BAFF-var как биомаркер ответа на B-деплетивную терапию при системной красной волчанке и ревматоидном артрите (PREDICT)

ЗАДНИЙ ПЛАН

Системная красная волчанка (СКВ) и ревматоидный артрит (РА) представляют собой мультисистемные иммуноопосредованные заболевания, характеризующиеся сложным патогенезом, в которых ключевую роль играет аномальная активация гуморального иммунного ответа с гиперпродукцией аутоантител.

Стимулятор В-лимфоцитов (BAFF) представляет собой цитокин и лекарственную мишень, которая в основном продуцируется моноцитами и нейтрофилами. Он необходим для активации, дифференцировки и выживания В-клеток. Было показано, что сверхэкспрессия BAFF связана с более тяжелым течением СКВ и коррелирует с более частым положительным результатом на анти-Sm (ОШ 1,7; 95% ДИ 1,3, 2,2), анти-дцДНК с высоким титром (ОШ 1,5; 95% ДИ 1,1, 2,2), более низкий C3 (ОШ 1,3; 95% ДИ 1,0, 1,8), более высокая протеинурия (ОШ 1,8; 95% ДИ 1,4, 2,4) и повышенный риск обострения (ОР 1,86; 95% ДИ 1,29, 2,68). Точно так же высокие уровни BAFF наблюдались в крови и синовиальной жидкости пациентов с РА, и было показано, что они коррелируют с более высокой активностью заболевания при РА.

Белимумаб и ритуксимаб являются прототипами препаратов, нацеленных на В-клетки, которые в настоящее время одобрены для лечения СКВ и РА соответственно.

Белимумаб, полностью гуманизированное моноклональное антитело, направленное против BAFF, является первым биологическим препаратом, лицензированным и одобренным для использования в комбинации со стандартными иммунодепрессантами при СКВ. Данные РКИ показали, что более высокая активность заболевания, положительная реакция на анти-дцДНК, низкий уровень комплемента и лечение кортикостероидами могут предсказать более высокую пользу от белимумаба. Однако около 40% испытуемых не добились адекватного ответа.

Ритуксимаб (RTX) представляет собой химерное моноклональное антитело, которое избирательно ингибирует рецептор CD20 на поверхности В-лимфоцитов. Применение RTX, предпочтительно в комбинации с метотрексатом, показано пациентам с РА, не отвечающим на лечение традиционными иммунодепрессантами. Хотя более высокая эффективность была зарегистрирована у пациентов с положительным результатом на аутоантитела (например, ревматоидный фактор и антицитруллиновый пептид), также в этом случае около 30-40% пациентов неадекватно реагируют.

Вариант гена TNFSF13B, кодирующий BAFF (BAFF-var), особенно распространенный на Сардинии (частота аллелей 26,5%) и постепенно менее распространенный в южной (5,7% в Италии, 5,0% в Испании и Португалии) и северной Европе (1,8%). в Великобритании и Швеции) был связан с аутоиммунными заболеваниями, включая СКВ и РА. Причинный вариант был идентифицирован как вариант с инсерцией-делецией, приводящий к более короткому транскрипту, который избегал ингибирования микроРНК и увеличивал продукцию растворимого BAFF, что, в свою очередь, повышало регуляцию гуморального иммунитета. В частности, BAFF-var ассоциировался с повышенным уровнем растворимого BAFF (величина эффекта 0,77 стандартного отклонения (СО); P = 8,47 x 10-150), IgG (0,31 SD, p = 1,68 x 10-12), IgA (0,31 СО, р=7,64х10-9), IgM (0,31 SD, p=4,70x10-8), а также повышенное количество общих B-клеток (0,18 SD, P=4,23x10-12) и несколько подтипов, в том числе CD24+CD27+ (включая некоммутируемую и коммутируемую память). ) (0,22 SD, P=2,94x10-10) как сильно связанный. Кроме того, данные транскриптома продемонстрировали BAFF-var как локус количественного признака экспрессии, который увеличивает экспрессию TNFSF13B (P = 2,37 × 10-13). Однако повышенные уровни мРНК могли объяснить только 24-27% влияния на белок, что указывает на то, что, вероятно, также было задействовано увеличение уровня трансляции. В этом отношении данные показывают, что BAFF-var повышает уровни растворимого BAFF, способствуя продукции более короткого транскрипта, который в меньшей степени ингибируется микроРНК, такой как miR-15a6.

Знание эффективного влияния BAFF-var на иммунологические, молекулярные и клинические модификации, вызванные ингибированием BAFF, имеет решающее значение в перспективе персонализированной медицины у пациентов с СКВ и РА.

ОБЪЕКТЫ

• Основная цель: изучить иммунологическую основу потенциальной роли BAFF-var в качестве прогностического биомаркера ответа на белимумаб или ритуксимаб при лечении пациентов с СКВ и РА соответственно. Более подробно, исследование направлено на оценку того, влияет ли состояние носителя BAFF-var на связанные с лекарственным средством модификации иммунологических и молекулярных переменных, таких как: (а) растворимый цитокин BAFF (BAFFs), (b) мРНК-BAFF (c ) миРНК-15а (г) субпопуляции В-клеток.
• Второстепенные цели: изучить влияние BAFF-var на частоту клинического ответа на белимумаб или ритуксимаб, оцениваемое по различным показателям исхода.

ДИЗАЙН И МЕТОДОЛОГИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

• Дизайн исследования: Предлагаемый проект представляет собой обсервационное лонгитюдное исследование.
• Популяция: распределение BAFF-var и модификации иммунологических, молекулярных и клинических переменных после начала лечения анти-BAFF агентом будут проанализированы на реальной моноцентрической сардинской когорте пациентов с СКВ и РА. В этом отношении сардинцы представляют собой наиболее подходящую популяцию для такого рода анализа из-за более высокой частоты BAFF-var; действительно, состояние носительства BAFF-var ожидается у 50-60% пациентов. Будет набрано около 30 последовательных патентов на СКВ и 30 последовательных патентов на РА, переданных в отделение ревматологии Департамента медицинских наук и общественного здравоохранения Университета и Университетской клиники Кальяри.
• Сбор данных: демографические (например, пол, возраст при зачислении, возраст начала заболевания и диагноз), клинические проявления (например, кумулятивные и активные проявления заболевания, клиниметрические показатели), серологические (например, будут собраны аутоантитела, включая анти-дцДНК, C3 и C4, IgG, IgA, IgM, RF, ACPA) и терапевтические (например, прошлые и текущие методы лечения).
• Генотипирование BAFF: для генотипирования BAFF образцы цельной крови будут собраны в ЭДТА при зачислении. геномная ДНК будет извлечена методом высаливания в соответствии со стандартным протоколом. Таможенный анализ TaqMan (Thermo Fisher Scientific), специально разработанный для генотипирования интересующих вариантов BAFF, будет использоваться с аллель-специфичной ПЦР в реальном времени во всех образцах.
• Фенотипирование В-клеток: проточная цитометрия будет использоваться для профилирования субпопуляций В-клеток у 30 зарегистрированных пациентов с СКВ. Количество В-клеток (CD45+CD19+), а также абсолютное и относительное количество В-переходных (CD24+CD38+), антителосекретирующих (ASC, CD27+CD38+), В-клеток с переключением (CD27+IgD-), В-памяти непереключенные (CD27+IgD+), B-наивные (IgD+CD27-CD24-) и B-регуляторные (CD24+CD27+) клетки будут оцениваться по протоколу Lyse-No-Wash с использованием BD TruCountTM (Becton Dickinson).
• Растворимый BAFF: будет измеряться с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA)
• Исследование экспрессии генов: мРНК будет извлечена из цельной крови с помощью реагента Trizol, а количественный анализ мРНК-BAFF и микроРНК-15a будет выполнен с помощью ПЦР в реальном времени с использованием специфических зондов TaqMan после обратной транскрипции в кДНК.
• Статистический анализ. Статистический анализ будет выполняться с использованием статистического программного обеспечения SPSS®. Сравнение средних уровней sBAFF, мРНК-BAFF, микроРНК-15a и различных фенотипов В-клеток между BAFF-var+ и BAFF-var-пациентов при каждом посещении будет выполняться с помощью Т-критерия Стьюдента или критерия Манна-Уитни, если это применимо. Сравнение средней разницы уровней sBAFF, мРНК-BAFF, миРНК-15a и субпопуляций В-клеток между BAFF-var+ и BAFF-var-пациентами в разные интервалы посещений будет выполнено с помощью Т-критерия Стьюдента или критерия Манна-Уитни. , если уместно. Влияние BAFF-var на изменение уровней иммунологических и молекулярных переменных, указанных выше, будет дополнительно оцениваться с помощью множественной регрессии, в том числе в качестве независимых переменных, сопутствующего лечения и исходных признаков заболевания. Точный критерий Фишера и логистический регрессионный анализ будут выполняться для сравнения частоты ответов, оцениваемой с помощью различных показателей эффективности, у пациентов с BAFF-var+ и BAFF-var-.