x10-12), IgA (0,31 ET, p=7,64x10-9), IgM (0,31 SD, p = 4,70x10-8), ainsi qu'un nombre accru de cellules B totales (0,18 SD, P = 4,23x10-12) et plusieurs sous-types, y compris le CD24 + CD27 + (comprenant la mémoire non commutée et commutée ) (0.22 SD, P=2.94x10-10) comme fortement associé. En outre, les données du transcriptome ont démontré que BAFF-var était un locus de trait quantitatif d'expression qui augmente l'expression de TNFSF13B (P = 2, 37 × 10-13). Cependant, les niveaux élevés d'ARNm ne pouvaient expliquer que 24 à 27 % de l'effet sur les protéines, indiquant qu'une augmentation du niveau de traduction était également probablement impliquée. À cet égard, les données indiquent que BAFF-var augmente les niveaux de BAFF solubles en favorisant la production d'un transcrit plus court moins inhibé par le microARN, tel que miR-15a6.

Connaître l'influence effective de BAFF-var dans les modifications immunologiques, moléculaires et cliniques induites par l'inhibition de BAFF a une importance cruciale dans la perspective d'une médecine personnalisée chez les patients atteints de LES et de PR.

OBJETS

• Objectif principal : Explorer la base immunologique d'un rôle potentiel de BAFF-var en tant que biomarqueur pronostique de la réponse au belimumab ou au rituximab chez les patients atteints de LED et de PR, respectivement. Plus en détail, l'étude vise à évaluer si l'état du porteur de BAFF-var influence les modifications liées au médicament des variables immunologiques et moléculaires, telles que : (a) la cytokine BAFF soluble (BAFFs), (b) l'ARNm-BAFF (c ) miARN-15a (d) Sous-populations de lymphocytes B.
• Objectifs secondaires : Explorer l'effet de BAFF-var sur le taux de réponse clinique au belimumab ou au rituximab, tel qu'évalué par différentes mesures de résultats.

CONCEPTION ET MÉTHODOLOGIE DE LA RECHERCHE

• Conception de l'étude : Le projet proposé est une étude longitudinale observationnelle
• Population : La distribution de BAFF-var et les modifications des variables immunologiques, moléculaires et cliniques, après le début du traitement avec un agent anti-BAFF, seront analysées sur une cohorte sarde monocentrique réelle de patients atteints de LES et de PR. À cet égard, le Sarde représente la population la plus appropriée pour ce type d'analyse en raison de la fréquence plus élevée de BAFF-var ; en effet la condition de porteur de BAFF-var est attendue chez 50 à 60% des patients. Environ 30 brevets consécutifs SLE et 30 patients consécutifs RA référés à l'unité de rhumatologie du département des sciences médicales et de santé publique de l'université et de la clinique universitaire de Cagliari seront recrutés.
• Collecte de données : démographiques (par ex. sexe, âge à l'inscription, âge d'apparition et de diagnostic), clinique (par ex. manifestations cumulatives et actives de la maladie, mesures clinimétriques), sérologiques (par ex. auto-anticorps, y compris anti-dsDNA, C3 et C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) et thérapeutiques (par exemple, les thérapies passées et actuelles) seront collectées.
• Génotypage BAFF : Pour le génotypage BAFF, des échantillons de sang total seront prélevés sur EDTA lors de l'inscription. L'ADNg sera extrait par la méthode de relargage selon le protocole standard. Le test Customs TaqMan (Thermo Fisher Scientific) spécialement conçu pour génotyper les variants BAFF d'intérêt sera utilisé avec une PCR en temps réel spécifique à l'allèle dans tous les échantillons.
• Phénotypage des lymphocytes B : la cytométrie en flux sera utilisée pour établir le profil des sous-populations de lymphocytes B chez les 30 patients atteints de LES inscrits. Le nombre de lymphocytes B (CD45+CD19+), ainsi que le nombre absolu et relatif de transition B (CD24+CD38+), sécrétant des anticorps (ASC, CD27+CD38+), mémoire B commutée (CD27+IgD-), mémoire B les cellules non commutées (CD27+IgD+), B naïves (IgD+CD27-CD24-) et B régulatrices (CD24+CD27+) seront évaluées par le protocole Lyse-No-Wash en utilisant BD TruCountTM (Becton Dickinson).
• BAFF soluble : il sera mesuré par dosage immuno-enzymatique (ELISA)
• Étude de l'expression génique : l'ARNm sera extrait du sang total par le réactif Trizol et l'analyse quantitative de l'ARNm-BAFF et du miARN-15a sera réalisée par PCR en temps réel à l'aide de sondes TaqMan spécifiques, après transcription inverse en ADNc.
• Analyses statistiques. L'analyse statistique sera effectuée à l'aide du logiciel statistique SPSS®. La comparaison des niveaux moyens de sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a et différents phénotypes de lymphocytes B entre BAFF-var + et BAFF-var - les patients à chaque visite seront effectués par le test T-Student ou le test de Mann Whitney, le cas échéant. Comparaison de la différence moyenne des niveaux de sBAFF, mRNA-BAFF, miRNA-15a et sous-populations de lymphocytes B entre BAFF-var + et BAFF-var - les patients aux différents intervalles de visites seront effectués par le test T-Student ou le test de Mann Whitney , le cas échéant. L'effet de BAFF-var sur la modification des niveaux des variables immunologiques et moléculaires ci-dessus sera évalué plus en détail par régression multiple, y compris en tant que variables indépendantes, traitements concomitants et caractéristiques de base de la maladie. Le test exact de Fisher et l'analyse de régression logistique seront effectués pour comparer le taux de réponse, évalué par différentes mesures d'efficacité, chez les patients BAFF-var + et BAFF-var -.